IgG4関連眼疾患における異常なT細胞活性化と分化の重要なメカニズム

免疫グロブリン G4 関連疾患 (IgG4-RD) は、線維症を伴う新たに定義された免疫介在性慢性炎症性疾患であり、主に IgG4+ 形質細胞からなるリンパ形質細胞浸潤と、線維症、閉塞性静脈炎、および好酸球浸潤を特徴とします。 IgG4-RD の最も一般的な臨床症状には、血清 IgG4 レベルの大幅な上昇と腫瘤状の病変が含まれます。これらは体のほぼすべての部分に影響を及ぼし、影響を受けた臓器や周囲の組織に圧迫や不可逆的な損傷をもたらし、臓器不全を引き起こす可能性があります。 IgG4-RD の有病率は (0.28 ～ 1.08)/100,000 の間であると推定されている報告にもかかわらず、最近の定義、臨床医と患者の間での認識の限界、および潜行性の発症により、実際の有病率はさらに高い可能性があります。

免疫グロブリン G4 関連眼疾患 (IgG4-ROD) とは、涙腺、外眼筋、眼窩上神経、眼窩下神経、およびその他の眼窩構造に関与する、眼窩病変を引き起こす IgG4-RD 腫瘤様病変を指します。 これらの中で、涙腺の関与が最も一般的であり、痛みのない片側または両側の腫れとして現れ、時には異物感や目の不快感を伴います。 外眼筋の関与は筋肥大として現れる可能性があり、重篤な場合には眼球突出、かすみ目、複視を引き起こす可能性があります。 眼窩腫瘤病変は視神経を圧迫し、不可逆的な視力喪失を引き起こす可能性もあります。 現在、IgG4-ROD に対する治療法はありませんが、腫瘤様病変に関連する炎症や線維症を制御するための第一選択治療としてグルココルチコイドが使用されています。 IgG4-ROD は再発する傾向があり、その再発率に関する具体的な研究はありませんが、追跡調査中の IgG4-RD 患者の再発率が 24% ～ 63% であるとさまざまな研究で報告されています。 IgG4-ROD の正確な病因と病因は依然として不明であり、これらの側面がさらに解明されれば、新しい治療標的の同定が容易になり、再発率が低下し、治癒が達成される可能性があります。

さまざまな形態の IgG4-RD に関する複数の研究により、IgG4-ROD を含む IgG4-RD の病因における T 細胞の重要な役割が示唆されています。 第一に、CD4+ T 細胞は、IgG4-RD の病変における浸潤リンパ球の大部分を構成します。 これらの CD4+ T 細胞は、サイトカイン分泌を通じて B 細胞の増殖とクラススイッチを誘導し、組織の線維化に寄与します。 さらに、リツキシマブで治療された IgG4-RD 患者は高い再発率を示し、再発後の B 細胞クローンの増殖の仕方は治療前と比べて異なります。 この証拠は、IgG4-RD における T 細胞の中心的な役割を強く裏付けています。 IgG4-RD の発症に関与する T 細胞亜集団の中で、濾胞性ヘルパー細胞 (Tfh) および CD4+ 細胞傷害性 T リンパ球 (CD4+ CTL) が特に注目に値します。 Tfh 細胞は、IL-21 分泌を通じて異所性胚中心形成と IgG4+ 形質細胞への B 細胞クラススイッチを促進しますが、CD4+ CTL は TGF-β、IL-1β、および IFN-γ を分泌することによって組織の線維化に寄与します。 しかし、IgG4-ROD と他の IgG4-RD の両方における異常な T 細胞の活性化と分化の根底にあるメカニズムは、依然として十分に理解されていません。

この研究は、IgG4-ROD 患者の手術組織サンプル、末梢血、涙液を使用した一連の in vitro 実験を実施することにより、IgG4-ROD における異常な T 細胞の活性化と分化に関与する重要な経路を調査することを目的としています。 これらの実験には、RNA シーケンス (RNA-Seq)、酵素免疫吸着法 (ELISA)、および in vitro 細胞共培養が含まれます。 目標は、IgG4-ROD の発症における重要な経路を特定し、疾患過程におけるその役割を明らかにし、IgG4-ROD の再発率を低下させるための新しい治療標的を提供することです。 この研究は、他の IgG4 関連疾患のメカニズムと治療についての洞察も提供する可能性があります。

研究対象集団

この研究には、北京大学第三病院眼科の患者が参加しており、その中にはIgG4-ROD患者（実験グループ）と外科的位置調整を受けた涙腺下垂患者（対照グループ）からの涙腺組織サンプルが含まれています。 包含基準と除外基準は次のとおりです。

包含基準

実験グループ: 2014 年および 2020 年の日本の IgG4-ROD および IgG4-RD 基準に基づいて診断された、涙腺病変を有する IgG4-ROD 患者:

臨床的および画像的特徴：涙腺のびまん性または局所的な腫れまたは結節形成が特徴的です。

血清学的診断: 血清 IgG4 濃度の上昇 (>135 mg/dL)。

病理組織学的診断（以下の 3 つの基準のうち 2 つを満たす）：

線維症を伴う高密度のリンパ形質細胞浸潤。 IgG4+ 形質細胞/IgG+ 形質細胞の比率 > 40%、および高出力フィールドあたり >10 IgG4+ 形質細胞。

特徴的な線維症、特にストーリー状線維症、または閉塞性静脈炎。

対照群：病理学および臨床的/画像的特徴によって確認された涙腺下垂症があり、外科的位置変更が必要な患者。

除外基準

シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、関節リウマチなどの他の自己免疫疾患の存在。

MALT リンパ腫や炎症性偽腫瘍などの他の眼窩疾患を示す涙腺の病理。

他の除外基準には、精神障害、悪性腫瘍、または研究参加に不適当とみなされる状態が含まれます。

勉強方法

臨床情報の収集 患者の人口統計、病歴、および必要な診断検査結果 (画像、血清 IgG レベルなど) が記録されます。 眼の検査には、視力、眼圧、眼表面疾患指数（OSDI）、角膜フルオレセイン染色（CFS）、涙液膜破壊時間（FBUT）、シルマー試験などが含まれます。

サンプルの収集 毛細管を使用して涙液 (片目あたり約 15 µL) を収集し、-80°C で保存します。 切除された涙腺組織の一部 (50 ～ 100 mg) はこの研究のために保存され、残りは病理学的分析に使用されます。 末梢血単核球 (PBMC) を調製するために、血液サンプル (約 10 mL) が採取されます。

涙腺組織のバルク RNA-Seq 分析 Trizol 法を使用して涙腺組織から全 RNA を抽出し、続いて Agilent バイオアナライザーを使用して RNA の品質を評価します。 cDNA ライブラリは、Illumina テクノロジーを使用して構築され、配列決定されます。 データ処理には、fastp を使用した品質管理、HISAT2 を使用したアラインメント、および featureCounts を使用した遺伝子発現の定量化が含まれます。 DESeq2 を使用して差次的発現解析を実行し、Gene Set Enrichment Analysis (GSEA) を実行します。 組織内の免疫細胞組成は、xCell と CIBERSORTx を使用して分析されます。

酵素結合免疫吸着検定法 (ELISA) ELISA は、メーカーの指示に従って特定のキットを使用して、RNA-Seq 結果で特定された主要な経路を分析するために使用されます。

インビトロ共培養実験 IgG4-ROD 患者の涙腺細胞と PBMC のインビトロ共培養システムは、涙腺の免疫微小環境をシミュレートするために確立されます。 RNA-Seq および ELISA の結果に基づいて、標的を絞った介入がこのシステムに適用されます。 上清中の IgG4/IgG1 比は指標として機能し、値が高いほど病原性効果が強いことを示唆します。