Mecanismos clave de activación y diferenciación anormal de células T en enfermedades oftálmicas relacionadas con IgG4

La enfermedad relacionada con la inmunoglobulina G4 (IgG4-RD) es una enfermedad inflamatoria crónica inmunomediada con fibrosis recientemente definida, caracterizada por infiltración linfoplasmocítica que consiste predominantemente en células plasmáticas IgG4+, junto con fibrosis estoriforme, flebitis obliterante e infiltración de eosinófilos. Las manifestaciones clínicas más comunes de IgG4-RD incluyen niveles séricos de IgG4 significativamente elevados y lesiones similares a masas, que pueden afectar casi cualquier parte del cuerpo, provocando compresión y daño irreversible a los órganos afectados y los tejidos circundantes, lo que podría provocar insuficiencia orgánica. A pesar de los informes que estiman la prevalencia de IgG4-RD entre (0,28~1,08)/100.000, la prevalencia real podría ser mayor debido a su definición reciente, la conciencia limitada entre médicos y pacientes y su aparición insidiosa.

La enfermedad oftálmica relacionada con la inmunoglobulina G4 (IgG4-ROD) se refiere a lesiones similares a masas de IgG4-RD que afectan la glándula lagrimal, los músculos extraoculares, el nervio supraorbitario, el nervio infraorbitario y otras estructuras orbitarias, lo que conduce a lesiones orbitarias. Entre ellos, la afectación de las glándulas lagrimales es la más común y se manifiesta como una hinchazón indolora, unilateral o bilateral, a veces acompañada de sensación de cuerpo extraño o malestar ocular. La afectación de los músculos extraoculares puede presentarse como agrandamiento de los músculos, lo que puede causar proptosis, visión borrosa y diplopía en casos graves. Las lesiones de masa orbitaria también pueden comprimir el nervio óptico, provocando una pérdida irreversible de la visión. Si bien actualmente no existe cura para la IgG4-ROD, los glucocorticoides se utilizan como tratamiento de primera línea para controlar la inflamación y la fibrosis asociadas con las lesiones similares a masas. IgG4-ROD es propenso a recaer, y aunque no hay estudios específicos sobre su tasa de recurrencia, diferentes estudios han informado tasas de recaída de pacientes con IgG4-RD durante el seguimiento que oscilan entre el 24% y el 63%. La etiología y patogénesis exactas de IgG4-ROD aún no están claras, y una mayor aclaración de estos aspectos facilitaría la identificación de nuevos objetivos terapéuticos, reduciría las tasas de recaída y potencialmente lograría una cura.

Múltiples estudios sobre diversas formas de IgG4-RD sugieren un papel fundamental de las células T en la patogénesis de IgG4-RD, incluida IgG4-ROD. En primer lugar, las células T CD4+ constituyen la mayoría de los linfocitos infiltrantes en las lesiones de IgG4-RD. Estas células T CD4+ inducen la proliferación de células B y el cambio de clase mediante la secreción de citoquinas y contribuyen a la fibrosis tisular. Además, los pacientes con IgG4-RD tratados con rituximab exhiben altas tasas de recaída, y los clones de células B posteriores a la recaída se expanden de manera diferente en comparación con el pretratamiento. Esta evidencia respalda firmemente el papel central de las células T en IgG4-RD. Entre las subpoblaciones de células T implicadas en la patogénesis de IgG4-RD, las células T foliculares auxiliares (Tfh) y los linfocitos T citotóxicos CD4+ (CD4+ CTL) son particularmente notables. Las células Tfh promueven la formación de centros germinales ectópicos y el cambio de clase de células B a células plasmáticas IgG4+ a través de la secreción de IL-21, mientras que los CTL CD4+ contribuyen a la fibrosis tisular al secretar TGF-β, IL-1β e IFN-γ. Sin embargo, los mecanismos que subyacen a la activación y diferenciación anormal de las células T tanto en IgG4-ROD como en otras IgG4-RD siguen siendo poco conocidos.

Este estudio tiene como objetivo investigar las vías clave involucradas en la activación y diferenciación anormal de células T en IgG4-ROD mediante la realización de una serie de experimentos in vitro utilizando muestras de tejido quirúrgico, sangre periférica y líquido lagrimal de pacientes con IgG4-ROD. Estos experimentos incluyen secuenciación de ARN (RNA-Seq), ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) y cocultivo celular in vitro. El objetivo es identificar vías críticas en la patogénesis de IgG4-ROD y aclarar sus funciones en el proceso de la enfermedad, proporcionando nuevos objetivos terapéuticos para reducir la tasa de recurrencia de IgG4-ROD. Esta investigación también puede ofrecer información sobre los mecanismos y el tratamiento de otras enfermedades relacionadas con la IgG4.

Población de estudio

En este estudio participan pacientes del Departamento de Oftalmología del Tercer Hospital de la Universidad de Pekín, incluidas muestras de tejido de glándulas lagrimales de pacientes con IgG4-ROD (grupo experimental) y pacientes con ptosis de glándulas lagrimales sometidos a reposicionamiento quirúrgico (grupo de control). Los criterios de inclusión y exclusión son los siguientes:

Criterios de inclusión

Grupo experimental: pacientes IgG4-ROD con afectación de la glándula lagrimal, diagnosticados según los criterios japoneses de 2014 y 2020 para IgG4-ROD e IgG4-RD:

Manifestaciones clínicas y de imagen: hinchazón característica difusa o localizada o formaciones nodulares de las glándulas lagrimales.

Diagnóstico serológico: Concentración sérica elevada de IgG4 (>135 mg/dL).

Diagnóstico histopatológico (cumplir 2 de los 3 criterios siguientes):

Infiltración linfoplasmocítica densa con fibrosis. Proporción de células plasmáticas IgG4+/células plasmáticas IgG+ >40 % y >10 células plasmáticas IgG4+ por campo de alta potencia.

Fibrosis característica, especialmente fibrosis estoriforme o flebitis obliterativa.

Grupo de control: pacientes con ptosis de la glándula lagrimal confirmada por patología y características clínicas/de imagen, que requieren reposicionamiento quirúrgico.

Criterios de exclusión

Presencia de otras enfermedades autoinmunes como el síndrome de Sjögren, el lupus eritematoso sistémico o la artritis reumatoide.

Patología de la glándula lagrimal que indica otras enfermedades orbitarias como el linfoma MALT o el pseudotumor inflamatorio.

Otros criterios de exclusión incluyen trastornos mentales, neoplasias malignas o cualquier condición que se considere inadecuada para participar en el estudio.

Métodos de estudio

Recopilación de información clínica Se registran los datos demográficos del paciente, su historial médico y los resultados de las pruebas de diagnóstico necesarias (p. ej., imágenes, niveles séricos de IgG). Los exámenes oculares incluyen agudeza visual, presión intraocular, índice de enfermedades de la superficie ocular (OSDI), tinción corneal con fluoresceína (CFS), tiempo de ruptura de la película lagrimal (FBUT) y prueba de Schirmer, entre otros.

Recogida de muestras El líquido lagrimal (aproximadamente 15 µl por ojo) se recoge utilizando un tubo capilar y se almacena a -80°C. Una porción (50-100 mg) del tejido de la glándula lagrimal resecada se reserva para este estudio, mientras que el resto se utiliza para el análisis patológico. Se extraen muestras de sangre (aproximadamente 10 ml) para preparar células mononucleares de sangre periférica (PBMC).

Análisis de secuencia de ARN en masa del tejido de la glándula lagrimal El ARN total se extrae del tejido de la glándula lagrimal mediante el método Trizol, seguido de una evaluación de la calidad del ARN con un bioanalizador Agilent. Se construye y secuencia una biblioteca de ADNc utilizando tecnología Illumina. El procesamiento de datos incluye control de calidad con fastp, alineación con HISAT2 y cuantificación de la expresión génica con featureCounts. El análisis de expresión diferencial se realiza utilizando DESeq2 y se realiza un análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes (GSEA). La composición de las células inmunes en el tejido se analiza utilizando xCell y CIBERSORTx.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) ELISA se utiliza para analizar rutas clave identificadas en los resultados de RNA-Seq, utilizando kits específicos de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Experimentos de cocultivo in vitro Se establece un sistema de cocultivo in vitro de células de glándula lagrimal de pacientes con IgG4-ROD y PBMC para simular el microambiente inmunológico de la glándula lagrimal. Según los resultados de RNA-Seq y ELISA, se aplican intervenciones específicas a este sistema. Las proporciones IgG4/IgG1 en el sobrenadante sirven como indicador; valores más altos sugieren efectos patógenos más fuertes.