Proteomipohjainen keuhkosyövän aivometastaasien immunoterapia

Tutkimus sisältää 60 tapausta refraktoriaivoetastaasseista keuhkosyövästä (BMLC), joka on eri pahanlaatuinen syöpä vähintään yhden tavanomaisen kemoterapian ja täydellisen sädehoidon jälkeen.

Osallistujat siirtyvät kokeelliseen (ensimmäisen linjan terapia) haaraan, ja heidät jaetaan kolmeen 20 tapauksen alaryhmään: ryhmä I histologisesti vahvistettuja keuhkojen adenokarsinoomatapauksia, joissa on aivometastaasseja; ryhmä II histologisesti varmistetuista pienisoluisista keuhkosyöpätapauksista, joissa on aivometastaaseja; ja ryhmä III okasolukeuhkosyöpätapauksista, joissa on aivoetastaasseja.

BMLC:n ensimmäisen linjan hoitoon kuuluvat allogeeniset haploidenttiset hematopoieettiset kantasolut (HSC:t), dendriittirokote (DV) ja sytotoksiset lymfosyytit (CTL).

HSC:itä käytetään stimuloimaan yksilöllistä adoptiivista immuunivastetta, vaikuttamaan kasvainsoluihin (TC:ihin) toksisesti ja säätelemään tuumorin kantasoluja (TSC:t) kohdistettuna niiden lisääntymis- ja lisääntymispotentiaalin tukahduttamiseksi. HSC:n saamiseksi luovuttaja saa 8 subkutaanista annosta granulosyyttipesäkkeitä stimuloivaa tekijää (G-CSF) 8-10 tunnin välein 4 päivän ajan. Kolmena ensimmäisenä päivänä kerta-annos on 2,5 mikrogrammaa 1 painokiloa kohti, viimeisenä päivänä annos kaksinkertaistetaan. Kantasolut kerätään päivänä 5. Punaiset verisolut poistetaan sentrifugoimalla. Solumarkkerien pitoisuus arvioidaan virtaussytometrialla. Tulos arvioidaan sytokonsentraatin rikastamisen ja kypsien solujen ja plasman poistamisen jälkeen. Valmistetta säilytetään 4 ml:n putkissa, joissa on kylmäsuoja ja 10 % poliglusiiniliuos. Kantasolujen osuus on vähintään 0,5 x 106 CD34+ ja lymfosyyttien osuus on vähintään 0,5 x 109 yhtä antoa kohden.

Aivokasvainnäyte saadaan stereotaksisella/endoskooppisella/avoimella biopsialla kaikilta tutkimukseen osallistuvilta potilailta. TC:t ja TSC:t eristetään immunokemiallisesti BMLC-biopsianäytteestä. Yhtä osaa kasvainnäytteestä käytetään standardi histologiseen, sytologiseen ja immunokemialliseen testaukseen, kun taas TC:t ja TSC:t (CD133+) eristetään toisesta osasta.

Dendriittisolut eristetään perifeerisen veren mononukleaarisista soluista ja viljellään. Kasvainnäyte tarjoaa kasvainspesifisiä antigeenejä dendriittirokotteen (DV) valmistamiseksi.

CTL:ien valmistuksen tavoitteena on tehostaa sytotoksista vaikutusta kasvaimeen kiertävien CTL-solujen suuren lukumäärän vuoksi. CTL:t eristetään noin 100 ml:sta ääreisverta 3 DV-annon jälkeen, ja niistä kasvatetaan dendriittisoluja (DC:t). Sitten perifeeristä verta otetaan toistuvasti ja lymfosyytit eristetään. CTL:itä viljellään yhdessä DC:iden kanssa, joihin on ladattu kasvainantigeenejä (ensimmäisen linjan hoito) tai rekombinanttiproteiineja, jotka ovat analogisia avainonkospesifisten proteiinien kanssa (toisen linjan hoito) useita kertoja niiden lukumäärän laajentamiseksi (108-109). Niiden immunofenotyyppi havaitaan ja CTL:t kylmäsäilytetään. Ensimmäinen CTL-stimulaatio DC:illä kestää 6-8 päivää, toinen kestää 2-4 päivää, seuraavat 2 päivää lymfosyyttejä stimuloidaan kolmannen ja neljännen kerran. Ja sitten vastaanotettuja lymfosyyttejä stimuloidaan IL-2:lla 2 päivän ajan.

Kuusi kuukautta ensimmäisen linjan hoidon päättymisen jälkeen tehokkuus arvioidaan ja tehokkuutta osoittava kohortti jatkaa hoitoa, kun taas kohortti, joka osoittaa tehottomuutta, jatkaa koetta toisen linjan hoidolla aktiivisessa vertailuhaarassa.

Toisen linjan hoitohaarassa käytetään DV:tä rekombinanttiproteiinien kanssa, jotka ovat analogisia keskeisten onkospesifisten proteiinien, autologisten CTL:ien ja autologisten HSC:iden kanssa modifioidun proteomin kanssa.

Autologiset HSC:t vastaanotetaan kokeen osallistujalta edellä kuvatulla tavalla. HSC:n soluvalmistelu aktiiviselle vertailuhaaralle saadaan perifeerisen veren autologisten mononukleaaristen solujen sytokonsentraatista mobilisoinnin jälkeen, kuten kokeelliselle ryhmälle on määritelty. Kasvainspesifiset antigeenit aktiiviselle vertailuryhmälle saadaan potilaan kasvainkudoksesta.

Potilaan TC:t ja TSC:t sekä HSC:t läpikäyvät täydellisen transkriptikartoituksen ja geeniekspressioprofiloinnin (CTMGEP) ja proteomikartoituksen ja proteiinien profiloinnin (PMPP). Tärkeimmät (3 tai 4 proteiinia, joilla on maksimaalinen normalisoitu intensiteetti) onkospesifiset proteiinit (OSP) määritetään TC:iden proteomitestauksen perusteella, kun taas TSC:iden proteomiprofilointi ja proteiini-proteiini-suhteita koskevien tietokantojen käyttö mahdollistavat solunsisäisten signaalinsiirtoreittien (ISTP) havaitsemisen ilman vaikutusta. syöpää aiheuttava ja säätelevä. Lisäksi havaitaan reseptorikalvokohteet, jotka vaikuttavat näihin signaalireitteihin (akseptorikalvoproteiinit), sekä proteiineja, jotka pystyvät aktivoimaan niitä (proteiiniligandit). TSC:iden CTMGEP vahvistaa diagnosoidun toiminnallisen ISTP:n. CTMGEP:n matemaattinen mallintaminen ja vertailu Affymetrix GeneChip Ihmisen genomin U133A Array-aineistoon paljastaa häiriöitä, jotka pystyvät indusoimaan kemiallisesti HSC:itä ja muokkaamaan proteomiprofiiliaan tarvittavien proteiiniligandien erittymisen aikaansaamiseksi. Tietokantaanalyysi mahdollistaa sen ymmärtämisen, kuinka pienimolekyylisen aineen tai mikro-RNA:n aiheuttamat muutokset geenin ilmentymisessä vastaavat tutkitussa profiilissa havaittuja muutoksia. Jos vastaavuus on merkittävää, oletetaan, että aine tai vastaavat aineet voivat käynnistää vaikutuksen. Jos antikorrelaatio on merkittävää, aineen oletetaan käynnistävän päinvastainen vaikutus geeniekspression modifikaatiossa. HSC:iden transkriptiota modifioidaan yhdessä viljelemällä yksitumaisia ​​soluja perturbageenien kanssa. Niiden biologista tehokkuutta arvioidaan in vitro Homunculus-bioreaktorissa. Sitten valmiste varastoidaan edellä kuvatulla tavalla.

Yksittäinen DV valmistetaan potilaan ääreisveren leukokonsentraatista. Lymfosyytit eristetään, viljellään G-CSF:llä ja interleukiini-2:lla, niitä käsitellään kasvainspesifisillä antigeeneillä, TNF-α:lla ja PGE2:lla 48 tunnin ajan ja ladataan rekombinanttiproteiineilla, jotka ovat identtisiä kasvainsolujen proteomisissa testeissä havaittujen avainkasvainspesifisten antigeenien kanssa ( TC:t). DV-immuunivaikutuksen perusmekanismi on kasvaimen toksisten lymfosyyttien kehittäminen potilaan elimistön toimesta.

CTL:t saadaan edellä kuvatulla tavalla. Interventio kuvataan asianmukaisessa osiossa.

Myrkyllisyys arvioidaan CTC-NCI-kriteerien mukaisesti. Tehokkuus arvioidaan seuraavien kriteerien mukaan:

1. Täydellinen vaikutus - kaikkien kasvainpesäkkeiden täydellinen katoaminen
2. Osittainen vaikutus - kasvaimen koon ja/tai metastaattisten pesäkkeiden pieneneminen vähintään 50 % eikä merkkejä uusista kasvaimista
3. Stabilointi - kasvainpesäkkeiden koon pieneneminen alle 50 % eikä merkkejä uusista kasvaimista
4. Edistyminen - kasvainpesäkkeiden kasvu hoidon aikana. Mosaiikkivaikutuksen tapauksessa, kun osa pesäkkeistä etenee ja osa on stabiilia tai vähentynyt, terapiaa jatketaan, mutta tapaukset analysoidaan kontekstin "Vaste terapiaan" ulkopuolella.