CABG手術の患者候補に対する間葉系幹細胞由来のエキソソームと自家ミトコンドリアの共移植

この研究は、テヘラン心臓センターで後ろ向きコホート研究として実施されます。 患者は、スペックル心エコー検査によって決定された駆出率が非常に低いCABG候補から選択されます。 重度の併存疾患または脳損傷のある患者は、研究から除外されます。 詳細なインフォームド コンセントは、患者から取得されます。 同意を拒否する患者は、標準的な治療を受けます。

基準

包含基準:

• CAD±MRによりCABGの適応となる患者
• Q波心筋梗塞歴1ヶ月未満
• 年齢: 35～80歳
• LVEF
• -低用量ドブタミンストレス心エコー図および/またはタリウム再分布核研究によって証明される生存率研究（少なくとも4つの生存セグメント）。

除外基準:

• 重度の合併症（腎不全、肝不全など）
• インフォームドコンセントを提供できない

• 脳損傷

  1. 研究グループ:

     すべての患者に対して行われる標準治療は、冠動脈バイパス移植手術による血行再建術です。 患者は、標準治療に加えて、受けた治療に基づいて4つのグループに分けられます。

     冠動脈内および心筋内注射によるミトコンドリアおよびエキソソーム移植。 研究グループ:

     1. エクソソームの冠動脈内および心筋内注射 (患者 5 人)
     2. ミトコンドリアの冠動脈内および心筋内注射 (患者 5 名)
     3. エクソソームとミトコンドリアの冠動脈内および心筋内注射 (患者 5 人)
     4. プラセボ（５例） ｂ群及びｃ群の患者については、胸骨切開後に露出した胸筋から手術開始時に採取した筋組織標本からミトコンドリアを抽出する。 手術と同時に筋肉標本からミトコンドリアを抽出します。 バイパス移植によって血行再建が達成されると、抽出されたミトコンドリアが心筋に注入されます。 31 ゲージのインスリン注射器は、心筋の虚血領域の 10 の異なる部位に注射を行います。 心筋への直接注入に加えて、抽出されたミトコンドリアの 3 分の 1 が冠状静脈洞に注入されます。

     グループ a および b の患者は、ステップ 2 で説明した MSC 細胞から抽出されたエクソソームを受け取ります。抽出されたエクソソームは、心肺バイパスの配置後に冠状静脈洞に注入されます。

  2. ヒト臍帯 (UC-MSC) からの間葉系幹細胞の分離と特徴付け ヒト臍帯間葉系幹細胞は、以前の研究の観点からコラゲナーゼによって酵素的に分離され、10% エキソソーム枯渇 FBS (GMP) を含む DMEM/F12 培地で培養されます。等級）ペニシリンおよびストレプトマイシン抗生物質を添加し、37°C​​および5％CO2でインキュベートしました。 細胞のコンフルエンスが 80% に達した後、馴化培地が収集されます (エキソソーム分離のために、細胞は通路 3 で使用されます)。

     表現型分析は、3 番目の継代で実行されます。 表面抗原は、フローサイトメトリーを使用して、CD90、CD105、CD73、および CD34 について分析されます。

  3. 超遠心分離と特徴付けによる UC-MSC からのエキソソームの抽出。

     細胞のコンフルエンスが 80% に達した後、馴化培地は、いくつかの超遠心分離機によるエキソソーム分離のために収集されます。 簡単に言えば、48 時間後、細胞の馴化培地 (CM) を 400 g で 10 分間遠心分離して細胞を除去し、2500 g で 30 分間遠心分離してアポトーシス体と破片を除去します。 その後、CM を 100,000 g で 2 時間 2 回遠心分離した後、エキソソーム ペレットを PBS に懸濁させました。

     ウェスタンブロットを使用して、表面抗原を CD9、CD63、および CD81 について分析します。 さらに、Bradford Colorimetric Assay (BCA) キットを使用して、570 nm の波長でエクソソーム産生総タンパク質を測定します。 動的光散乱 (DLS) は、エクソソームのサイズ分布を決定します。

  4. US-MSC からのミトコンドリアの抽出と特徴付け。

  5. 臨床試験移植ミトコンドリアおよびエキソソームのフェーズ I の安全性の短期評価:

     患者は、手術後、臨床症状、兆候、不整脈、心エコー検査の評価、検査結果に基づいて綿密に監視されます。

  6. 血液因子 (cTnT、CK-MB) に関する患者の短期評価 クレアチンキナーゼ (CK) およびそのアイソザイム CK-MB は、急性心筋梗塞 (AMI) を診断するための重要なツールです。 心筋細胞の総 CK に対する CK-MB の含有量はさまざまです。正常な心筋では低く、低酸素心筋や心臓発作では数倍増加します。

  7. 2 か月前後の SPECT スキャン、心臓 MRI、ドブタミン負荷スペックル心エコー検査。

     患者の回復の評価は、手術の 1 か月後に行われます。 この評価は、患者の兆候と症状、機能クラスの評価、スペックルとドブタミン ストレス エコ、SPECT 心臓核スキャン、および心臓 MRI 画像 (CMR) に基づいています。 評価は、手術前と手術後 1 か月に行われます。 患者の状態の改善の可能性を報告するために、評価結果間で綿密な比較が行われます。

     フォローアップ評価のための評価変数には以下が含まれます。

     • Eco および CMR からの駆出率変数 (LVEF、RVEF、グローバル EF)
     • 16 SPECT スキャンと CMR によるセグメント生存率分析
     • 患者の身体検査に基づく NYHA 分類評価。
  8. データ分析は、IBM SPSS Statistics バージョン 25 によって実行されます。 0.05 未満の p 値は有意と評価されます。