Mesenkymaalisista kantasoluista peräisin olevien eksosomien ja autologisten mitokondrioiden yhteissiirto CABG-kirurgiaan hakeville potilaille

Tämä tutkimus tehdään retrospektiivisenä kohorttitutkimuksena Teheranin sydänkeskuksessa. Potilaat valitaan CABG-ehdokkaista, joilla on erittäin alhainen ejektiofraktio, joka määritetään pilkkukaikukardiografialla. Potilaat, joilla on vakavia samanaikaisia ​​sairauksia tai aivovaurioita, suljetaan pois tutkimuksesta. Potilailta otetaan yksityiskohtainen tietoinen suostumus. Potilaat, jotka kieltäytyvät antamasta suostumusta, saavat normaalia hoitoa.

Kriteeri

Sisällyttämiskriteerit:

• Potilaat, jotka ovat ehdokkaita CABG:hen CAD±MR:n vuoksi
• Q-aallon MI:n historia, alle kuukausi
• Ikä: 35-80
• LVEF
• Elinkelpoisuustutkimus, josta käy ilmi pieniannoksinen dobutamiinin stressin kaikukuvaus ja/tai talliumin uudelleenjakautumisen ydintutkimus (vähintään neljä elinkelpoista segmenttiä).

Poissulkemiskriteerit:

• Vaikeat samanaikaiset sairaudet (esim. munuaisten vajaatoiminta, maksan vajaatoiminta jne.)
• Kyvyttömyys antaa tietoon perustuva suostumus

• Aivovaurio

  1. Opintoryhmät:

     Kaikille potilaille suoritettava vakiohoito on revaskularisaatio sepelvaltimon ohitusleikkauksella. Potilaat jaetaan neljään ryhmään saamiensa hoitojen perusteella normaalihoidon lisäksi.

     Mitokondrio- ja eksosomisiirto intrakoronaarisella ja sydänlihaksensisäisellä injektiolla. Opintoryhmät:

     1. Eksosomien intrakoronaarinen ja sydänlihaksensisäinen injektio (5 potilasta)
     2. Mitokondrioiden intrakoronaarinen ja sydänlihaksensisäinen injektio (5 potilasta)
     3. Eksosomien ja mitokondrioiden intrakoronaarinen ja sydänlihaksensisäinen injektio (5 potilasta)
     4. Plasebo (5 potilasta) Ryhmien b ja c potilaille mitokondriot uutetaan lihaskudosnäytteestä, joka on otettu leikkauksen alussa rintakehän lihaksista, jotka paljastettiin sternotomian jälkeen. Mitokondriot uutetaan lihasnäytteestä samanaikaisesti leikkauksen kanssa. Kun revaskularisaatio saavutetaan ohitussiirteillä, uutetut mitokondriot ruiskutetaan sydänlihakseen. 31-mittaisella insuliiniruiskulla pistetään kymmeneen eri kohtaan sydänlihaksen iskeemisellä alueella. Suoran sydänlihakseen annettavan injektion lisäksi kolmasosa uutetuista mitokondrioista ruiskutetaan sepelvaltimoonteloon.

     Potilaat ryhmissä a ja b saavat uutetun eksosomin MSC-soluista, jotka on kuvattu vaiheessa 2. Uutettu eksosomi injektoidaan sepelvaltimoonteloon Cardiopulmonary bypass -ohituslaitteen asettamisen jälkeen.

  2. Mesenkymaalisten kantasolujen eristäminen ja karakterisointi ihmisen napanuorasta (UC-MSC) Ihmisen napanuoran mesenkymaaliset kantasolut eristetään entsymaattisesti kollagenaasilla aikaisemman tutkimuksen perusteella ja niitä viljellään DMEM/F12-elatusaineessa, jossa on 10 % eksosomeista poistettua FBS:ää (GMP). luokka) penisilliini- ja streptomysiiniantibioottien kanssa ja inkuboitiin 37 °C:ssa ja 5 % CO2:ssa. Kun solujen konfluenssi saavuttaa 80 %:n, käsitelty väliaine kerätään (eksosomieristystä varten soluja käytetään siirrostuksessa 3).

     Fenotyyppianalyysi suoritetaan kolmannella jaksolla. Pinta-antigeenit analysoidaan CD90:n, CD105:n, CD73:n ja CD34:n suhteen käyttämällä virtaussytometriaa.

  3. Eksosomien uuttaminen UC-MSC:istä ultrasentrifugoimalla ja karakterisoinnilla.

     Kun solujen yhtymä on saavuttanut 80 %:n, valmistettu väliaine kerätään eksosomieristystä varten useilla ultrasentrifugeilla. Lyhyesti sanottuna 48 tunnin kuluttua solujen vakioitua alustaa (CM) sentrifugoidaan 400 g:ssä 10 minuuttia solujen poistamiseksi ja 2500 g:ssä 30 minuutin ajan apoptoottisten kappaleiden ja roskien poistamiseksi. Myöhemmin CM sentrifugoitiin kahdesti 100 000 g:ssä kahden tunnin ajan, mitä seurasi prosessi, jossa eksosomipelletti suspendoitiin PBS:ään.

     Pinta-antigeenit analysoidaan CD9:n, CD63:n ja CD81:n suhteen käyttämällä Western blot -menetelmää. Lisäksi Bradford Colorimetric Assay (BCA) -kittiä käytetään mittaamaan eksosomituotannon kokonaisproteiinia aallonpituudella 570 nm. Dynaaminen valonsironta (DLS) määrittää eksosomien kokojakauman.

  4. Mitokondrioiden uuttaminen US-MSC:stä ja karakterisointi.

  5. Kliinisen tutkimuksen elinsiirtomitokondrioiden ja eksosomivaiheen I turvallisuuden lyhytaikainen arviointi:

     Potilasta seurataan tarkasti leikkauksen jälkeen kliinisten oireiden, merkkien, rytmihäiriöiden, kaikukardiografisten arvioiden ja laboratoriotulosten perusteella.

  6. Potilaan lyhyen aikavälin veritekijöiden (cTnT, CK-MB) arvioinnit Kreatiinikinaasi (CK) ja sen isoentsyymi CK-MB ovat tärkeitä työkaluja akuutin sydäninfarktin (AMI) diagnosoinnissa. CK-MB:n pitoisuus suhteessa CK:n kokonaismäärään sydänlihassoluissa vaihtelee; normaalissa sydänlihaksessa se on alhainen ja voimistunut moninkertaisesti hypoksisessa sydänlihaksessa ja sydänhalvauksessa.

  7. SPECT-skannaus, sydämen magneettikuvaus ja dobutamiinin stressipilkkukaikukardiografia, ennen ja jälkeen 2 kuukautta.

     Potilaan toipumisen arviointi suoritetaan kuukauden kuluttua leikkauksesta. Tämä arviointi perustuu potilaiden merkkeihin ja oireisiin, toimintaluokan arviointeihin, täplä- ja dobutamiinin stressiin Eco, SPECT Nuclear heart Scan ja sydämen MRI-kuvaukseen (CMR). Arvioinnit tehdään ennen leikkausta ja kuukausi leikkauksen jälkeen. Arviointitulosten välillä tehdään läheinen vertailu, jotta voidaan raportoida potilaan tilan mahdollisista parannuksista.

     Arvioituja muuttujia seurantaarviointia varten ovat:

     • Ejektiofraktion muuttujat Eco- ja CMR-arvoista (LVEF, RVEF, Global EF)
     • 16 Segmenttien elinkelpoisuusanalyysi SPECT-skannauksella ja CMR:llä
     • NYHA-luokitus perustuu potilaan fyysiseen tutkimukseen.
  8. Tietojen analysoinnin suorittaa IBM SPSS Statistics Version 25. P-arvo, joka on pienempi kuin 0,05, katsotaan merkitseväksi.