Mécanismes clés de l'activation et de la différenciation anormales des lymphocytes T dans les maladies ophtalmiques liées aux IgG4

La maladie liée aux immunoglobulines G4 (IgG4-RD) est une maladie inflammatoire chronique à médiation immunitaire nouvellement définie avec fibrose, caractérisée par une infiltration lymphoplasmocytaire constituée principalement de plasmocytes IgG4+, ainsi qu'une fibrose storiforme, une phlébite oblitérante et une infiltration d'éosinophiles. Les manifestations cliniques les plus courantes de l'IgG4-RD comprennent des taux sériques d'IgG4 significativement élevés et des lésions ressemblant à une masse, qui peuvent affecter presque n'importe quelle partie du corps, entraînant une compression et des dommages irréversibles aux organes affectés et aux tissus environnants, pouvant entraîner une défaillance organique. Malgré les rapports estimant la prévalence des IgG4-RD entre (0,28 et 1,08)/100 000, la prévalence réelle pourrait être plus élevée en raison de sa définition récente, de la sensibilisation limitée des cliniciens et des patients et de son apparition insidieuse.

La maladie ophtalmique liée aux immunoglobulines G4 (IgG4-ROD) fait référence à des lésions de type masse IgG4-RD impliquant la glande lacrymale, les muscles extraoculaires, le nerf supraorbitaire, le nerf infraorbitaire et d'autres structures orbitales, conduisant à des lésions orbitaires. Parmi celles-ci, l’atteinte des glandes lacrymales est la plus fréquente, se manifestant par un gonflement indolore, unilatéral ou bilatéral, parfois accompagné d’une sensation de corps étranger ou d’un inconfort oculaire. L'atteinte des muscles extra-oculaires peut se manifester par une hypertrophie musculaire, provoquant potentiellement une exophtalmie, une vision floue et une diplopie dans les cas graves. Les lésions de masse orbitaire peuvent également comprimer le nerf optique, entraînant une perte de vision irréversible. Bien qu’il n’existe actuellement aucun remède contre les IgG4-ROD, les glucocorticoïdes sont utilisés comme traitement de première intention pour contrôler l’inflammation et la fibrose associées aux lésions ressemblant à des masses. L'IgG4-ROD est sujette aux rechutes, et bien qu'il n'existe aucune étude spécifique sur son taux de récidive, différentes études ont rapporté des taux de rechute chez les patients IgG4-RD au cours du suivi allant de 24 % à 63 %. L'étiologie et la pathogenèse exactes des IgG4-ROD restent floues, et une élucidation plus approfondie de ces aspects faciliterait l'identification de nouvelles cibles thérapeutiques, réduirait les taux de rechute et pourrait potentiellement permettre une guérison.

Plusieurs études sur diverses formes d'IgG4-RD suggèrent un rôle essentiel des cellules T dans la pathogenèse des IgG4-RD, y compris les IgG4-ROD. Premièrement, les lymphocytes T CD4+ constituent la majorité des lymphocytes infiltrants dans les lésions d'IgG4-RD. Ces lymphocytes T CD4+ induisent la prolifération des lymphocytes B et un changement de classe via la sécrétion de cytokines et contribuent à la fibrose tissulaire. De plus, les patients IgG4-RD traités par rituximab présentent des taux de rechute élevés, les clones de cellules B post-rechute se développant différemment par rapport au pré-traitement. Ces preuves soutiennent fortement le rôle central des lymphocytes T dans les IgG4-RD. Parmi les sous-populations de lymphocytes T impliquées dans la pathogenèse des IgG4-RD, les cellules T folliculaires auxiliaires (Tfh) et les lymphocytes T cytotoxiques CD4+ (CD4+ CTL) sont particulièrement remarquables. Les cellules Tfh favorisent la formation de centres germinaux ectopiques et le changement de classe de lymphocytes B vers les plasmocytes IgG4+ via la sécrétion d'IL-21, tandis que les CTL CD4+ contribuent à la fibrose tissulaire en sécrétant du TGF-β, de l'IL-1β et de l'IFN-γ. Cependant, les mécanismes sous-jacents à l’activation et à la différenciation anormales des lymphocytes T en IgG4-ROD et en autres IgG4-RD restent mal compris.

Cette étude vise à étudier les voies clés impliquées dans l'activation et la différenciation anormales des lymphocytes T dans les IgG4-ROD en menant une série d'expériences in vitro utilisant des échantillons de tissus chirurgicaux, du sang périphérique et du liquide lacrymal de patients atteints d'IgG4-ROD. Ces expériences comprennent le séquençage de l'ARN (RNA-Seq), les tests immuno-enzymatiques (ELISA) et la co-culture cellulaire in vitro. L'objectif est d'identifier les voies critiques dans la pathogenèse des IgG4-ROD et de clarifier leurs rôles dans le processus pathologique, en fournissant de nouvelles cibles thérapeutiques pour réduire le taux de récidive des IgG4-ROD. Cette recherche pourrait également offrir un aperçu des mécanismes et du traitement d’autres maladies liées aux IgG4.

Population étudiée

Cette étude implique des patients du département d'ophtalmologie du troisième hôpital universitaire de Pékin, y compris des échantillons de tissu de glande lacrymale provenant de patients IgG4-ROD (groupe expérimental) et de patients atteints de ptose des glandes lacrymales subissant un repositionnement chirurgical (groupe témoin). Les critères d'inclusion et d'exclusion sont les suivants :

Critères d'inclusion

Groupe expérimental : patients IgG4-ROD présentant une atteinte des glandes lacrymales, diagnostiqués sur la base des critères japonais de 2014 et 2020 pour les IgG4-ROD et les IgG4-RD :

Caractéristiques cliniques et d'imagerie : gonflement caractéristique, diffus ou localisé, ou formations nodulaires des glandes lacrymales.

Diagnostic sérologique : concentration sérique élevée d'IgG4 (> 135 mg/dL).

Diagnostic histopathologique (répondant à 2 des 3 critères ci-dessous) :

Infiltration lymphoplasmocytaire dense avec fibrose. Rapport plasmocytes IgG4+/plasmocytes IgG+ > 40 % et > 10 plasmocytes IgG4+ par champ de forte puissance.

Fibrose caractéristique, notamment fibrose storiforme, ou phlébite oblitérante.

Groupe témoin : Patients présentant une ptose des glandes lacrymales confirmée par la pathologie et les caractéristiques cliniques/d'imagerie, nécessitant un repositionnement chirurgical.

Critères d'exclusion

Présence d'autres maladies auto-immunes comme le syndrome de Gougerot-Sjögren, le lupus érythémateux disséminé ou la polyarthrite rhumatoïde.

Pathologie des glandes lacrymales indiquant d'autres maladies orbitaires telles qu'un lymphome du MALT ou une pseudotumeur inflammatoire.

D'autres critères d'exclusion incluent les troubles mentaux, les tumeurs malignes ou toute condition jugée impropre à la participation à l'étude.

Méthodes d'étude

Collecte d'informations cliniques Les données démographiques du patient, ses antécédents médicaux et les résultats des tests de diagnostic nécessaires (par exemple, imagerie, taux sériques d'IgG) sont enregistrés. Les examens oculaires comprennent l'acuité visuelle, la pression intraoculaire, l'indice des maladies de la surface oculaire (OSDI), la coloration cornéenne à la fluorescéine (CFS), le temps de rupture du film lacrymal (FBUT) et le test de Schirmer, entre autres.

Prélèvement d'échantillons Le liquide lacrymal (environ 15 µL par œil) est collecté à l'aide d'un tube capillaire et conservé à -80 °C. Une partie (50-100 mg) du tissu de la glande lacrymale réséqué est réservée à cette étude, tandis que le reste est utilisé pour l'analyse pathologique. Des échantillons de sang (environ 10 ml) sont prélevés pour préparer des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC).

Analyse d'ARN-Seq en masse du tissu des glandes lacrymales L'ARN total est extrait du tissu des glandes lacrymales à l'aide de la méthode Trizol, suivi d'une évaluation de la qualité de l'ARN avec un bioanalyseur Agilent. Une bibliothèque d'ADNc est construite et séquencée à l'aide de la technologie Illumina. Le traitement des données comprend le contrôle qualité avec fastp, l'alignement à l'aide de HISAT2 et la quantification de l'expression génique avec featureCounts. L'analyse de l'expression différentielle est effectuée à l'aide de DESeq2 et une analyse d'enrichissement des ensembles de gènes (GSEA) est effectuée. La composition des cellules immunitaires dans les tissus est analysée à l'aide de xCell et CIBERSORTx.

Test immuno-enzymatique (ELISA) ELISA est utilisé pour analyser les voies clés identifiées dans les résultats RNA-Seq, à l'aide de kits spécifiques conformément aux instructions du fabricant.

Expériences de co-culture in vitro Un système de co-culture in vitro de cellules de glande lacrymale de patients IgG4-ROD et de PBMC est établi pour simuler le microenvironnement immunitaire de la glande lacrymale. Sur la base des résultats RNA-Seq et ELISA, des interventions ciblées sont appliquées à ce système. Les ratios IgG4/IgG1 dans le surnageant servent d’indicateur, des valeurs plus élevées suggérant des effets pathogènes plus forts.