Протеомная иммунотерапия метастазов рака легкого в головной мозг

В исследование будет включено 60 случаев рефракторных метастазов рака легкого (BMLC) в головной мозг различной степени злокачественности после не менее чем одной линии стандартной химиотерапии и полного курса лучевой терапии.

Участники войдут в экспериментальную группу (терапия первой линии) и будут разделены на 3 подгруппы по 20 случаев: группа I гистологически подтвержденных случаев аденокарциномы легкого с метастазами в головной мозг; группа II гистологически подтвержденных случаев мелкоклеточного рака легкого с метастазами в головной мозг; и III группа случаев плоскоклеточного рака легкого с метастазами в головной мозг.

Терапия первой линии BMLC включает аллогенные гаплоидентичные гемопоэтические стволовые клетки (ГСК), дендритную вакцину (ДВ) и цитотоксические лимфоциты (ЦТЛ).

ГСК используются для стимуляции индивидуального адоптивного иммунного ответа, для токсического воздействия на опухолевые клетки (ОК) и целенаправленной регуляции опухолевых стволовых клеток (ОСК) с целью подавления их репродуктивного и пролиферативного потенциала. Для получения ГСК донору делают 8 подкожных введений гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) с интервалом 8-10 часов в течение 4 дней. Первые трое суток разовая доза составляет 2,5 мкг на 1 кг веса, в последний день доза удваивается. Стволовые клетки собирают на 5-й день. Эритроциты удаляют центрифугированием. Содержание клеточных маркеров оценивают методом проточной цитометрии. Результат оценивают после обогащения цитоконцентрата и удаления из него зрелых клеток и плазмы. Препарат хранят в тубах по 4 мл с криопротектором и 10% раствором полиглюкина. Доля стволовых клеток не менее 0,5х106 CD34+, а доля лимфоцитов не менее 0,5х109 на одно введение.

Образец опухоли головного мозга получают путем стереотаксической/эндоскопической/открытой биопсии у всех пациентов, включенных в исследование. ОК и ОСК иммунохимически выделяют из образца биопсии BMLC. Одну часть образца опухоли используют для стандартного гистологического, цитологического и иммунохимического исследования, а из другой части выделяют ОК и ОСК (CD133+).

Дендритные клетки выделяют из мононуклеарных клеток периферической крови и культивируют. Образец опухоли обеспечивает специфичные для опухоли антигены для приготовления дендритной вакцины (DV).

Получение ЦТЛ направлено на усиление цитотоксического действия на опухоль за счет большого количества циркулирующих ЦТЛ. ЦТЛ выделяют примерно из 100 мл периферической крови после 3 введений DV, и из них выращивают дендритные клетки (ДК). Затем повторно берут периферическую кровь и выделяют лимфоциты. ЦТЛ совместно культивируют с ДК, нагруженными опухолевыми антигенами (терапия первой линии) или рекомбинантными белками, аналогичными ключевым онкоспецифическим белкам (терапия второй линии), в несколько раз, чтобы увеличить их количество (108-109). Выявляют их иммунофенотип и криоконсервируют ЦТЛ. Первая стимуляция ЦТЛ ДК длится 6-8 дней, вторая - 2-4 дня, следующие 2 дня лимфоциты стимулируют в третий и четвертый раз. А затем полученные лимфоциты стимулируют ИЛ-2 в течение 2 дней.

Через шесть месяцев после завершения терапии первой линии оценивается эффективность, и когорта, демонстрирующая эффективность, продолжает терапию, в то время как когорта, демонстрирующая отсутствие эффективности, продолжает исследование с терапией второй линии в группе активного сравнения.

Терапия второй линии использует DV с рекомбинантными белками, аналогичными ключевым онкоспецифическим белкам, аутологичными ЦТЛ и аутологичными ГСК с модифицированным протеомом.

Аутологичные HSC получают от участника испытания, как описано ранее. Клеточный препарат ГСК для активной группы сравнения получают из цитоконцентрата аутологичных мононуклеаров периферической крови после мобилизации, как указано для экспериментальной группы. Опухолеспецифические антигены для активной группы сравнения обеспечиваются опухолевой тканью пациента.

ОК и ТСК, а также ГСК пациента подвергаются полному картированию транскриптома и профилированию экспрессии генов (CTMGEP) и картированию протеома и профилированию белков (PMPP). Ключевые (3 или 4 белка с максимальной нормализованной интенсивностью) онкоспецифические белки (OSP) определяются по данным протеомного тестирования ОК, а протеомное профилирование ОСК и использование баз данных белок-белковых отношений позволяют выявить незатронутые пути внутриклеточной передачи сигнала (ISTP). канцерогенезом и способным к регуляции. Также выявляются мембранные мишени рецепторов, воздействующие на эти сигнальные пути (белки акцепторной мембраны), а также белки, способные их активировать (белки-лиганды). CTMGEP TSCs подтверждает диагноз функционального ISTP. Математическое моделирование CTMGEP и сравнение с данными Affymetrix GeneChip Human genome U133A Array выявили пертурбагены, способные химически индуцировать HSC и модифицировать профиль их протеома, чтобы обеспечить секрецию необходимых белковых лигандов. Анализ базы данных позволяет понять, как изменения экспрессии генов, индуцированные низкомолекулярным агентом или микроРНК, соотносятся с изменениями, наблюдаемыми в исследуемом профиле. Если соответствие значимо, предполагается, что агент или подобные агенты могут инициировать эффект. Если антикорреляция значительна, предполагается, что агент инициирует противоположный эффект в модификации экспрессии генов. Транскриптом HSC модифицируют путем совместного культивирования мононуклеарных клеток с пертурбагенами. Их биологическая эффективность оценивается in vitro в биореакторе Homunculus. Затем препарат хранится, как описано ранее.

Индивидуальную ДВ готовят из лейкоконцентрата периферической крови больного. Лимфоциты выделяют, культивируют с G-CSF и интерлейкином-2, кондиционируют опухолеспецифическими антигенами, TNF-α и PGE2 в течение 48 часов и нагружают рекомбинантными белками, идентичными ключевым опухолеспецифическим антигенам, обнаруженным при протеомном тестировании опухолевых клеток ( ТК). Основным механизмом иммунного действия ДВ является выработка организмом больного опухолетоксических лимфоцитов.

ЦТЛ получают, как описано ранее. Вмешательство описано в соответствующем разделе.

Токсичность будет оцениваться в соответствии с критериями CTC-NCI. Эффективность оценивается по следующим критериям:

1. Полный эффект - полное исчезновение всех опухолевых очагов
2. Частичный эффект - уменьшение размеров опухоли и/или метастатических очагов не менее чем на 50% и отсутствие признаков новых новообразований
3. Стабилизация - уменьшение размеров опухолевых очагов менее чем на 50% и отсутствие признаков новых новообразований
4. Прогресс - рост опухолевых очагов на фоне терапии. При мозаичном эффекте, когда часть очагов прогрессирует, а часть стабильна или редуцируется, терапию продолжают, но случаи анализируют вне контекста «Ответ на терапию».