경미하고 파괴적인 허혈성 손상 환자의 대뇌 허혈에 대한 새로운 분자 마커 식별

허혈성 뇌졸중은 미국에서 이환율과 사망률의 상위 원인 중 하나입니다. 허혈성 뇌졸중 환자의 결과를 개선하기 위한 많은 노력에도 불구하고 인간의 뇌 허혈을 대표하는 선의의 동물 모델이 없기 때문에 관련된 병리학적 과정에 대한 연구가 어렵습니다. 또한 동물 모델의 생물학과 인간의 생물학 사이의 미묘하지만 중요한 차이점으로 인해 동물 결과를 인간에게 번역하는 것이 어렵습니다.

이 연구의 목적은 인간의 뇌졸중 생물학을 연구하기 위해 선택적 동맥류의 혈관 내 감김에 의해 부주의하게 유발된 뇌졸중을 의미하는 뇌졸중의 의원성 모델을 사용하는 것입니다. 임상적 증거는 대뇌 맥관 구조의 단순 카테터 삽입이 작고 일반적으로 임상적으로 침묵하는 색전성 뇌졸중을 유발함을 시사합니다. 이러한 뇌졸중은 MRI 스캔에서 분명합니다. 또한 개업의는 중재적 절차의 시작을 알고 있기 때문에 기본적으로 부상의 시기를 알고 있습니다. 이 간단한 모델을 통해 발병 시간을 알고 실시간으로 뇌졸중을 연구할 수 있습니다. 자기공명영상(MRI) 평가를 통해 개업의는 개입으로 인한 뇌졸중의 양을 확인할 수 있습니다. 대안적으로, 큰 허혈성 경색으로 응급실에 내원한 환자는 이 연구를 위한 자연 대조군 모집단을 제공합니다. 이 환자들은 크고 일반적으로 파괴적인 뇌졸중을 나타냅니다. 대부분의 경우 적자가 시작되는 시기는 알려져 있습니다. 조사자들은 뇌졸중과 관련된 분자 경로를 더 잘 이해하기 위해 응급실에 내원하는 보다 명백한 허혈성 뇌졸중 사례에 혈관내 개입으로부터 허혈의 단순 모델을 사용할 것을 제안합니다.

근거: 생물학적 마커의 글로벌 분석은 복잡한 질병 과정을 연구하기 위한 확립된 메커니즘입니다. 마이크로어레이 기술과 시스템 전반에 걸친 분석의 도입으로 다양한 생물학적 및 질병 과정에 대한 이해가 향상되었습니다. 이 혁명은 1990년대 초부터 계속되고 있습니다. 이러한 연구를 수행하는 근거는 인간의 뇌졸중의 기본 메커니즘에 대한 이해를 높이는 것입니다. 이전에 언급한 바와 같이 뇌졸중에 대한 선의의 모델은 없으며 연구원의 실험 설계는 대뇌 허혈에 대한 인간 모델에서 다소 단순한 것을 제공합니다.

이 연구에는 각각 5mL 용량의 4회 채혈이 필요합니다. 혈액 채취는 이러한 환자가 경험하게 될 혈액 채취의 정상적인 시간에 맞춰지며 환자를 추가 위험에 빠뜨리지 않습니다.

혈액 샘플은 다음과 같이 분석됩니다. 마이크로RNA 분획을 포함한 총 리보핵산(RNA) 및 단백질이 혈액 샘플에서 분리되고 정량화됩니다. 연구자들은 RNA 샘플을 Febit microRNA 어레이에 로드할 것입니다. Febit miRNA 칩에는 Sanger의 miRBase 14에서 알려진 모든 인간 miRNA 및 miRNA 스타 시퀀스가 ​​있습니다. 이 플랫폼을 사용하면 전체 RNA가 어레이에 직접 로드됩니다. RNA 라벨링 또는 증폭 단계가 없습니다. 칩의 miRNA 혼성화에 이어 미세유체 프라이머 확장 분석이 수행됩니다. 이 경우 올바른 miRNA를 프로브에 혼성화해야만 프라이머 확장 단계가 효율적으로 진행되어 어레이에 높은 감도와 특이성을 부여할 수 있습니다. 또한 연구원들은 몇 가지 스파이크 인 컨트롤을 추가하여 맞춤형 마이크로 어레이를 만들었습니다. 당사의 스파이크인은 RNA 분리의 가변성에 대한 피드백을 제공하며 어레이 정규화를 위한 추가 신호입니다. Ray Biotech의 Quantibody Arrays를 사용하여 단백질 분획을 분석합니다. 이들은 완전한 정량적 방식으로 특정 단백질 종(연구원은 약 120개의 고유 단백질을 표적으로 할 것임)을 포획하도록 설계된 항체 어레이입니다. 이러한 어레이는 본질적으로 전통적인 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)로 기능하지만 유리 슬라이드 기판에서 작동합니다. 이 분석법은 매우 적은 양의 샘플 입력에 대한 요구 사항을 포함하여 ELISA에 비해 몇 가지 장점을 제공하지만 아마도 더 중요한 것은 한 번에 수백 개의 단백질에 대한 정량적 조사를 용이하게 하므로 단백질 기반 서명을 검색하고 식별하는 능력을 크게 가속화한다는 것입니다. 및/또는 바이오마커. 데이터는 TGen 및 Dr. Kalani의 조사관이 데이터 분석 시점에 적절하다고 판단되는 통계 도구를 사용하여 통계적으로 분석됩니다. 박사 Kalani와 Nakaji는 식별된 분자 마커의 정체와 양, 일시적인 모양, 농도 및 소멸을 수집된 임상 데이터와 연관시킬 것입니다.

신경방사선 전문의는 피험자의 입원 및 외래 방문 중에 수집된 컴퓨터 축 단층 촬영(CT)/MRI 스캔의 평가 및 해석을 수행합니다. 신경방사선 전문의는 혈관의 크기와 구경을 기록하여 기형, 박리, 동맥류 또는 기타 이상을 찾습니다.

연구자들은 또한 식별된 마커의 수준을 Modified Rankin Scale 점수와 Glasgow Outcome Scale(GOS)을 사용하여 병원에서 퇴원할 때와 퇴원 후 최대 2년 동안의 후속 조치에서 환자가 얼마나 잘 수행하는지와 연관시킬 것입니다. 후속 조치의 일환으로 연구원은 작업 복귀 시간(해당되는 경우), 불만 사항, 후속 실험실 결과(전체 혈구 수, 응고 연구, 아스피린 내성 분석 및 p2yp12 분석을 포함한 항혈소판제에 대한 반응, 기본 신진대사 패널) 및 이미징, 허혈 후 결과를 초래할 수 있는 새로운 상태를 식별하기 위한 업데이트된 전체 병력 및 신체 검사. 이 정보는 신경외과 의사의 후속 조치 시 수집됩니다. 이 작업이 완료되면 후보 microRNA 또는 단백질이 식별되면 연구원은 결과를 공동 작업자(NIH와 같은 보건 복지부 관련 조직)와 결과를 공유합니다(환자의 특정 정보를 제외하는 방식).