치주질환과 심혈관질환의 연관성에 대한 관찰연구

치주 질환과 심혈관 질환 사이의 가능한 연관성은 1980년대에 처음으로 가정되었습니다. 지난 20년 동안 수행된 역학 연구는 치주 질환과 심혈관 질환 사이에 강한 상관관계가 있음을 보여주었습니다. 그러나 일부 연구는 중간 정도의 상관관계를 보인 반면 다른 연구는 둘 사이의 독립적인(중요하지 않은) 상관관계를 보여주었기 때문에 문헌은 다소 나누어져 있습니다. 이것은 특정 연구를 통해 함께 가져와야 하는 조사자의 지식에 공백을 남깁니다. 연구된 죽상동맥경화반의 52%가 치주염을 유발하는 동일한 병원균을 함유하고 있는 것으로 밝혀졌다는 보고가 있었습니다. 이것이 이 연구가 진행되는 동안 초점을 맞출 박테리아인 이유입니다.

치은염 또는 치주염으로 알려진 치주 질환은 시간이 지남에 따라 내독소 생성을 통해 전신 염증을 일으킬 수 있는 구강 내 잇몸 주머니에 박테리아가 존재하여 발생합니다. 치주 질환을 일으키는 박테리아의 예로는 Porphyromonas gingivalis와 Aggregatibacter actinomycetemcomitans가 있습니다. 이들은 성공적으로 확립된 후 치은연하 공간에서 번성할 수 있는 그람 음성 혐기성 박테리아입니다. 이 두 박테리아는 구강 상피 세포를 침범하는 것으로 알려져 있어 관상 혈관과 같은 다른 곳에서 상피 세포를 침범할 수 있는 가능성을 만듭니다. 이들 박테리아는 환자로부터 배양될 것이며 배양 기술에 의해 결정된 이들의 상대적인 양은 환자의 치주 질환 유병률을 평가하는 데 사용될 것입니다. P. gingivalis는 활동성 치주질환 환자에서 발견되고 치주질환이 없는 환자에서는 흔히 발견되지 않는 것으로 알려져 있어 특히 중요하다. 배양시 생성되는 흑색 색소로 확인할 수 있다. Tryptic Soy-Serum-Bacitracin-Vancomycin (TSBV) Agar는 A. actinomycetemcomitans를 분리할 수 있는 선택 배지입니다. A. actinomycetemcomitans의 정체는 카탈라제 양성인 TSBV Agar에서 "별모양" 콜로니의 성장을 기반으로 확인할 수 있습니다. 배양에 의해 결정된 이러한 박테리아의 상대적인 양은 각 피험자가 할당된 그룹을 기준으로 관상 동맥 질환의 수준과 상관관계를 나타내는 데 사용됩니다. 이것은 두 조건 사이의 연관성에 대한 기초가 결정될 수 있는 방법입니다.

전신 염증은 감염에 대한 반응으로 전염증성 사이토카인의 방출 결과로 발생합니다. 방출된 일부 사이토카인에는 고감도 C 반응성 단백질(hs-CRP), 인터루킨-1(IL-1) 및 인터루킨-6(IL-6)이 포함됩니다. Hs-CRP는 염증에 대한 급성기 반응 동안 활성화되는 단백질입니다. 혈중 농도는 만성 염증에서 현저하게 증가하는 것으로 나타났으며 급성 관상동맥 증후군 환자에서 지속적으로 증가하는 것으로 나타났습니다. IL-1은 전신 염증의 결과로도 방출되는 전염증성 사이토카인입니다. 구체적으로, 그람음성균의 지질다당류(LPS)에 반응하여 분비되는 것으로 밝혀졌으며 치주질환이 증가한 환자에서 증가하는 것으로 밝혀졌다. IL-1과 마찬가지로 IL-6은 감염에 대한 급성기 반응의 일부인 전염증성 사이토카인입니다. 그것은 관상 동맥 질환의 증가 수준과 강한 상관 관계가 있으며 관상 동맥 질환(CAD)에서 사망률의 예측 마커로 입증되었습니다. CAD에서의 역할 외에도 IL-6는 치주 질환에서도 증가하는 것으로 밝혀져 이 두 질병 사이의 연결 기반에 대한 가능성을 만듭니다.

이 연구의 목적은 관상동맥질환의 중증도와 치주병균인 P. gingivalis 및 A. actinomycetemcomitans의 존재 및 양을 연관시켜 치주질환과 관상동맥질환의 관계를 더 잘 이해하는 것입니다. 이러한 병원체 및 관상 동맥 질환에 의해 유발되는 전신 염증 수준도 평가됩니다. 이를 통해 관상동맥 질환이 다른 병원체보다 이러한 특정 병원체 중 하나와 더 많이 연관될 수 있는지, 그리고 이 두 가지 조건이 함께 연관될 수 있는 전신 염증 수준이 결정됩니다.

샘플은 치주 조직에서 채취하여 배양하고, 존재하는 특정 병원체의 양은 환자의 심혈관 질환의 유형 및 정도와 상관 관계가 있습니다. 치주 질환 및 심혈관 질환의 결과로 발생하는 전신 염증 수준을 평가하기 위해 혈액 검사도 실시됩니다.

피험자는 심혈관 상태에 따라 3개 그룹 중 하나에 배정됩니다.

• 그룹 1에는 알려진 CAD 병력이 없는 환자가 포함됩니다.
• 그룹 2에는 이전의 심근 경색증(MI) 없이 알려진 CAD 병력이 있는 환자가 포함됩니다.
• 그룹 3에는 알려진 CAD 병력 및 이전 MI가 있는 환자가 포함됩니다.

환자가 연구에 적격한지 결정하기 위해 연구 팀의 구성원이 심장병 클리닉에서 볼 환자에 대한 차트를 사전 선별할 것입니다. 환자는 비공개 환경에서 동의를 받고 연구 참여에 동의한 각 환자에 대해 연구와 관련된 심혈관 질환 병력을 수집합니다. 깨끗한 치실을 사용하여 환자의 아랫니 사이에서 치은액 샘플을 채취합니다. 치실을 멸균하기 위한 조치가 취해지지 않았으므로 교차 오염을 방지하기 위해 멸균 장갑을 사용하는 등 적절한 무균 기술을 사용합니다. 치아 정중선, 오른쪽 또는 왼쪽 측절치 뒤, 오른쪽 또는 왼쪽 제1대구치 앞의 세 가지 샘플이 수집됩니다. 환자 입의 오른쪽 또는 왼쪽을 샘플링하는 결정은 환자가 한쪽 치아가 없는 경우를 제외하고 무작위로 결정되며(동전 뒤집기) 적절한 샘플을 얻을 수 있는 쪽에서 샘플을 채취해야 합니다. 3개 샘플 중 2개 이상을 확보해야 합니다. 이러한 샘플은 티오글리콜레이트 국물의 밀봉된 바이알(연구 식별 번호 및 샘플 부위에 따라) 3개의 라벨이 부착된 바이알에 배치되고 48시간 동안 배양됩니다. 그런 다음 (혐기성 박테리아를 추출하기 위해) 피펫을 사용하여 티오글리콜레이트 배지의 바닥에서 샘플을 제거하고 UMC(University Medical Center) 미생물학에서 혐기성 예방 조치를 사용하여 P. gingivalis 및 A. actinomycetemcomitans의 존재에 대해 특정 배지에서 배양합니다. 실혐실. P. gingivalis는 P. gingivalis의 분리를 위해 선택하기 위해 양의 혈액, 바시트라신, 콜리스틴 및 nalidixic acid가 보충된 특수 컬럼비아 한천에서 배양됩니다. A. actinomycetemcomitans는 그람 양성 및 그람 음성 호기성 세균과 혐기성 세균을 억제하는 특수 한천인 특수 트립신 대두-혈청-바시트라신-반코마이신(TSBV) 한천을 사용하여 분리할 수 있습니다. 각 샘플은 연구 ID 및 치아 위치로 레이블이 지정된 한천 플레이트에 줄무늬로 표시됩니다. 균을 4줄 배양법으로 배양하여 24-48시간 배양하여 병원균을 동정하게 됩니다. P. gingivalis는 선택적 한천에서 흑색 색소 콜로니의 성장을 기반으로 식별되고 A. actinomycetemcomitans는 TSBV 한천에서 별 모양 콜로니의 성장을 기반으로 식별됩니다. 환자의 치주 질환 수준은 박테리아가 자라는 각 사분면에 할당된 숫자와 함께 플레이트의 성장 양으로 평가됩니다. 1사분면에서만 자라는 경우 1의 숫자 지정이 지정되고 2사분면에서 4사분면까지의 성장은 각각 2~4로 지정됩니다. 이 방법을 사용하여 박테리아의 수준을 정량화할 수 있으며, 4는 상대적으로 가장 높은 박테리아 양을 나타냅니다. 환자의 구강에서 발견되는 각 병원체의 수준은 관상 동맥 질환의 중증도와 상관 관계가 있는지 확인하기 위해 상관 관계가 있습니다. 또한 병원체 중 하나가 중증도와 상관관계가 있는지도 결정됩니다.

치은 샘플링 외에도 환자 혈액의 작은 부분(3mL 또는 0.6tsp)을 사용하여 hs-CRP, IL-6 및 IL-1을 염증의 전신 마커로 테스트합니다. 사용된 샘플은 환자가 동의하고 치은 샘플을 채취한 초기 클리닉 방문 중에 채취됩니다. 필요한 검사를 받기 위해 간호사가 샘플을 채취합니다. 각 테스트(총 0.6tsp)에 대해 1mL(0.2tsp)의 혈청을 채취하여 분석을 위해 UMC 병리 실험실로 보냅니다. 이러한 수준은 IL-1(0-5pg/mL) 및 IL-6(5-15pg/mL)의 정상 값과 비교되며 hs-CRP는 증가하는 수준에 따라 상관 관계가 있습니다. 이를 통해 치주염(IL-1 수준 기준), 관상 동맥 질환(hs-CRP 수준 기준) 또는 둘 다(IL-6 수준 기준)로 인한 전신 감염 수준을 결정할 수 있습니다. 개별 결과는 통계 분석을 위해 기록됩니다.