Validação de Teste de Laboratório para Previsão da Regeneração do Tecido Ósseo (Rebone-test)

A pseudoartrose (ou 'não união') é definida como uma movimentação óssea que ocorre após cerca de 6 meses do evento traumático como consequência da cicatrização inadequada de uma fratura. O uso da medicina regenerativa no tratamento da pseudartrose recalcitrante é considerado uma estratégia promissora para promover a consolidação óssea. Dentre as diversas abordagens utilizadas, a terapia celular local baseada em células estromais mesenquimais (CTM) autólogas, combinadas ou não com fatores de crescimento, tem sido bastante utilizada. As MSC residem no compartimento estromal da medula óssea que pode ser obtido da crista ilíaca. Os fatores de crescimento podem ser descarregados do gel de plaquetas (PG) que é obtido após a ativação de concentrados de plaquetas autólogas. No entanto, os resultados de estudos clínicos recentes mostram que a abordagem regenerativa acima mencionada apresenta uma taxa de falha de aproximadamente 30% (Calori et al, 2008). A disponibilidade de um teste de laboratório que possa prever a capacidade regenerativa do PG pode ajudar o cirurgião ortopédico a tomar decisões sobre a abordagem regenerativa, por exemplo, usar ou não concentrados de plaquetas autólogos ou potencializar o uso de derivados autólogos com fatores recombinantes. ). O gel de plaquetas imita o que acontece fisiologicamente após qualquer lesão óssea, quando as plaquetas são aprisionadas em um coágulo dentro de uma matriz de fibrina. A ativação plaquetária determina a liberação de diversos fatores de crescimento promovendo a cicatrização óssea. O nível ideal e a proporção de fatores de crescimento e seus efeitos sinérgicos devem ser mais eficientes do que moléculas recombinantes únicas, embora não haja dados disponíveis sobre as moléculas mais relevantes e sobre sua quantidade ideal. Nesse contexto, o ensaio de mineralização in vitro poderia ser uma ferramenta válida para avaliar a atividade pró-osteogênica do gel de plaquetas, evitando assim a medição da miríade de substâncias derivadas de plaquetas.

O objetivo do estudo é determinar se a avaliação da atividade pró-osteogênica do soro autólogo pode predizer a eficácia do PG na regeneração do tecido ósseo em pacientes com pseudartrose de ossos longos. A justificativa é baseada nas seguintes questões:

• em 30% das pseudoartroses de ossos longos tratadas com PG, a consolidação óssea não é obtida (Calori et al, 2008);
• a proporção de fatores de crescimento no soro é comparável à observada no gel de plaquetas após a ativação, mesmo que a concentração seja menor;
• o soro autólogo é capaz de suportar a diferenciação osteogênica 'in vitro' de MSCs e a formação de nódulos minerais (ensaio de mineralização) (Granchi et al, 2010);
• a correlação entre mineralização 'in vitro' e capacidade regenerativa foi demonstrada em vários modelos experimentais (De Bari et al, 2008);
• dados preliminares obtidos em nosso laboratório mostraram que em pacientes afetados por pseudoartrose congênita da tíbia a presença de fatores de crescimento osteoindutores no soro é um requisito essencial para garantir a eficácia da terapia celular local com MSC e PG (artigo submetido).

Para avaliar a capacidade do soro autólogo em induzir a mineralização in vitro os pesquisadores utilizarão um teste de bioatividade (ensaio de mineralização). Para tanto, amostras de soro de pacientes candidatos ao tratamento com MSC e PG serão coletadas na véspera da cirurgia e utilizadas para cultivo de MSC normais, cuja capacidade de mineralização in vitro será previamente verificada em condições padrão de cultivo.

Análises adicionais serão realizadas para determinar se as propriedades pró-osteogênicas são mantidas ao longo do tempo, e amostras de soro serão coletadas 1 mês antes da cirurgia.

Para determinar se a atividade pró-osteogênica do soro é capaz de predizer e discriminar os indivíduos que atingem ou não a consolidação óssea, os resultados laboratoriais serão correlacionados com os resultados clínicos e radiográficos aos 12 meses, quando os pacientes serão considerados como curado ou não curado.