Proteom-basierte Immuntherapie von Lungenkrebs-Hirnmetastasen

Die Studie wird 60 Fälle von Refraktor-Hirnmetastasen von Lungenkrebs (BMLC) unterschiedlicher Malignität nach nicht weniger als einer Reihe von Standard-Chemotherapien und einer vollständigen Strahlentherapie umfassen.

Die Teilnehmer treten in den Versuchsarm (Erstlinientherapie) ein und werden in 3 Untergruppen von 20 Fällen unterteilt: Gruppe I der histologisch bestätigten Fälle von Lungenadenokarzinom mit Hirnmetastasen; Gruppe II der histologisch bestätigten Fälle von kleinzelligem Lungenkrebs mit Hirnmetastasen; und Gruppe III von Fällen von Plattenepithelkarzinomen mit Hirnmetastasen.

Die Erstlinientherapie von BMLC umfasst allogene haploidentische hämatopoetische Stammzellen (HSCs), dendritische Vakzine (DV) und zytotoxische Lymphozyten (CTLs).

HSCs werden verwendet, um eine individualisierte adoptive Immunantwort zu stimulieren, Tumorzellen (TCs) toxisch zu beeinflussen und Tumorstammzellen (TSCs) gezielt zu regulieren, um ihr reproduktives und proliferatives Potenzial zu unterdrücken. Um HSC zu erhalten, erhält der Spender 4 Tage lang 8 subkutane Verabreichungen von Granulozyten-Kolonie-stimulierendem Faktor (G-CSF) im Abstand von 8–10 Stunden. An den ersten drei Tagen beträgt eine Einzeldosis 2,5 µg pro 1 kg Körpergewicht, am letzten Tag wird die Dosis verdoppelt. Die Stammzellen werden am Tag 5 geerntet. Rote Blutkörperchen werden durch Zentrifugieren entnommen. Der Gehalt an Zellmarkern wird durchflusszytometrisch ausgewertet. Das Ergebnis wird nach Zytokonzentrat-Anreicherung und Entfernung von reifen Zellen und Plasma daraus bewertet. Das Präparat wird in Röhrchen zu 4 ml mit Kryoprotektor und 10 % Polylucin-Lösung gelagert. Der Stammzellenanteil beträgt nicht weniger als 0,5 x 106 CD34+ und der Lymphozytenanteil beträgt nicht weniger als 0,5 x 109 pro Verabreichung.

Die Gehirntumorprobe wird durch stereotaktische/endoskopische/offene Biopsie von allen in die Studie eingeschlossenen Patienten gewonnen. TCs und TSCs werden immunchemisch aus BMLC-Biopsieproben isoliert. Ein Teil der Tumorprobe wird für standardmäßige histologische, zytologische und immunchemische Tests verwendet, während TCs und TSCs (CD133+) aus dem anderen Teil isoliert werden.

Dendritische Zellen werden aus peripheren mononukleären Blutzellen isoliert und kultiviert. Die Tumorprobe liefert tumorspezifische Antigene zur Herstellung des dendritischen Impfstoffs (DV).

Die Herstellung von CTLs zielt darauf ab, die zytotoxische Wirkung auf den Tumor aufgrund der großen Anzahl zirkulierender CTLs zu verstärken. CTL's werden aus etwa 100 ml peripherem Blut nach 3 DV-Verabreichungen isoliert und von ihnen dendritische Zellen (DCs) gezüchtet. Dann wird wiederholt peripheres Blut abgenommen und Lymphozyten werden isoliert. Die CTLs werden mit DCs, die mit Tumorantigenen (Erstlinientherapie) oder rekombinanten Proteinen analog zu onkospezifischen Schlüsselproteinen (Zweitlinientherapie) beladen sind, mehrere Male kokultiviert, um ihre Anzahl zu erhöhen (108–109). Ihr Immunphänotyp wird nachgewiesen und CTLs werden kryokonserviert. Die erste Stimulation von CTLs mit DCs dauert 6–8 Tage, die zweite 2–4 Tage, die nächsten 2 Tage werden die Lymphozyten zum dritten und vierten Mal stimuliert. Und dann werden die empfangenen Lymphozyten 2 Tage lang durch IL-2 stimuliert.

Sechs Monate nach Abschluss der Erstlinientherapie wird die Wirksamkeit bewertet und die Kohorte, die eine Wirksamkeit zeigt, setzt die Therapie fort, während die Kohorte, die keine Wirksamkeit zeigt, die Studie mit der Zweitlinientherapie im aktiven Vergleichsarm fortsetzt.

Der Arm der Zweitlinientherapie verwendet DV mit rekombinanten Proteinen analog zu onkospezifischen Schlüsselproteinen, autologen CTLs und autologen HSCs mit modifiziertem Proteom.

Autologe HSCs werden vom Versuchsteilnehmer wie zuvor beschrieben erhalten. Die Zellpräparation von HSC für den aktiven Vergleichsarm wird aus dem Zytokonzentrat autologer mononukleärer Zellen des peripheren Blutes nach Mobilisierung wie für den experimentellen Arm angegeben erhalten. Tumorspezifische Antigene für die aktive Vergleichsgruppe werden durch Tumorgewebe des Patienten bereitgestellt.

TCs und TSCs sowie HSCs des Patienten werden einer vollständigen Transkriptomkartierung und Genexpressionsprofilierung (CTMGEP) sowie einer Proteomkartierung und Proteinprofilierung (PMPP) unterzogen. Schlüssel (3 oder 4 Proteine ​​mit maximal normalisierter Intensität) onkospezifische Proteine ​​(OSP) werden gemäß Proteomtests von TCs bestimmt, während die Proteomprofilierung von TSCs und die Verwendung von Datenbanken mit Protein-Protein-Beziehungen den Nachweis von unbeeinflussten intrazellulären Signaltransduktionswegen (ISTP) ermöglichen durch Karzinogenese und regulierungsfähig. Außerdem werden Rezeptormembranziele zur Beeinflussung dieser Signalwege (Akzeptormembranproteine) sowie Proteine, die diese aktivieren können (Proteinliganden), nachgewiesen. CTMGEP von TSCs bestätigt diagnostiziertes funktionelles ISTP. Die mathematische Modellierung von CTMGEP und der Vergleich mit Affymetrix GeneChip Humangenom-U133A-Array-Daten zeigen, dass Perturbagene in der Lage sind, HSCs chemisch zu induzieren und ihr Proteomprofil zu modifizieren, um die Sekretion der erforderlichen Proteinliganden bereitzustellen. Die Datenbankanalyse ermöglicht ein Verständnis dafür, wie Änderungen in der Genexpression, die durch einen niedermolekularen Wirkstoff oder Mikro-RNA induziert werden, mit den im untersuchten Profil beobachteten Änderungen korrespondieren. Bei erheblicher Korrespondenz wird vermutet, dass der Agent oder ähnliche Agenten die Wirkung auslösen können. Wenn die Antikorrelation signifikant ist, soll das Mittel einen gegenteiligen Effekt bei der Modifikation der Genexpression auslösen. Das Transkriptom von HSCs wird durch Kokultivierung mononukleärer Zellen mit Perturbagenen modifiziert. Ihre biologische Wirksamkeit wird in vitro im Homunculus-Bioreaktor bewertet. Dann wird die Zubereitung wie zuvor beschrieben gelagert.

Individuelles DV wird aus dem Leukokonzentrat des peripheren Blutes des Patienten hergestellt. Die Lymphozyten werden isoliert, mit G-CSF und Interleukin-2 kultiviert, mit tumorspezifischen Antigenen, TNF-α und PGE2 für 48 Stunden konditioniert und mit rekombinanten Proteinen beladen, die mit den wichtigsten tumorspezifischen Antigenen identisch sind, die bei proteomischen Tests von Tumorzellen nachgewiesen wurden ( TC). Der grundlegende Mechanismus der DV-Immunwirkung ist die Entwicklung tumortoxischer Lymphozyten durch den Organismus des Patienten.

CTLs werden wie zuvor beschrieben erhalten. Der Eingriff wird im entsprechenden Abschnitt beschrieben.

Die Toxizität wird gemäß den CTC-NCI-Kriterien bewertet. Die Effizienz wird nach folgenden Kriterien bewertet:

1. Vollständige Wirkung - vollständiges Verschwinden aller Tumorherde
2. Teilwirkung – Reduktion der Tumorgröße und/oder Metastasenherde um nicht weniger als 50 % und keine Anzeichen neuer Neoplasmen
3. Stabilisierung – Verringerung der Tumorherdgröße um weniger als 50 % und keine Anzeichen neuer Neoplasmen
4. Fortschritt - Wachstum von Tumorherden während der Therapie. Im Falle eines Mosaikeffekts, wenn ein Teil der Herde fortschreitet und ein Teil stabil ist oder abnimmt, wird die Therapie fortgesetzt, aber die Fälle werden außerhalb des Kontexts „Ansprechen auf die Therapie“ analysiert.