Validering af laboratorietest til forudsigelse af knoglevævsregenerering (Rebone-test)

Pseudarthrose (eller 'nonunions') er defineret som en knoglebevægelse, der opstår efter ca. 6 måneder efter den traumatiske hændelse som følge af den utilstrækkelige heling af et brud. Brugen af ​​regenerativ medicin til behandling af genstridig pseudarthrose anses for at være en lovende strategi til at fremme knoglekonsolidering. Blandt de forskellige anvendte tilgange er den lokale celleterapi baseret på autologe mesenchymale stromaceller (MSC), kombineret med eller uden vækstfaktorer, blevet brugt i vid udstrækning. MSC befinder sig i det stromale rum af knoglemarv, som kan fås fra hoftekammen. Vækstfaktorer kan udledes fra blodpladegel (PG), som opnås efter aktivering af autologe blodpladekoncentrater. Ikke desto mindre viser resultaterne af nyere kliniske undersøgelser, at den ovennævnte regenerative tilgang viser en fejlrate på cirka 30 % (Calori et al, 2008). Tilgængeligheden af ​​en laboratorietest, som kan forudsige PG'ens regenerative kapacitet, kan hjælpe den ortopædiske kirurg med at tage stilling til beslutningerne vedrørende den regenerative tilgang, f.eks. at bruge eller ikke bruge autologe blodpladekoncentrater eller at øge brugen af ​​autologe derivater med rekombinante faktorer. Begrundelsen for brugen af ​​blodpladekoncentrater ved pseudarthrose er den signifikante reduktion af osteoinduktive vækstfaktorer observeret på læsionsstedet (Gandhi et al., 2005) ). Blodpladegel efterligner, hvad der sker fysiologisk efter enhver knogleskade, når blodplader er fanget i en koagel i en fibrinmatrix. Blodpladeaktivering bestemmer frigivelsen af ​​forskellige vækstfaktorer, der fremmer knogleheling. Det optimale niveau og forholdet mellem vækstfaktorer og deres synergistiske virkninger bør være mere effektive end enkelte rekombinante molekyler, selvom der ikke er tilgængelige data om de mest relevante molekyler og om deres optimale mængde. I denne sammenhæng kunne in vitro-mineraliseringsassayet være et gyldigt værktøj til at vurdere den pro-osteogene aktivitet af blodpladegel, og dermed undgå måling af myriaden af ​​blodpladeafledte stoffer.

Formålet med undersøgelsen er at afgøre, om evalueringen af ​​pro-osteogen aktivitet af autologt serum kan forudsige effektiviteten af ​​PG til regenerering af knoglevæv hos patienter med ikke-foreninger af lange knogler. Begrundelsen er baseret på følgende forhold:

• i 30 % af lange knoglenonunioner behandlet med PG opnås knoglekonsolidering ikke (Calori et al, 2008);
• andelen af ​​vækstfaktorer i serum er sammenlignelig med den, der observeres i blodpladegel efter aktivering, selv om koncentrationen er lavere;
• det autologe serum er i stand til at understøtte den 'in vitro' osteogene differentiering af MSC'er og dannelsen af ​​mineralknuder (mineraliseringsassay) (Granchi et al, 2010);
• sammenhængen mellem 'in vitro' mineralisering og regenerativ kapacitet er blevet påvist i forskellige eksperimentelle modeller (De Bari et al, 2008);
• foreløbige data opnået i vores laboratorium viste, at hos patienter ramt af medfødt pseudarthrose i skinnebenet er tilstedeværelsen af ​​osteoinduktive vækstfaktorer i serum et væsentligt krav for at garantere effektiviteten af ​​den lokale celleterapi med MSC og PG (indsendt papir).

For at vurdere det autologe serums evne til at inducere mineraliseringen in vitro vil efterforskerne bruge en bioaktivitetstest (mineraliseringsassay). Til dette formål vil serumprøver af patienter, der er kandidater til behandling med MSC og PG, blive indsamlet dagen før operationen og brugt til at dyrke normal MSC, hvis evne til at mineralisere in vitro vil være tidligere verificeret under standarddyrkningsbetingelser.

Yderligere analyse vil blive udført for at afgøre, om de pro-osteogene egenskaber bibeholdes over tid, og serumprøver vil blive indsamlet 1 måned før operationen.

For at bestemme, om serumets pro-osteogene aktivitet er i stand til at forudsige og skelne mellem personer, der opnår eller ikke opnår knoglekonsolidering, vil laboratorieresultaterne blive korreleret med kliniske og radiografiske resultater efter 12 måneder, hvor patienter vil blive betragtet som helbredt eller ikke helbredt.