Observační studie asociace mezi onemocněním parodontu a kardiovaskulárním onemocněním

Možná souvislost mezi onemocněním parodontu a kardiovaskulárním onemocněním byla poprvé vyslovena v 80. letech 20. století. Epidemiologické studie provedené za posledních 20 let prokázaly silnou korelaci mezi onemocněním parodontu a kardiovaskulárním onemocněním. Literatura je však poněkud rozdělena, protože některé studie prokázaly mírnou korelaci, zatímco jiné prokázaly nezávislé (nevýznamné) korelace mezi těmito dvěma. To zanechává mezeru ve znalostech vyšetřovatelů, které je třeba spojit prostřednictvím konkrétních studií. Objevily se zprávy naznačující, že 52 % studovaných aterosklerotických plaků obsahuje stejné patogeny, které způsobují parodontitidu. To je důvod, proč se na tyto bakterie zaměříme v průběhu této studie.

Parodontální onemocnění, známé buď jako gingivitida nebo parodontitida, je způsobeno přítomností bakterií v gingiválních kapsách v ústech, které mohou časem způsobit systémový zánět prostřednictvím produkce endotoxinu. Některé příklady bakterií, které způsobují periodontální onemocnění, zahrnují Porphyromonas gingivalis a Agregatibacter actinomycetemcomitans. Jedná se o gramnegativní anaerobní bakterie, které jsou schopny prosperovat v subgingiválním prostoru poté, co se úspěšně usadí. O těchto dvou bakteriích je známo, že napadají ústní epiteliální buňky, což vytváří možnost, že by mohly napadnout epiteliální buňky jinde, například v koronárních cévách. Tyto bakterie budou kultivovány od pacienta a jejich relativní množství, jak je stanoveno kultivačními technikami, bude použito k posouzení prevalence periodontálního onemocnění u pacienta. P. gingivalis má zvláštní význam, protože je známo, že se vyskytuje u pacientů s aktivním onemocněním parodontu a běžně se nevyskytuje u pacientů bez onemocnění parodontu. Lze jej identifikovat podle černého pigmentu produkovaného při kultivaci. Tryptic Soy-Serum-Bacitracin-Vancomycin (TSBV) Agar je selektivní médium, které je schopno izolovat A. actinomycetemcomitans. Identita A. actinomycetemcomitans může být potvrzena na základě růstu „hvězdovitých“ kolonií na agaru TSBV, které jsou kataláza pozitivní. Relativní množství těchto bakterií, jak je stanoveno kulturou, bude použito ke korelaci s úrovní onemocnění koronárních tepen na základě skupin, do kterých je každý subjekt přiřazen. Takto lze určit základ pro spojení mezi těmito dvěma podmínkami.

K systémovému zánětu dochází v důsledku uvolňování prozánětlivých cytokinů v reakci na infekci. Některé z uvolněných cytokinů zahrnují vysoce citlivý C-reaktivní protein (hs-CRP), interleukin-1 (IL-1) a interleukin-6 (IL-6). Hs-CRP je protein, který je aktivní během reakce akutní fáze na zánět. Bylo prokázáno, že jeho hladina v krvi je výrazně zvýšená u chronického zánětu a trvale se zjistilo, že je zvýšená u pacientů s akutními koronárními syndromy. IL-1 je prozánětlivý cytokin, který se také uvolňuje v důsledku systémového zánětu. Konkrétně bylo zjištěno, že je vylučován v reakci na lipopolysacharid (LPS) z gramnegativních bakterií a bylo zjištěno, že je zvýšený u pacientů se zvýšeným onemocněním parodontu. IL-6, stejně jako IL-1, je prozánětlivý cytokin, který je součástí reakce akutní fáze na infekci. Silně koreluje se zvyšujícími se úrovněmi onemocnění koronárních tepen a byl dokonce prokázán jako prediktivní marker mortality u onemocnění koronárních tepen (CAD). Kromě jeho role v CAD bylo také zjištěno, že IL-6 je zvýšený u onemocnění parodontu, což vytváří možnost pro základ spojení mezi těmito dvěma onemocněními.

Cílem této studie je dosáhnout lepšího porozumění vztahu mezi onemocněním parodontu a onemocněním koronárních tepen pomocí korelace závažnosti onemocnění koronárních tepen s přítomností a množstvím parodontálních patogenů P. gingivalis a A. actinomycetemcomitans. Bude také hodnocena úroveň systémového zánětu způsobeného těmito patogeny a onemocnění koronárních tepen. To určí, zda onemocnění koronárních tepen může být spojeno s jedním z těchto specifických patogenů více než s druhým a jaké úrovně systémového zánětu mohou být spojeny s oběma těmito stavy dohromady.

Vzorky budou odebrány z periodontální tkáně, kultivovány a množství přítomných specifikovaných patogenů bude korelováno s typem a rozsahem pacientova kardiovaskulárního onemocnění. Budou také provedeny krevní testy, aby se posoudila úroveň systémového zánětu vyskytujícího se v důsledku onemocnění parodontu a kardiovaskulárního onemocnění.

Subjekty budou zařazeny do jedné ze 3 skupin na základě jejich kardiovaskulárního stavu:

• Skupina 1 bude zahrnovat pacienty bez známé anamnézy ICHS.
• Skupina 2 bude zahrnovat pacienty se známou anamnézou ICHS bez předchozího infarktu myokardu (IM).
• Skupina 3 bude zahrnovat pacienty se známou anamnézou ICHS a předchozím IM.

Diagramy pro pacienty, které mají být vidět na kardiologické klinice, budou předem prozkoumány členem studijního týmu, aby se zjistilo, zda je pacient způsobilý pro studii. Pacienti budou souhlasit v soukromém prostředí a každému pacientovi, který souhlasí s účastí ve studii, bude odebrána anamnéza kardiovaskulárního onemocnění související se studií. Čistá nit, která byla použita, bude použita k odběru vzorku gingivální tekutiny z prostoru mezi dolními zuby pacienta. Nebyla přijata žádná opatření ke sterilizaci nitě, proto jsou vhodné aseptické techniky včetně použití sterilních rukavic, aby se zabránilo křížové kontaminaci. Budou odebrány tři vzorky: ve střední čáře zubů, za pravým nebo levým bočním řezákem a před pravým nebo levým prvním molárem. Rozhodnutí o odběru vzorků z pravé nebo levé části pacientových úst bude náhodné (hození mince), pokud pacientovi chybí zuby na jedné straně a vzorek musí být odebrán ze strany, která poskytne správný vzorek. Musí být získány alespoň 2 ze 3 vzorků. Tyto vzorky se umístí do 3 označených (identifikačním číslem studie a místem vzorku) uzavřených lahviček s thioglykolátovým bujónem a kultivují se po dobu 48 hodin. Vzorek bude poté odebrán ze dna thioglykolátového média pomocí pipety (k extrakci anaerobních bakterií) a kultivován na specifickém médiu pro přítomnost P. gingivalis a A. actinomycetemcomitans za použití anaerobních opatření v mikrobiologii University Medical Center (UMC). laboratoř. P. gingivalis bude kultivován na specializovaném agaru Columbia doplněném ovčí krví, bacitracinem, kolistinem a kyselinou nalidixovou pro selekci pro izolaci P. gingivalis. A. actinomycetemcomitans lze izolovat pomocí specializovaného agaru tryptic soy-serum-bacitracin-vancomycin (TSBV), specializovaného agaru, který inhibuje grampozitivní a gramnegativní aeroby a anaeroby. Každý vzorek bude nanesen na agarovou plotnu, která byla označena ID studie a umístěním zubu. Bakterie budou kultivovány metodou quad-streak a kultivovány po dobu 24-48 hodin a budou identifikovány patogenní bakterie. P. gingivalis bude identifikován na základě růstu černě pigmentovaných kolonií na selektivním agaru a A. actinomycetemcomitans bude identifikován na základě růstu hvězdicovitých kolonií na agaru TSBV. Úroveň periodontálního onemocnění u pacienta bude hodnocena podle množství růstu na destičkách, přičemž každému kvadrantu, ve kterém bakterie rostou, je přiřazeno číslo. pokud rostou pouze v prvním kvadrantu, bude jim přiděleno číselné označení 1 a růst ve druhém až čtvrtém kvadrantu bude označen 2 až 4 v tomto pořadí. Pomocí této metody lze kvantifikovat množství bakterií, přičemž 4 je označení pro nejvyšší relativní množství bakterií. Hladina každého patogenu nalezeného v ústech pacientů bude korelována se závažností onemocnění koronárních tepen, aby se určilo, zda existuje významná korelace. Bude také stanoveno, zda lze jeden z patogenů korelovat se závažností.

Kromě odběru dásní bude malá část (3 ml nebo 0,6 lžičky) pacientovy krve použita k testování na hs-CRP, IL-6 a IL-1 jako systémové markery zánětu. Použitý vzorek bude odebrán během úvodní návštěvy kliniky, kdy pacient dá souhlas a je odebrán vzorek z dásně. Vzorek odebere sestra za účelem získání potřebných testů. Pro každý test bude odebrán 1 ml (0,2 lžičky) séra (celkem 0,6 lžičky) a odesláno do patologické laboratoře UMC k analýze. Tyto hladiny budou porovnány s normálními hodnotami IL-1 (0-5 pg/ml) a IL-6 (5-15 pg/ml), zatímco hs-CRP bude korelován na základě rostoucích hladin. To umožní stanovení úrovně systémové infekce způsobené parodontitidou (na základě hladiny IL-1), onemocněním koronárních tepen (na základě hladiny hs-CRP) nebo oběma (na základě hladiny IL-6). Jednotlivé výsledky budou zaznamenány pro statistickou analýzu.