Proteombasert immunterapi av lungekreft hjernemetastaser

Forsøket vil omfatte 60 tilfeller av refraktorhjernemetastaser fra lungekreft (BMLC) av forskjellig malignitet etter ikke mindre enn én linje med standard kjemoterapi og fullstendig strålebehandlingsforløp.

Deltakerne vil gå inn i den eksperimentelle (førstelinjeterapi) armen og vil bli delt inn i 3 undergrupper av 20 tilfeller: gruppe I av histologisk bekreftede lungeadenokarsinomtilfeller med hjernemetastaser; gruppe II av histologisk bekreftede småcellet lungekrefttilfeller med hjernemetastaser; og gruppe III av plateepitel-lungekrefttilfeller med hjernemetastaser.

Førstelinjebehandlingen av BMLC involverer allogene haploidentiske hematopoietiske stamceller (HSC), dendritisk vaksine (DV) og cytotoksiske lymfocytter (CTL).

HSC-er brukes til å stimulere individualisert adoptiv immunrespons, for å påvirke tumorceller (TC-er) toksisk og for å regulere tumorstamceller (TSC) målrettet for å undertrykke deres reproduktive og proliferative potensial. For å oppnå HSC mottar giveren 8 subkutane administreringer av granulocyttkolonistimulerende faktor (G-CSF) med 8-10 timers intervall i 4 dager. De første tre dagene er en enkeltdose 2,5 mcg per 1 kg vekt, den siste dagen dobles dosen. Stamcellene høstes på dag 5. Røde blodceller trekkes ut ved sentrifugering. Innholdet av cellemarkører blir evaluert ved flowcytometri. Resultatet vurderes etter anrikning av cytokonsentrat og fjerning av modne celler og plasma fra det. Preparatet oppbevares i rør per 4 ml med kryoprotektor og 10 % poliglucinløsning. Stamcelleandelen er ikke mindre enn 0,5x106 CD34+, og andelen lymfocytter er ikke mindre enn 0,5x109 per administrasjon.

Prøven av hjernesvulst er oppnådd gjennom stereotaksisk/endoskopisk/åpen biopsi fra alle pasienter inkludert i forsøket. TC-er og TSC-er er immunkjemisk isolert fra BMLC-biopsiprøve. En del av tumorprøven brukes til standard histologisk, cytologisk og immunkjemisk testing, mens TC-er og TSC-er (CD133+) er isolert fra den andre delen.

Dendrittiske celler isoleres fra mononukleære celler fra perifert blod og dyrkes. Tumorprøve gir tumorspesifikke antigener for å forberede dendrittiske vaksinen (DV).

Utarbeidelse av CTL-er har som mål å forbedre cytotoksisk effekt på svulst på grunn av et stort antall sirkulerende CTL-er. CTL'er isoleres fra ca. 100 ml perifert blod etter 3 DV-administrasjoner, og av dem dyrkes dendritiske celler (DC'er). Deretter tas perifert blod gjentatte ganger, og lymfocytter isoleres. CTL-ene dyrkes sammen med DC-er lastet med tumorantigener (førstelinjeterapi) eller rekombinante proteiner analogt med nøkkelonkospesifikke proteiner (andre linjebehandling) flere ganger for å utvide antallet (108-109). Deres immunfenotype blir oppdaget og CTL-er kryokonserveres. Den første stimuleringen av CTL-er med DC-er varer 6-8 dager, den andre varer 2-4 dager, neste 2 dager stimuleres lymfocyttene for tredje og fjerde gang. Og deretter stimuleres de mottatte lymfocyttene av IL-2 i 2 dager.

Seks måneder etter fullføring av førstelinjebehandlingen blir effektiviteten evaluert og kohorten som viser effektivitet fortsetter terapien, mens kohort som viser ingen effektivitet vil fortsette forsøket med andrelinjeterapi i aktiv komparatorarm.

Den andre linjens terapiarm bruker DV med rekombinante proteiner analoge med nøkkelonkospesifikke proteiner, autologe CTL-er og autologe HSC-er med modifisert proteom.

Autologe HSC-er mottas fra prøvedeltakeren som beskrevet tidligere. Cellepreparat av HSC for aktiv komparatorarm oppnås av cytokonsentratet av autologe mononukleære celler av perifert blod etter mobilisering som spesifisert for eksperimentell arm. Tumorspesifikke antigener for aktiv komparatorgruppe tilveiebringes av pasientens tumorvev.

TC-er og TSC-er samt HSC-er for pasienten gjennomgår fullstendig transkriptomkartlegging og genekspresjonsprofilering (CTMGEP) og proteomkartlegging og proteinprofilering (PMPP). Nøkkel (3 eller 4 proteiner med maksimal normalisert intensitet) onkospesifikke proteiner (OSP) bestemmes i henhold til proteomtesting av TC-er, mens proteomprofilering av TSC-er og bruk av databaser med protein-protein-relasjoner tillater deteksjon av intracellulære signaltransduksjonsveier (ISTP) upåvirket ved kreftfremkalling og i stand til å regulere. Dessuten påvises reseptormembranmål for å påvirke disse signalveiene (akseptormembranproteiner), så vel som proteiner som er i stand til å aktivere dem (proteinligander). CTMGEP av TSC-er bekrefter diagnostisert funksjonell ISTP. Matematisk modellering av CTMGEP og sammenligning med Affymetrix GeneChip Humant genom U133A Array-data avslører perturbagener som er i stand til kjemisk å indusere HSC-er og å modifisere deres proteomprofil for å gi sekresjon av nødvendige proteinligander. Databaseanalysen tillater forståelse av hvordan endringer i genuttrykk indusert av et lavmolekylært middel eller mikro-RNA samsvarer med endringene observert i den undersøkte profilen. Hvis korrespondanse er betydelig, antas det at agenten eller lignende agenter kan sette i gang effekten. Hvis anti-korrelasjon er signifikant, er midlet ment å initiere en motsatt effekt i genekspresjonsmodifikasjon. Transkriptomet til HSC-er modifiseres ved å dyrke mononukleære celler sammen med perturbagens. Deres biologiske effektivitet blir evaluert in vitro i Homunculus bioreaktor. Deretter lagres preparatet som beskrevet tidligere.

Individuell DV tilberedes fra leukokonsentratet av perifert blod fra pasienten. Lymfocyttene isoleres, dyrkes med G-CSF og interleukin-2, kondisjoneres av tumorspesifikke antigener, TNF-α og PGE2 i 48 timer og lades med rekombinante proteiner som er identiske med nøkkeltumorspesifikke antigener påvist ved proteomisk testing av tumorceller ( TC-er). Grunnleggende mekanisme for DV-immuneffekt er utarbeidelse av tumortoksiske lymfocytter av pasientens organisme.

CTL-er oppnås som beskrevet tidligere. Inngrepet er beskrevet i det aktuelle avsnittet.

Toksisitet vil bli evaluert i henhold til CTC-NCI kriterier. Effektiviteten vurderes etter følgende kriterier:

1. Fullstendig effekt - full forsvinning av alle tumorfoci
2. Delvis effekt - reduksjon av tumorstørrelse og/eller metastatiske foci med ikke mindre enn 50 % og ingen tegn på nye neoplasmer
3. Stabilisering - reduksjon av tumorfocistørrelse med mindre enn 50 % og ingen tegn til nye neoplasmer
4. Fremgang - vekst av tumorfoci under terapien. Ved mosaikkeffekt, når en del av foci utvikler seg og en del er stabil eller reduserende, fortsettes terapien, men tilfellene analyseres utenfor konteksten "Respons på terapien"