Tests cliniques pour prédire le succès des techniques de procréation assistée

Contexte Aujourd'hui, il est évident que la vitamine D a des effets plus étendus que les actions classiques liées à la minéralisation osseuse et à l'homéostasie calcique. Une carence en vitamine D entraîne une altération des performances de reproduction chez diverses espèces d'animaux, et récemment, les chercheurs ont montré que les enzymes du récepteur de la vitamine D (VDR), activatrices (CYP2R1, CYP27A1, CYP27B1) et inactivatrices (CYP24A1) sont exprimées dans le testicule humain, épididyme, vésicule séminale, prostate et spermatozoïdes. Des études fonctionnelles ont montré que la vitamine D activée augmente le calcium intracellulaire et la motilité des spermatozoïdes dans les spermatozoïdes matures, et peut donc être importante non seulement pour la spermatogenèse mais aussi pour la fonction des spermatozoïdes. Une étude transversale de 300 jeunes hommes danois en bonne santé a montré que les hommes ayant des niveaux inférieurs de 25-hydroxyvitamine D sérique ont un nombre significativement inférieur de spermatozoïdes normalement développés et mobiles. Jusqu'à présent, la plupart des cas d'infertilité masculine ont été classés comme «idiopathiques» et les couples infertiles ont été orientés vers un traitement symptomatique dans des cliniques d'infertilité. Ces traitements de fertilité sont souvent exigeants physiquement pour la partenaire féminine et coûteux pour le système de santé. Tout test qui pourrait aider à guider le traitement du couple infertile serait bénéfique à la fois pour les couples infertiles et pour la société en général. Nos découvertes selon lesquelles la vitamine D pourrait jouer un rôle dans la qualité du sperme humain sont actuellement testées cliniquement. Si la supplémentation en vitamine D s'avère efficace, cela ouvre pour la première fois un traitement causal, sûr et bon marché d'au moins certains cas d'altération «idiopathique» de la qualité du sperme. Cela peut avoir des conséquences car la vitamine D peut être utilisée pour sélectionner des spermatozoïdes de haute qualité lors de techniques de procréation assistée. La présence du récepteur de la vitamine D et des enzymes métabolisant la vitamine D dans un CYP24A1 particulier est capable de discriminer les spermatozoïdes des hommes normaux et infertiles. Le CYP24A1 est exprimé au niveau de l'anneau des spermatozoïdes normaux mais est pratiquement absent des spermatozoïdes des hommes infertiles. Cela indique que le CYP24A1 peut être utilisé comme marqueur pour distinguer les spermatozoïdes bons des mauvais et peut donc servir de marqueur clinique prédictif de la fertilité. Cela indique que l'expression du CYP24A1 peut également aider à prédire les chances de succès en utilisant l'insémination (IIU), la FIV ou l'ICSI. L'expression du CYP24A1 est induite par la vitamine D activée via le VDR, ce qui indique que d'autres gènes activés par le VDR peuvent également servir de marqueurs prédictifs positifs de la fertilité.

En plus de la simple utilisation du VDR, du CYP24A1 et d'autres gènes régulés par la vitamine D dans le sperme humain en tant que marqueurs cliniques, il est également important de déterminer la fonction de la vitamine D dans la reproduction. Pour comprendre cela, il est important de déterminer la concentration des métabolites de la vitamine D dans l'appareil reproducteur masculin et féminin. Par exemple, si les métabolites de la vitamine D sont indétectables dans l'appareil reproducteur masculin mais mesurables dans l'appareil reproducteur féminin, cela peut être important pour la signalisation aux spermatozoïdes capacitifs (activés). Les différents métabolites de la vitamine D et d'autres facteurs dans l'appareil reproducteur féminin seront mesurés pour déterminer s'ils seuls ou en combinaison avec d'autres marqueurs peuvent être de bons prédicteurs du succès après un traitement IUI, FIV ou ICSI. L'essai clinique proposé pourrait donc être en mesure d'évaluer plusieurs critères secondaires en plus du CYP24A1 dans notre recherche de marqueurs prédictifs de la fécondation. Par exemple, plusieurs biomarqueurs dans le sérum, le plasma séminal ou le liquide folliculaire en conjonction avec des polymorphismes connus dans plusieurs gènes importants pour la fonction de reproduction. Par exemple, la variation génétique de la signalisation FSH. Les polymorphismes mononucléotidiques (SNP) liés aux gènes codant pour la sous-unité FSHβ (FSHB) et le récepteur FSH (FSHR) affectent la production de FSH (FSHB c.-211 G>T) et la sensibilité/expression de son récepteur in vitro (FSHR c.2039A >G & FSHR c.-29G>A). FSHR c.2039A>G, mais pas FSHR c.-29G>A, est associé à une augmentation des taux de FSH chez les femmes adultes, alors qu'il existe des résultats contradictoires sur FSHB c.-211 G>T (7; 8). Que ces polymorphismes et d'autres polymorphismes spécifiques affectent le potentiel de fertilité masculine et féminine, la qualité du sperme et les hormones de reproduction.

CONTEXTE, PLAN SCIENTIFIQUE ET RECRUTEMENT Les participants seront inclus parmi les couples infertiles référés pour IUI, FIV ou ICSI à Dansk fertilitetsklinik. La conception est une étude de cohorte prospective, en aveugle et monocentrique. L'investigation de tous les échantillons sera réalisée en aveugle car les enquêteurs ne disposent d'aucune information sur les données cliniques, l'échec/le succès du traitement. tous les participants seront suivis jusqu'à 9 mois après leur traitement pour évaluer le taux de naissances vivantes, les avortements, etc.

PARTICIPANTS Tous les couples infertiles référés seront invités à participer, cependant les deux partenaires doivent être > 18 ans et les femmes < 43 ans. les femmes utilisant l'insémination par donneur seront également incluses. 800-1000 IUI et 400 FIV/ICSI prévus seront effectués à la clinique pendant la période d'étude. Les enquêteurs supposent que jusqu'à 600 IUI et 200 FIV/ICSI souhaitent participer. Ainsi, 800 traitements est la cible pour l'inclusion dans l'étude. Les enquêteurs s'attendent à un faible taux de rétraction (< 20) en raison d'une forte motivation et de l'absence d'effets indésirables.

ANALYSES Les hormones de la reproduction, les analyses génétiques, les perturbateurs endocriniens et les facteurs de croissance seront analysés au dépt. de GR, Rigshospitalet et régulateurs de calcium, y compris les métabolites de la vitamine D à l'hôpital Holbæk.

CALCUL DE LA TAILLE DE L'ÉCHANTILLON ET STATISTIQUES L'estimation de la puissance est basée sur les données publiées sur le CYP24A1 en tant que marqueur positif de la qualité du sperme. On estime que l'association entre la grossesse clinique et le CYP24A1 est comparable à l'association avec la motilité des spermatozoïdes. Cela implique que N = 600 IUI sera suffisant pour évaluer l'effet du CYP24A1 en tant que marqueur de grossesse et de taux de naissances vivantes car les enquêteurs estiment qu'au moins 12% auront un test de grossesse positif. Lorsque la collecte initiale de sperme brut / sperme séparé par percoll et les données seront terminées, une quantité supplémentaire d'observations cliniques sera obtenue après 9 mois sur le taux de naissances vivantes, les avortements, etc. Analyses secondaires sur l'association putative entre les paramètres cliniques et l'expression du VDR et d'autres gènes régulés par la vitamine D dans le sperme seront étudiés sur un sous-ensemble d'échantillons sélectionnés au hasard N = 300. Toutes les analyses génétiques listées seront réalisées sur tous les hommes et toutes les femmes avec ADN. Le liquide folliculaire sera collecté pendant la FIV ou l'ICSI lorsqu'il n'y a pas de contamination par le sang. Les analyses de différents marqueurs dans le liquide folliculaire et les cellules seront associées à la qualité des ovocytes, à la grossesse et au taux de naissances vivantes.

ÉTHIQUE ET EFFETS SECONDAIRES Tous les patients auront terminé leur visite initiale et leurs investigations avant d'être invités à participer à l'étude. La perte de spermatozoïdes pour chaque homme à la suite de la fabrication du cytospin n'influencera pas le taux de réussite de l'IIU, de la FIV ou de l'ICSI car les enquêteurs prélèveront moins de 2,5 % du pool de sperme.

PUBLICATION DES RÉSULTATS Tous les résultats, positifs ou négatifs, seront soumis à des revues scientifiques à comité de lecture. Les données seront successivement obtenues et transférées dans une base de données statistiques.

Analyses de sous-groupes prédéfinis Âge féminin, concentration de sperme, TTP, IMC, expression du CYP24A1/VDR dans le sperme, sperme brut verus percoll séparé, taux sériques de vitamine D et les polymorphismes génétiques répertoriés sous les paramètres secondaires.