CABG 수술 후보 환자를 위한 중간엽 줄기세포 유래 엑소좀 및 자가 미토콘드리아의 공동 이식

이 연구는 테헤란 심장 센터에서 후향적 코호트 연구로 수행됩니다. 환자는 스펙클 심초음파로 결정된 박출률이 심각하게 낮은 CABG 후보 중에서 선택됩니다. 중증 동반질환 또는 뇌손상이 있는 환자는 연구에서 제외됩니다. 자세한 정보에 입각 한 동의는 환자로부터 취해질 것입니다. 동의를 거부하는 환자는 표준 치료를 받게 됩니다.

기준

포함 기준:

• CAD±MR로 인해 CABG 대상이 되는 환자
• Q-wave MI의 병력, 1개월 미만
• 나이: 35-80
• LVEF
• 저용량 도부타민 스트레스 심초음파 및/또는 탈륨 재분포 핵 연구(최소 4개의 생존 세그먼트)에 의해 입증된 생존력 연구.

제외 기준:

• 심각한 동반질환(예: 신부전, 간부전 등)
• 정보에 입각한 동의를 제공할 수 없음

• 대뇌 손상

  1. 스터디 그룹:

     모든 환자에 대해 수행되는 표준 치료는 관상동맥 우회로 이식 수술에 의한 혈관재생술입니다. 환자는 표준 치료 외에 받은 치료에 따라 네 그룹으로 나뉩니다.

     관상동맥내 및 심근내 주사에 의한 미토콘드리아 및 엑소좀 이식. 스터디 그룹:

     1. 엑소좀 관상동맥내 및 심근내 주사(5명)
     2. 미토콘드리아의 관상동맥내 및 심근내 주사(5명의 환자)
     3. 엑소좀 및 미토콘드리아의 관상동맥내 및 심근내 주사(환자 5명)
     4. 위약(환자 5명) b군과 c군 환자의 경우 흉골 절개 후 노출된 가슴 근육에서 수술 초기에 추출한 근육 조직 표본에서 미토콘드리아를 추출합니다. 수술과 동시에 근육 검체에서 미토콘드리아를 추출합니다. 바이패스 이식편에 의해 혈관 재생이 이루어지면 추출된 미토콘드리아가 심장 근육에 주입됩니다. 31 게이지 인슐린 주사기는 심장 근육의 허혈 부위에 있는 10개의 다른 부위에 주사를 수행합니다. 심장 근육에 직접 주입하는 것 외에도 추출된 미토콘드리아의 1/3이 관상동에 주입됩니다.

     그룹 a와 b의 환자는 2단계에서 설명한 MSC 세포에서 추출된 엑소좀을 받게 됩니다. 추출된 엑소좀은 심폐 바이패스 배치 후 관상정맥동에 주입됩니다.

  2. 인간 탯줄(UC-MSCs)에서 중간엽 줄기세포의 분리 및 특성화 인간 탯줄 중간엽 줄기세포는 이전 연구와 관련하여 콜라게나아제에 의해 효소적으로 분리되고 10% 엑소좀이 제거된 FBS(GMP)가 포함된 DMEM/F12 배지에서 배양됩니다. grade) 페니실린 및 스트렙토마이신 항생제와 함께 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 세포 합류가 80%에 도달하면 컨디셔닝된 배지가 수집됩니다(엑소좀 분리를 위해 세포는 통로 3에서 사용됨).

     표현형 분석은 세 번째 계대에서 수행됩니다. 유세포 분석기를 사용하여 CD90, CD105, CD73 및 CD34에 대해 표면 항원을 분석합니다.

  3. 초원심분리 및 특성화에 의한 UC-MSC로부터 엑소좀 추출.

     세포 합류가 80%에 도달한 후 조건화된 배지는 여러 초원심분리기에 의해 엑소좀 분리를 위해 수집됩니다. 요약하면, 48시간 후, 세포의 조정 배지(CM)를 400g에서 10분 동안 원심분리하여 세포를 제거하고 2500g에서 30분 동안 세포사멸체 및 파편을 제거합니다. 그 후, CM을 100,000g에서 2시간 동안 2회 원심분리한 후, 엑소좀 펠렛을 PBS에 현탁시키는 과정을 거쳤다.

     표면 항원은 웨스턴 블롯을 사용하여 CD9, CD63 및 CD81에 대해 분석됩니다. 또한 BCA(Bradford Colorimetric Assay) 키트를 사용하여 570nm의 파장에서 엑소좀 생산 총 단백질을 측정합니다. 동적 광산란(DLS)은 엑소좀의 크기 분포를 결정합니다.

  4. US-MSC에서 미토콘드리아 추출 및 특성화.

  5. 임상 시험 이식 미토콘드리아 및 엑소좀 1상 안전성의 단기 평가:

     환자는 수술 후 임상 증상, 징후, 부정맥, 심초음파 평가 및 실험실 결과에 따라 면밀히 모니터링됩니다.

  6. 혈액 인자(cTnT, CK-MB) 측면에서 환자의 단기 평가 크레아틴 키나아제(CK)와 동종효소 CK-MB는 급성 심근경색(AMI) 진단에 중요한 도구입니다. 심근 세포의 총 CK에 대한 CK-MB의 함량은 다양합니다. 정상 심근에서는 낮고 저산소성 심근과 심장 발작에서 몇 배로 향상됩니다.

  7. SPECT 스캔, 심장 MRI 및 도부타민 스트레스 스펙클 심초음파, 전후 2개월.

     환자의 회복 평가는 수술 후 한 달 후에 수행됩니다. 이 평가는 환자의 징후 및 증상, 기능 등급 평가, Speckle 및 Dobutamine 스트레스 Eco, SPECT 핵 심장 스캔 및 심장 MRI 영상(CMR)을 기반으로 합니다. 평가는 수술 전과 수술 후 한 달 후에 수행됩니다. 환자 상태의 가능한 개선을 보고하기 위해 평가 결과 간에 긴밀한 비교가 수행됩니다.

     후속 평가를 위한 평가 변수는 다음과 같습니다.

     • Eco 및 CMR의 배출 비율 변수(LVEF, RVEF, Global EF)
     • 16 SPECT 스캔 및 CMR에 의한 세그먼트 생존력 분석
     • 환자 신체 검사를 기반으로 한 NYHA 분류 평가.
  8. 데이터 분석은 IBM SPSS Statistics 버전 25에서 수행됩니다. 0.05 미만의 p-값은 유의한 것으로 평가됩니다.