Cotransplante de exossomos derivados de células-tronco mesenquimais e mitocôndrias autólogas para pacientes candidatos à cirurgia de revascularização miocárdica

Esta pesquisa será realizada como um estudo de coorte retrospectivo no Tehran Heart Center. Os pacientes serão selecionados entre candidatos a CABG com fração de ejeção severamente baixa determinada por ecocardiografia speckle. Pacientes com comorbidades graves ou danos cerebrais serão excluídos do estudo. O consentimento informado detalhado será obtido dos pacientes. Os pacientes que se recusarem a fornecer consentimento receberão tratamento padrão.

Critério

Critério de inclusão:

• Pacientes candidatos a CRM por CAD±RM
• História de MI com onda Q, menos de um mês
• Idade: 35-80
• FEVE
• Estudo de viabilidade evidenciado por ecocardiograma de estresse com dobutamina de baixa dose e/ou estudo nuclear de redistribuição de tálio (pelo menos quatro segmentos viáveis).

Critério de exclusão:

• Comorbidades graves (por exemplo, insuficiência renal, insuficiência hepática, etc.)
• Incapacidade de fornecer consentimento informado

• Danos Cerebrais

  1. Grupos de estudo:

     O tratamento padrão realizado para todos os pacientes é a revascularização por cirurgia de revascularização miocárdica. Os pacientes serão divididos em quatro grupos com base nos tratamentos recebidos, além do tratamento padrão.

     Transplante mitocondrial e de exossomos por injeção intracoronária e intramiocárdica. Grupos de estudo:

     1. Injeção intracoronária e intramiocárdica de exossomos (5 pacientes)
     2. Injeção intracoronária e intramiocárdica de mitocôndrias (5 pacientes)
     3. Injeção intracoronária e intramiocárdica de exossomos e mitocôndrias (5 pacientes)
     4. Placebo (5 pacientes) Para os pacientes dos grupos b e c, as mitocôndrias serão extraídas de uma amostra de tecido muscular extraída no início da cirurgia de músculos peitorais expostos após esternotomia. As mitocôndrias serão extraídas do espécime muscular simultaneamente com a cirurgia. Quando a revascularização for alcançada pelos enxertos de bypass, as mitocôndrias extraídas serão injetadas no músculo cardíaco. Uma seringa de insulina de calibre 31 realizará injeções em dez locais diferentes na área isquêmica do músculo cardíaco. Além da injeção direta no músculo cardíaco, um terço das mitocôndrias extraídas será injetado no seio coronário.

     Os pacientes dos grupos aeb receberão o exossomo extraído das células MSC descrito na etapa 2. O exossomo extraído será injetado no seio coronário após a colocação da circulação extracorpórea.

  2. Isolamento e caracterização de células-tronco mesenquimais do cordão umbilical humano (UC-MSCs) Células-tronco mesenquimais do cordão umbilical humano são isoladas enzimaticamente por colagenase em termos de estudo prévio e cultivadas em meio DMEM/F12 com 10% de exossomos depletados FBS (GMP grau) com antibióticos penicilina e estreptomicina e incubados a 37 ° C e 5% de CO2. Depois que a confluência celular atinge 80%, o meio condicionado é coletado (para isolamento de exossomos, as células são usadas na passagem 3).

     A análise fenotípica é realizada na terceira passagem. Os antígenos de superfície são analisados ​​para CD90, CD105, CD73 e CD34 usando citometria de fluxo.

  3. Extração de exossomos de UC-MSCs por ultracentrifugação e caracterização.

     Depois que a confluência celular atinge 80%, o meio condicionado é coletado para isolamento de exossomos por várias ultracentrífugas. Em resumo, após 48 h, o meio condicionado (CM) das células é centrifugado a 400 g por 10 min para remover as células e a 2500 g por 30 min para eliminar corpos apoptóticos e detritos. Em seguida, o CM foi centrifugado duas vezes a 100.000 g por duas horas, seguido pelo processo de suspensão do exossomo pellet em PBS.

     Os antígenos de superfície são analisados ​​para CD9, CD63 e CD81 usando western blot. Além disso, o kit Bradford Colorimetric Assay (BCA) é usado para medir a proteína total de produção de exossomos em um comprimento de onda de 570 nm. A dispersão de luz dinâmica (DLS) determina a distribuição de tamanho dos exossomos.

  4. Extração de mitocôndrias de US-MSCs e caracterização.

  5. Avaliação de curto prazo da segurança de mitocôndrias de transplante de ensaio clínico e fase I do exossomo:

     O paciente será monitorado de perto após a cirurgia com base em sintomas clínicos, sinais, arritmia, avaliações ecocardiográficas e resultados laboratoriais.

  6. Avaliações de curto prazo do paciente em termos de fatores sanguíneos (cTnT, CK-MB) Creatina quinase (CK) e sua isoenzima CK-MB são ferramentas críticas para o diagnóstico de infarto agudo do miocárdio (IAM). O conteúdo de CK-MB em relação à CK total nas células miocárdicas é variável; no miocárdio normal, é baixo e aumentado várias vezes no miocárdio hipóxico e no acidente vascular cerebral.

  7. SPECT scan, ressonância magnética cardíaca e ecocardiografia Speckle sob estresse com dobutamina, antes e após 2 meses.

     A avaliação da recuperação do paciente será realizada um mês após a cirurgia. Esta avaliação é baseada nos sinais e sintomas dos pacientes, avaliações da Classe Funcional, Speckle e Eco de estresse com dobutamina, SPECT Nuclear heart Scan e ressonância magnética cardíaca (RMC). As avaliações serão realizadas antes da cirurgia e um mês após a cirurgia. Fechar A comparação será realizada entre os resultados da avaliação para relatar possíveis melhorias na condição do paciente.

     As variáveis ​​avaliadas para avaliação de acompanhamento incluem:

     • Variáveis ​​de Fração de Ejeção de Eco e CMR (LVEF, RVEF, Global EF)
     • Análise de viabilidade de 16 segmentos por SPECT scan e CMR
     • Avaliação da classificação da NYHA com base no exame físico do paciente.
  8. A Análise de Dados será realizada pelo IBM SPSS Statistics Versão 25. Um valor p inferior a 0,05 será considerado significativo.