Observationele studie van de associatie tussen parodontitis en hart- en vaatziekten

Een mogelijk verband tussen parodontitis en hart- en vaatziekten werd voor het eerst verondersteld in de jaren tachtig. Epidemiologische studies die de afgelopen 20 jaar zijn uitgevoerd, hebben een sterke correlatie aangetoond tussen parodontitis en hart- en vaatziekten. De literatuur is echter enigszins verdeeld, aangezien sommige onderzoeken een matige correlatie hebben aangetoond, terwijl andere onafhankelijke (niet-significante) correlaties tussen de twee hebben aangetoond. Dit laat een leemte achter in de kennis van de onderzoekers die door specifieke studies moet worden samengebracht. Er zijn rapporten gemaakt die suggereren dat 52% van de bestudeerde atherosclerotische plaques dezelfde pathogenen bevatten die parodontitis veroorzaken. Dit is de reden dat dit de bacteriën zijn waarop in de loop van dit onderzoek zal worden gefocust.

Parodontitis, bekend als gingivitis of parodontitis, wordt veroorzaakt door de aanwezigheid van bacteriën in de tandvleespockets in de mond die na verloop van tijd systemische ontstekingen kunnen veroorzaken door de productie van endotoxinen. Enkele voorbeelden van de bacteriën die parodontitis veroorzaken, zijn Porphyromonas gingivalis en Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Dit zijn gramnegatieve, anaerobe bacteriën die kunnen gedijen in de subgingivale ruimte nadat ze zich met succes hebben gevestigd. Van deze twee bacteriën is bekend dat ze orale epitheelcellen binnendringen, waardoor de mogelijkheid ontstaat dat ze epitheelcellen elders kunnen binnendringen, zoals in kransslagaders. Deze bacteriën zullen van de patiënt worden gekweekt en de relatieve hoeveelheden ervan, zoals bepaald door kweektechnieken, zullen worden gebruikt om de prevalentie van parodontitis bij de patiënt te beoordelen. P. gingivalis is van bijzonder belang omdat bekend is dat het wordt aangetroffen bij patiënten met actieve parodontitis en niet vaak wordt aangetroffen bij patiënten zonder parodontitis. Het kan worden geïdentificeerd aan de hand van het zwarte pigment dat bij het kweken wordt geproduceerd. Tryptic Soy-Serum-Bacitracin-Vancomycin (TSBV) Agar is een selectief medium dat A. actinomycetemcomitans kan isoleren. De identiteit van A. actinomycetemcomitans kan worden bevestigd op basis van de groei van "sterachtige" kolonies op de TSBV-agar die catalase-positief zijn. De relatieve hoeveelheid van deze bacteriën, zoals bepaald door kweek, zal worden gebruikt om te correleren met het niveau van coronaire hartziekte op basis van de groepen waaraan elk individu is toegewezen. Dit is hoe de basis voor een verband tussen de twee voorwaarden kan worden bepaald.

Systemische ontsteking treedt op als gevolg van het vrijkomen van pro-inflammatoire cytokines als reactie op een infectie. Enkele van de vrijgekomen cytokines zijn onder meer hooggevoelig C-reactief proteïne (hs-CRP), interleukine-1 (IL-1) en interleukine-6 ​​(IL-6). Hs-CRP is een eiwit dat actief is tijdens de acute fase-reactie op ontsteking. Het is aangetoond dat het gehalte ervan in het bloed aanzienlijk verhoogd is bij chronische ontstekingen en er is consequent vastgesteld dat het verhoogd is bij patiënten met acuut coronair syndroom. IL-1 is een pro-inflammatoir cytokine dat ook vrijkomt als gevolg van systemische ontsteking. Specifiek is gevonden dat het wordt uitgescheiden als reactie op lipopolysaccharide (LPS) van gramnegatieve bacteriën en er is vastgesteld dat het verhoogd is bij patiënten met een verhoogde parodontitis. IL-6 is, net als IL-1, een pro-inflammatoir cytokine dat deel uitmaakt van de acute fase-respons op infectie. Het is sterk gecorreleerd met toenemende niveaus van coronaire hartziekte en is zelfs aangetoond als een voorspellende marker van mortaliteit bij coronaire hartziekte (CAD). Naast zijn rol bij CAD, is gevonden dat IL-6 ook verhoogd is bij parodontitis, wat de mogelijkheid creëert voor de basis van het verband tussen deze twee ziekten.

Het doel van deze studie is om een ​​beter begrip te krijgen van de relatie tussen parodontitis en coronaire hartziekte door de ernst van coronaire hartziekte te correleren met de aanwezigheid en hoeveelheid van de parodontale pathogenen P. gingivalis en A. actinomycetemcomitans. Het niveau van systemische ontsteking veroorzaakt door deze pathogenen en coronaire hartziekte zal ook worden beoordeeld. Dit zal bepalen of coronaire hartziekte meer kan worden geassocieerd met een van deze specifieke pathogenen dan met de andere en welke niveaus van systemische ontsteking kunnen worden geassocieerd met beide aandoeningen samen.

Monsters zullen worden verkregen uit parodontaal weefsel, gekweekt, en de hoeveelheid van de aanwezige gespecificeerde pathogenen zal worden gecorreleerd met het type en de omvang van de cardiovasculaire ziekte van de patiënt. Er zullen ook bloedonderzoeken worden uitgevoerd om de mate van systemische ontsteking te beoordelen die optreedt als gevolg van parodontitis en hart- en vaatziekten.

Onderwerpen worden toegewezen aan een van de 3 groepen op basis van hun cardiovasculaire status:

• Groep 1 omvat patiënten zonder bekende voorgeschiedenis van CAD.
• Groep 2 omvat patiënten met een bekende voorgeschiedenis van CAD zonder eerder myocardinfarct (MI).
• Groep 3 omvat patiënten met een bekende voorgeschiedenis van CAD en eerder MI.

Grafieken voor patiënten die in de cardiologiekliniek worden gezien, zullen vooraf worden gescreend door een lid van het onderzoeksteam om te bepalen of de patiënt in aanmerking komt voor de studie. Patiënten zullen toestemming krijgen in een privé-omgeving en een cardiovasculaire ziektegeschiedenis die relevant is voor het onderzoek zal worden afgenomen voor elke patiënt die toestemming geeft voor deelname aan het onderzoek. Schoon flosdraad dat is gebruikt, zal worden gebruikt om een ​​monster van tandvleesvocht tussen de ondertanden van de patiënt op te vangen. Er zijn geen maatregelen genomen om de floss te steriliseren, dus geschikte aseptische technieken, waaronder het gebruik van steriele handschoenen om kruisbesmetting te voorkomen. Er worden drie monsters genomen: in de middellijn van de tanden, achter de rechter of linker laterale snijtand en voor de rechter of linker eerste kies. De beslissing om de rechter- of linkerkant van de mond van de patiënt te bemonsteren, is willekeurig (coinflip), tenzij de patiënt aan één kant tanden mist en het monster moet worden genomen van de kant die een goed monster oplevert. Er moeten minimaal 2 van de 3 monsters worden genomen. Deze monsters worden in 3 gelabelde (volgens studie-identificatienummer en plaats van monster) verzegelde flesjes met thioglycollaatbouillon geplaatst en gedurende 48 uur gekweekt. Vervolgens wordt met behulp van een pipet een monster uit de bodem van het thioglycollaatmedium verwijderd (om anaerobe bacteriën te extraheren) en op specifieke media gekweekt op de aanwezigheid van P. gingivalis en A. actinomycetemcomitans met behulp van anaerobe voorzorgsmaatregelen in de microbiologie van het Universitair Medisch Centrum (UMC). laboratorium. P. gingivalis zal worden gekweekt op een gespecialiseerde Columbia-agar aangevuld met schapenbloed, bacitracine, colistine en nalidixinezuur om te selecteren voor de isolatie van P. gingivalis. A. actinomycetemcomitans kan worden geïsoleerd met behulp van een gespecialiseerde tryptische soja-serum-bacitracine-vancomycine (TSBV) agar, een gespecialiseerde agar die grampositieve en gramnegatieve aeroben en anaëroben remt. Elk monster wordt uitgestreken op een agarplaat die is gelabeld met de studie-ID en de tandlocatie. De bacteriën worden gekweekt met behulp van de quad-streak-methode en gedurende 24-48 uur gekweekt en de pathogene bacteriën worden geïdentificeerd. P. gingivalis zal worden geïdentificeerd op basis van de groei van zwart gepigmenteerde kolonies op de selectieve agar en A. actinomycetemcomitans zullen worden geïdentificeerd op basis van de groei van sterachtige kolonies op de TSBV-agar. Het niveau van parodontitis bij de patiënt wordt beoordeeld aan de hand van de hoeveelheid groei op de platen, met een nummer toegewezen aan elk kwadrant waarin de bacteriën groeien. als ze alleen in het eerste kwadrant groeien, krijgen ze een nummeraanduiding van 1 en groei in het tweede tot en met vierde kwadrant respectievelijk met 2 tot en met 4. Met behulp van deze methode kan het niveau van de bacteriën worden gekwantificeerd, waarbij 4 de aanduiding is voor de hoogste relatieve hoeveelheid bacteriën. Het niveau van elke ziekteverwekker die in de mond van de patiënt wordt gevonden, zal worden gecorreleerd met de ernst van coronaire hartziekte om te bepalen of er een significante correlatie is. Ook wordt bepaald of een van de ziekteverwekkers gecorreleerd kan worden met de ernst.

Naast de tandvleesafname wordt een klein deel (3 ml of 0,6 theelepel) van het bloed van de patiënt gebruikt om te testen op hs-CRP, IL-6 en IL-1 als systemische ontstekingsmarkers. Het gebruikte monster wordt genomen tijdens het eerste bezoek aan de kliniek wanneer de patiënt toestemming heeft gegeven en het tandvleesmonster wordt genomen. Het monster zal worden getrokken door een verpleegkundige om de nodige testen te verkrijgen. Voor elke test wordt 1 ml (0,2 theelepel) serum afgenomen (0,6 theelepel in totaal) en voor analyse naar het UMC pathologielaboratorium gestuurd. Deze niveaus zullen worden vergeleken met de normale waarden van IL-1 (0-5 pg/ml) en IL-6 (5-15 pg/ml), terwijl hs-CRP zal worden gecorreleerd op basis van toenemende niveaus. Hierdoor kan het niveau van systemische infectie worden bepaald dat wordt veroorzaakt door parodontitis (gebaseerd op IL-1-niveau), coronaire hartziekte (gebaseerd op hs-CRP-niveau) of beide (gebaseerd op IL-6-niveau). Individuele resultaten worden geregistreerd voor statistische analyse.