Validación de prueba de laboratorio para predecir la regeneración del tejido óseo (Rebone-test)

La pseudoartrosis (o 'falta de unión') se define como un movimiento óseo que se produce después de unos 6 meses del evento traumático como consecuencia de la cicatrización inadecuada de una fractura. El uso de la medicina regenerativa para el tratamiento de la pseudoartrosis recalcitrante se considera una estrategia prometedora para promover la consolidación ósea. Entre los diversos enfoques utilizados, la terapia celular local basada en células estromales mesenquimales autólogas (MSC), combinadas con o sin factores de crecimiento, ha sido ampliamente utilizada. Las MSC residen dentro del compartimento estromal de la médula ósea que puede obtenerse de la cresta ilíaca. Los factores de crecimiento pueden descargarse del gel de plaquetas (PG) que se obtiene después de la activación de concentrados de plaquetas autólogas. Sin embargo, los resultados de estudios clínicos recientes muestran que el enfoque regenerativo mencionado anteriormente muestra una tasa de fracaso de aproximadamente el 30% (Calori et al, 2008). La disponibilidad de una prueba de laboratorio que pueda predecir la capacidad regenerativa del PG puede ayudar al cirujano ortopédico a abordar las decisiones relacionadas con el enfoque regenerativo, p. usar o no concentrados de plaquetas autólogas o mejorar el uso de derivados autólogos con factores recombinantes. La justificación para el uso de concentrados de plaquetas en la pseudoartrosis es la reducción significativa de factores de crecimiento osteoinductivos observados en el sitio de la lesión (Gandhi et al., 2005) ). El gel de plaquetas imita lo que sucede fisiológicamente después de cualquier lesión ósea, cuando las plaquetas quedan atrapadas en un coágulo dentro de una matriz de fibrina. La activación plaquetaria determina la liberación de varios factores de crecimiento que favorecen la cicatrización ósea. El nivel y la proporción óptimos de factores de crecimiento y sus efectos sinérgicos deberían ser más eficientes que las moléculas recombinantes individuales, aunque no hay datos disponibles sobre las moléculas más relevantes y sobre su cantidad óptima. En este contexto, el ensayo de mineralización in vitro podría ser una herramienta válida para evaluar la actividad proosteogénica del gel de plaquetas, obviando así la medición de la miríada de sustancias derivadas de las plaquetas.

El objetivo del estudio es determinar si la evaluación de la actividad pro-osteogénica del suero autólogo puede predecir la efectividad del PG en la regeneración del tejido óseo en pacientes con seudoartrosis de huesos largos. La justificación se basa en las siguientes cuestiones:

• en el 30% de las seudoartrosis de huesos largos tratadas con PG no se obtiene consolidación ósea (Calori et al, 2008);
• la proporción de factores de crecimiento en el suero es comparable a la observada en el gel de plaquetas después de la activación, incluso si la concentración es menor;
• el suero autólogo es capaz de apoyar la diferenciación osteogénica 'in vitro' de las MSC y la formación de nódulos minerales (ensayo de mineralización) (Granchi et al, 2010);
• la correlación entre la mineralización 'in vitro' y la capacidad regenerativa ha sido demostrada en varios modelos experimentales (De Bari et al, 2008);
• Los datos preliminares obtenidos en nuestro laboratorio mostraron que en pacientes afectados por pseudoartrosis congénita de tibia, la presencia de factores de crecimiento osteoinductivos en suero es un requisito esencial para garantizar la efectividad de la terapia celular local con MSC y PG (artículo presentado).

Para evaluar la capacidad del suero autólogo para inducir la mineralización in vitro, los investigadores utilizarán una prueba de bioactividad (ensayo de mineralización). Para ello se recogerán muestras de suero de pacientes candidatos al tratamiento con MSC y PG el día anterior a la cirugía y se utilizarán para cultivar MSC normales, cuya capacidad de mineralizar in vitro se comprobará previamente en condiciones de cultivo estándar.

Se realizarán análisis adicionales para determinar si las propiedades pro-osteogénicas se mantienen en el tiempo, y se recolectarán muestras de suero 1 mes antes de la cirugía.

Para determinar si la actividad proosteogénica del suero es capaz de predecir y discriminar entre los individuos que logran o no la consolidación ósea, se correlacionarán los resultados de laboratorio con los resultados clínicos y radiográficos a los 12 meses, cuando se considerará a los pacientes como curado o no curado.