骨組織の再生を予測するための臨床検査の検証 (Rebone-test)

偽関節症（または「偽関節」）は、骨折の不十分な治癒の結果として、外傷性イベントから約 6 か月後に発生する骨の動きとして定義されます。 難治性仮関節症の治療における再生医療の使用は、骨の強化を促進するための有望な戦略であると考えられています。 使用されるさまざまなアプローチの中で、成長因子の有無にかかわらず、自家間葉系間質細胞 (MSC) に基づく局所細胞療法が広く使用されています。 ＭＳＣは、腸骨稜から得られる骨髄の間質区画内に存在する。 自己血小板濃縮物の活性化後に得られる血小板ゲル（PG）からは、成長因子が放出される可能性があります。 それにもかかわらず、最近の臨床研究の結果は、上記の再生アプローチが約 30% の失敗率を示すことを示しています (Calori et al、2008)。 PG の再生能力を予測できる臨床検査が利用可能であれば、整形外科医が再生アプローチに関する決定に取り組む際に役立ちます。自己濃縮血小板を使用するかどうか、または組換え因子を含む自己誘導体の使用を強化する。偽関節症における濃縮血小板の使用の理論的根拠は、病変部位で観察される骨誘導性成長因子の大幅な減少である（Gandhi et al.、2005） ）。 血小板ゲルは、骨損傷後に血小板がフィブリンマトリックス内の血餅に捕捉されるときに生理学的に起こる現象を模倣します。 血小板の活性化は、骨の治癒を促進するさまざまな成長因子の放出を決定します。 最も適切な分子とその最適量に関するデータは入手できませんが、成長因子の最適なレベルと比率、およびそれらの相乗効果は、単一の組換え分子よりも効率的であるはずです。 これに関連して、in vitro 石灰化アッセイは、血小板ゲルの骨形成促進活性を評価するための有効なツールとなる可能性があり、したがって無数の血小板由来物質の測定が不要になります。

研究の目的は、自己血清の骨形成促進活性の評価によって、長骨癒合不全患者の骨組織の再生におけるPGの有効性を予測できるかどうかを判断することです。 この理論的根拠は次の問題に基づいています。

• PG で治療した長骨癒合不全の 30% では、骨の強化が得られません (Calori et al、2008)。
• たとえ濃度が低くても、血清中の成長因子の割合は、活性化後の血小板ゲルで観察されたものと同等です。
• 自己血清は、MSCの「インビトロ」骨形成分化およびミネラル小結節の形成をサポートすることができる（石灰化アッセイ）（Granchi et al、2010）。
• 「インビトロ」の石灰化と再生能力との相関関係は、さまざまな実験モデルで実証されている（De Bari et al、2008）。
• 私たちの研究室で得られた予備データは、脛骨の先天性仮関節症に罹患した患者において、MSCおよびPGによる局所細胞療法の有効性を保証するには、血清中の骨誘導性成長因子の存在が必須の要件であることを示した（提出論文）。

インビトロで石灰化を誘導する自己血清の能力を評価するために、研究者は生物活性試験 (石灰化アッセイ) を使用します。 この目的のために、MSCおよびPGによる治療候補の患者の血清サンプルが手術の前日に収集され、正常なMSCの培養に使用されます。正常なMSCのin vitro石灰化能力は標準的な培養条件で事前に検証されます。

骨形成促進特性が長期にわたって維持されるかどうかを判断するためにさらなる分析が行われ、手術の1か月前に血清サンプルが収集されます。

血清の骨形成促進活性が骨硬化を達成する個体と達成しない個体を予測して区別できるかどうかを判断するために、臨床検査結果を 12 か月後の臨床結果および X 線写真の結果と関連付けます。治ったか治っていないか。