Совместная трансплантация экзосом, полученных из мезенхимальных стволовых клеток, и аутологичных митохондрий пациентам-кандидатам на операцию АКШ

Это исследование будет проводиться как ретроспективное когортное исследование в Тегеранском кардиологическом центре. Пациенты будут отобраны из кандидатов на АКШ с очень низкой фракцией выброса, определяемой с помощью спекл-эхокардиографии. Пациенты с тяжелыми сопутствующими заболеваниями или поражением головного мозга будут исключены из исследования. У пациентов будет получено подробное информированное согласие. Пациенты, отказывающиеся дать согласие, получат стандартное лечение.

Критерии

Критерии включения:

• Пациенты, которые являются кандидатами на АКШ из-за ИБС ± МР
• История ИМ с зубцом Q, менее одного месяца
• Возраст: 35-80 лет
• ФВ ЛЖ
• Исследование жизнеспособности, подтвержденное стресс-эхокардиограммой с низкими дозами добутамина и/или ядерным исследованием перераспределения таллия (не менее четырех жизнеспособных сегментов).

Критерий исключения:

• Тяжелые сопутствующие заболевания (например, почечная недостаточность, печеночная недостаточность и др.)
• Невозможность дать информированное согласие

• Церебральное повреждение

  1. Учебные группы:

     Стандартным лечением, проводимым для всех пациентов, является реваскуляризация путем операции аортокоронарного шунтирования. Пациенты будут разделены на четыре группы в зависимости от полученного лечения в дополнение к стандартному лечению.

     Трансплантация митохондрий и экзосом путем интракоронарной и интрамиокардиальной инъекции. Учебные группы:

     1. Интракоронарное и интрамиокардиальное введение экзосом (5 пациентов)
     2. Интракоронарная и интрамиокардиальная инъекция митохондрий (5 пациентов)
     3. Интракоронарное и интрамиокардиальное введение экзосом и митохондрий (5 пациентов)
     4. Плацебо (5 пациентов). У пациентов в группах b и c митохондрии будут извлечены из образца мышечной ткани, извлеченного в начале операции из грудных мышц, обнаженных после стернотомии. Митохондрии будут извлечены из образца мышц одновременно с операцией. Когда реваскуляризация достигается с помощью обходных трансплантатов, извлеченные митохондрии будут вводиться в сердечную мышцу. Инсулиновый шприц 31-го калибра будет выполнять инъекции в десять различных участков ишемизированной области сердечной мышцы. Помимо прямой инъекции в сердечную мышцу, одна треть извлеченных митохондрий будет введена в коронарный синус.

     Пациенты в группах а и б получат экзосомы, извлеченные из клеток МСК, описанные в шаге 2. Извлеченные экзосомы будут введены в коронарный синус после установки сердечно-легочного шунта.

  2. Выделение и характеристика мезенхимальных стволовых клеток из пуповины человека (UC-MSCs) Мезенхимальные стволовые клетки пуповины человека ферментативно выделяют с помощью коллагеназы в соответствии с предыдущим исследованием и культивируют в среде DMEM/F12 с 10% обедненной экзосомами FBS (GMP). град.) с пенициллиновыми и стрептомициновыми антибиотиками и инкубируют при 37°С и 5% СО2. После того, как слияние клеток достигает 80%, кондиционированную среду собирают (для выделения экзосом клетки используют в пассаже 3).

     Фенотипический анализ проводят на третьем пассаже. Поверхностные антигены анализируют на CD90, CD105, CD73 и CD34 с использованием проточной цитометрии.

  3. Извлечение экзосом из UC-MSC ультрацентрифугированием и характеристикой.

     После того, как слияние клеток достигает 80%, кондиционированную среду собирают для выделения экзосом с помощью нескольких ультрацентрифуг. Вкратце, через 48 ч кондиционированную среду (СМ) клеток центрифугируют при 400 g в течение 10 мин для удаления клеток и при 2500 g в течение 30 мин для удаления апоптотических телец и дебриса. После этого КМ дважды центрифугировали при 100 000 g в течение двух часов с последующим суспендированием осадка экзосомы в PBS.

     Поверхностные антигены анализируют на CD9, CD63 и CD81 с помощью вестерн-блоттинга. Кроме того, набор Bradford Colorimetric Assay (BCA) используется для измерения общего белка, вырабатываемого экзосомами, при длине волны 570 нм. Динамическое рассеяние света (DLS) определяет распределение размеров экзосом.

  4. Извлечение митохондрий из УЗ-МСК и характеристика.

  5. Краткосрочная оценка безопасности клинических испытаний трансплантата митохондрий и экзосом фазы I:

     Пациент будет находиться под пристальным наблюдением после операции на основании клинических симптомов, признаков, аритмии, эхокардиографических оценок и результатов лабораторных исследований.

  6. Краткосрочные оценки состояния пациента с точки зрения факторов крови (cTnT, CK-MB), креатинкиназы (CK) и ее изофермента CK-MB являются важными инструментами для диагностики острого инфаркта миокарда (ОИМ). Содержание КК-МВ относительно общего КК в клетках миокарда вариабельно; в нормальном миокарде он низкий, а в гипоксическом миокарде и инфаркте повышен в несколько раз.

  7. ОФЭКТ, МРТ сердца и стресс-спекл-эхокардиография с добутамином до и через 2 месяца.

     Оценка выздоровления пациента будет проводиться через месяц после операции. Эта оценка основана на признаках и симптомах пациентов, оценке функционального класса, спекл- и добутаминовой нагрузке Eco, ядерном сканировании сердца SPECT и МРТ сердца (CMR). Оценки будут проводиться до операции и через месяц после операции. Будет проведено тщательное сравнение результатов оценки, чтобы сообщить о возможных улучшениях состояния пациента.

     Оцениваемые переменные для последующей оценки включают:

     • Переменные фракции выброса из Eco и CMR (LVEF, RVEF, Global EF)
     • Анализ жизнеспособности 16 сегментов с помощью сканирования SPECT и CMR
     • Оценка классификации NYHA на основе физического осмотра пациента.
  8. Анализ данных будет выполняться с помощью IBM SPSS Statistics версии 25. Значение p менее 0,05 будет расцениваться как значимое.