Laboratóriumi teszt validálása a csontszövet regenerációjának előrejelzésére (Rebone-test)

A pszeudartrózis (vagy „nem-együlés”) olyan csontmozgás, amely a traumás eseménytől számított körülbelül 6 hónap elteltével következik be, a törés nem megfelelő gyógyulása következtében. Ígéretes stratégiának tartják a regeneratív gyógyászat használatát a rosszindulatú pszeudartrózis kezelésére a csontok megszilárdításának elősegítésére. Az alkalmazott különféle megközelítések közül széles körben alkalmazzák az autológ mesenchymalis stromasejteken (MSC) alapuló lokális sejtterápiát, növekedési faktorokkal vagy anélkül kombinálva. Az MSC a csontvelő stromális részében található, amely a csípőtarajból nyerhető. A növekedési faktorok kiürülhetnek a vérlemezke gélből (PG), amelyet az autológ vérlemezke-koncentrátumok aktiválása után kapnak. Mindazonáltal a legújabb klinikai vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy a fent említett regeneratív megközelítés körülbelül 30%-os meghibásodási arányt mutat (Calori et al, 2008). A PG regenerációs képességét előrejelző laboratóriumi vizsgálat elérhetősége segítheti az ortopéd sebészt a regeneratív megközelítéssel kapcsolatos döntések meghozatalában, pl. autológ thrombocyta koncentrátumok használata vagy mellőzése, vagy a rekombináns faktorokkal rendelkező autológ származékok használatának fokozása. A vérlemezkekoncentrátumok pszeudarthrosisban való alkalmazásának oka az oszteoinduktív növekedési faktorok jelentős csökkenése, amelyet a lézió helyén figyeltek meg (Gandhi et al., 2005). ). A thrombocyta gél utánozza azt, ami fiziológiásan történik bármilyen csontsérülés után, amikor a vérlemezkék a fibrinmátrixon belüli vérrögbe záródnak. A vérlemezkék aktiválása határozza meg a csontgyógyulást elősegítő különböző növekedési faktorok felszabadulását. A növekedési faktorok optimális szintje és aránya, valamint szinergikus hatásaik hatékonyabbnak kell lenniük, mint az egyes rekombináns molekulák, annak ellenére, hogy a legrelevánsabb molekulákról és azok optimális mennyiségéről nem állnak rendelkezésre adatok. Ebben az összefüggésben az in vitro mineralizációs vizsgálat érvényes eszköz lehet a thrombocyta gél pro-osteogén aktivitásának értékelésére, így elkerülhető a számtalan vérlemezke eredetű anyag mérése.

A vizsgálat célja annak megállapítása, hogy az autológ szérum pro-osteogenic aktivitásának értékelése előre jelezheti-e a PG hatékonyságát a csontszövet regenerációjában olyan betegeknél, akiknél a hosszú csontok nem kapcsolódnak össze. Az indoklás a következő kérdéseken alapul:

• a PG-vel kezelt hosszú csontok 30%-ában nem jön létre csontkonszolidáció (Calori et al, 2008);
• a növekedési faktorok aránya a szérumban az aktiválás utáni vérlemezke-gélben megfigyelthez hasonlítható, még akkor is, ha a koncentráció alacsonyabb;
• az autológ szérum képes támogatni az MSC-k „in vitro” osteogén differenciálódását és ásványi csomók képződését (mineralizációs vizsgálat) (Granchi et al, 2010);
• az „in vitro” mineralizáció és a regenerációs képesség közötti összefüggést különböző kísérleti modellekben mutatták ki (De Bari et al, 2008);
• Laboratóriumunkban nyert előzetes adatok azt mutatták, hogy a sípcsont veleszületett pseudarthrosisában szenvedő betegeknél az oszteoinduktív növekedési faktorok jelenléte a szérumban elengedhetetlen követelmény az MSC-vel és PG-vel végzett lokális sejtterápia hatékonyságának biztosításához (benyújtott papír).

Az autológ szérum mineralizációt in vitro indukáló képességének értékelésére a vizsgálók bioaktivitási tesztet (mineralizációs vizsgálat) alkalmaznak. Ebből a célból az MSC és PG kezelésre jelölt betegek szérummintáját a műtét előtti napon gyűjtik, és normál MSC tenyésztésére használják fel, amelynek in vitro mineralizálódási képességét standard tenyésztési körülmények között előzetesen igazolják.

További elemzéseket végeznek annak megállapítására, hogy a pro-oszteogén tulajdonságok megmaradnak-e az idő múlásával, és szérummintákat vesznek a műtét előtt 1 hónappal.

Annak meghatározására, hogy a szérum pro-osteogén aktivitása képes-e megjósolni és megkülönböztetni azokat az egyéneket, akik elérik vagy nem érik el a csontszilárdulást, a laboratóriumi eredményeket korrelálni kell a klinikai és radiográfiai eredményekkel 12 hónapos korban, amikor is gyógyult vagy nem gyógyult.