肺がん脳転移に対するプロテオーム免疫療法

この試験には、少なくとも 1 ラインの標準化学療法と全コースの放射線療法の後に、異なる悪性腫瘍の肺がん (BMLC) からの難治性脳転移の 60 例が含まれます。

参加者は実験的（一次治療）アームに入り、20例の3つのサブグループに細分されます。脳転移を伴う組織学的に確認された肺腺癌症例のグループI。脳転移を伴う組織学的に確認された小細胞肺癌症例のグループII。および脳転移を伴う扁平上皮肺癌症例のグループ III。

BMLC の第一選択療法には、同種ハプロ同一造血幹細胞 (HSC)、樹状ワクチン (DV)、および細胞傷害性リンパ球 (CTL) が含まれます。

HSC は、個別化された養子免疫応答を刺激し、腫瘍細胞 (TC) に毒性を与え、腫瘍幹細胞 (TSC) の生殖および増殖能力を抑制するために標的を定めて調節するために使用されます。 HSCを得るために、ドナーは顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)の皮下投与を8～10時間間隔で4日間8回受ける。 最初の 3 日間は体重 1 kg あたり 2.5 mcg、最後の日は 2 倍にします。 幹細胞は 5 日目に収穫されます。赤血球は遠心分離によって回収されます。 細胞マーカーの内容は、フローサイトメトリーによって評価されます。 結果は、細胞濃縮物を濃縮し、そこから成熟細胞と血漿を除去した後に評価されます。 調製物は、凍結保護剤および10%ポリグルシン溶液とともに4mlあたりのチューブに保存されます。 1回の投与で、幹細胞の割合はCD34+が0.5x106以上、リンパ球の割合は0.5x109以上です。

脳腫瘍のサンプルは、試験に含まれるすべての患者から、定位/内視鏡/開放生検によって得られます。 TC および TSC は、BMLC 生検サンプルから免疫化学的に分離されます。 腫瘍サンプルの一部は、標準的な組織学的、細胞学的および免疫化学的検査に使用され、TC および TSC (CD133+) は他の部分から分離されます。

樹状細胞は、末梢血単核細胞から分離され、培養されます。 腫瘍サンプルは、樹状ワクチン (DV) を調製するための腫瘍特異的抗原を提供します。

CTLの調製は、多数の循環CTLによる腫瘍に対する細胞傷害効果を高めることを目的としています。 ３回のＤＶ投与後に約１００ｍｌの末梢血からＣＴＬを単離し、樹状細胞（ＤＣ）を増殖させる。 その後、末梢血を繰り返し採取し、リンパ球を分離します。 CTL は、腫瘍抗原をロードした DC (一次治療) または主要な腫瘍特異的タンパク質に類似した組換えタンパク質 (二次治療) と数回共培養して、その数を増やします (108-109)。 それらの免疫表現型が検出され、CTL が凍結保存されます。 DCによるCTLの最初の刺激は6～8日間続き、2回目は2～4日間続き、次の2日間でリンパ球が3回目と4回目の刺激を受ける。 そして、受け取ったリンパ球をIL-2で2日間刺激します。

一次治療の完了から6か月後、有効性が評価され、有効性を示すコホートは治療を継続しますが、有効性を示さないコホートは、アクティブな比較群で二次治療の試験を継続します。

二次治療アームでは、主要な腫瘍特異的タンパク質、自己 CTL、およびプロテオームが修飾された自己 HSC に類似した組換えタンパク質を用いた DV を使用します。

自己 HSC は、前述のように治験参加者から受け取ります。 アクティブコンパレータアーム用のHSCの細胞調製物は、実験アーム用に指定された動員後の末梢血の自己単核細胞の細胞濃縮物から得られる。 活性対照群のための腫瘍特異的抗原は、患者の腫瘍組織によって提供される。

患者の TC と TSC、および HSC は、完全なトランスクリプトーム マッピングと遺伝子発現プロファイリング (CTMGEP) およびプロテオーム マッピングとタンパク質プロファイリング (PMPP) を受けます。 重要な (最大の正規化された強度を持つ 3 つまたは 4 つのタンパク質) 腫瘍特異的タンパク質 (OSP) は、TC のプロテオーム テストに従って決定されますが、TSC のプロテオーム プロファイリングとタンパク質間関係のデータベースの使用により、影響を受けない細胞内シグナル伝達経路 (ISTP) の検出が可能になります。発がんによって、規制することができます。 また、これらのシグナル経路に影響を与える受容体膜標的 (受容体膜タンパク質) と、それらを活性化できるタンパク質 (タンパク質リガンド) が検出されます。 TSC の CTMGEP は、診断された機能的 ISTP を確認します。 CTMGEP の数学的モデリングと Affymetrix GeneChip ヒトゲノム U133A Array データとの比較により、化学的に HSC を誘導し、必要なタンパク質リガンドの分泌を提供するためにプロテオーム プロファイルを変更できる摂動因子が明らかになりました。 データベース解析により、低分子薬剤またはマイクロ RNA によって誘導される遺伝子発現の変化が、調べたプロファイルで観察される変化とどのように対応するかを理解できます。 対応が重要な場合、エージェントまたは類似のエージェントが効果を開始できると想定されます。 反相関が有意である場合、薬剤は遺伝子発現修飾において反対の効果を開始すると考えられます。 HSC のトランスクリプトームは、摂動因子と単核細胞を共培養することによって変更されます。 それらの生物学的効率は、ホムンクルス バイオリアクターで in vitro で評価されます。 次に、前に説明したように、準備が保存されます。

個々の DV は、患者の末梢血の白血球濃縮物から調製されます。 リンパ球を単離し、G-CSF およびインターロイキン-2 とともに培養し、腫瘍特異的抗原である TNF-α および PGE2 によって 48 時間調整し、腫瘍細胞のプロテオミクス試験で検出された主要な腫瘍特異的抗原と同一の組換えタンパク質をロードします ( TC）。 DV 免疫効果の基本的なメカニズムは、患者の生体による腫瘍毒性リンパ球の精緻化です。

CTLは、前述のように取得されます。 介入については、該当するセクションで説明します。

毒性は、CTC-NCI基準に従って評価されます。 効率は、次の基準に従って評価されます。

1. 完全な効果 - すべての腫瘍病巣の完全な消失
2. 部分的な効果 - 腫瘍サイズおよび/または転移巣が 50% 以上縮小し、新しい新生物の徴候がない
3. 安定化 - 腫瘍病巣のサイズが 50% 未満減少し、新しい新生物の徴候がない
4. 進行 - 治療中の腫瘍病巣の成長。 モザイク効果の場合、病巣の一部が進行し、一部が安定または縮小している場合、治療は継続されますが、「治療への反応」という文脈の外でケースが分析されます。