ARDS에서 폐 면역 세포-마이크로바이옴 상호작용 (ILLUMINA-1)

배경 호중구 및 대식세포 침범을 동반한 폐의 과염증 및 T 세포 고갈은 급성 호흡곤란 증후군(ARDS)의 일반적인 특징이지만, ARDS 환자의 폐에 있는 T 세포가 과활성화 및/또는 고갈되어 있는지 여부는 아직 밝혀지지 않았습니다. 어느 정도 이것이 중성 세포 침입에 기여하여 폐 조직 파괴에 기여합니다. 또한, 폐 마이크로바이옴은 ARDS에서 다양성과 상호작용의 감소를 보여주었고, 이는 정상적인 T 세포 기능에 중요할 수 있습니다. 현재, 면역 세포-마이크로바이옴 상호작용 및 질병 중증도 및 진행과의 관계는 ARDS에서 아직 연구되지 않았습니다.

전체 설계 베를린 정의에 따라 비-경증 ARDS 환자 20명과 중등도-중증 비-COVID-19 ARDS 환자 20명에서 별도의 폐 분절에서 기관내 흡인 및 BAL 액(BALF)을 채취합니다. 또한 구강 및 비강 면봉과 혈액 샘플을 수집합니다. 이것은 삽관 후 72시간 이내에 수행되며 환자가 여전히 삽관된 경우 7-10일 후에 다시 수행됩니다.

환자의 전자 건강 기록 포함 후 다음을 얻습니다. 진단 코드 및 약물(혈압 상승제 및 진정제를 포함한 유형 및 용량) 및 흡연 이력(현재/이전/비흡연자, 팩 년); 입장시간; 혈압, 심장 박동 및 심박수, 온도, 인공호흡기 설정, 지지 요법(투석, ECMO), 입원 및 연구일에 혈액 검사 결과(혈구 수, 응고 매개변수, 신장, 간 및 전해질 패널, 동맥 및 혼합 정맥혈 가스); 입원 및 연구일에 임상 점수(SAPS3, APACHE II, SOFA), 30일 이내 사망

혈액 샘플링 BALF 수집 직전에 환자의 침습성 동맥 카테터(임상 목적을 위해 ICU 입원 시 삽입: 지속적인 침습적 혈압 모니터링 및 반복적인 동맥 혈액 가스 수집용)에서 동맥 혈액 샘플을 채취합니다.

BALF 수집을 통한 기관지경 검사 이 절차는 현재 임상 지침에 따라 표준화된 방식으로 수행됩니다. 절차 직전에 구강 면봉, 비강 면봉 및 기관내흡인(ETA)을 얻습니다. 그런 다음 FIO2를 1.0으로 증가시키고 외경 5.0 mm의 일회용 비디오스코프를 사용하여 기관지경 검사를 시행합니다. 예열된(37°C) 등장 식염수 50ml 3회 분취량을 오른쪽 중엽의 중간 부분에 주입하고 낮은 음압(< 100cm H2O)으로 즉시 흡인하고 얼음 위의 멸균 유리 용기에 모읍니다. BALF 표본을 얻기 위해.

그 후 멸균 용기로 즉시 흡인하면서 각 폐엽에 20 ml 등장성 식염수를 단일 설치하여 우측 폐의 상부 및 하부 엽에서 mini-BAL을 수행합니다.

측정 BALF, ETA 및 혈액에서 선택된 면역 세포에 대한 단일 세포 RNA 시퀀싱(scRNA-seq)을 통해 면역 세포 집단의 구성과 다양한 세포주의 기능 및 분화를 조사할 것이며, 이는 샘플 바코드 및 멀티플렉싱과 함께 벌크 RNA 시퀀싱으로 보완되어 모든 샘플의 상세한 발현 패턴을 제공합니다.

BALF, ETA 및 구강 면봉의 구성 마이크로바이옴은 박테리아에 대한 리보솜 RNA 유전자의 16S 서브유닛의 초가변 영역 1~3의 표적 증폭 시퀀싱에 의해 평가됩니다.

통계 분석은 R 통계 소프트웨어 버전 4.1.1을 사용하여 수행됩니다. (통계 컴퓨팅용 R 프로젝트) RStudio 통계 소프트웨어 버전 1.4.1717 내 (RStudio), p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다. 정규성 및 분산 균질성 검사는 qq-plots 및 히스토그램을 생성하여 수행됩니다. 통계적 추론 도구인 SPIEC-EASI와 HeatMaps를 사용하고 상관 분석을 기반으로 비계층적 군집 분석을 포함한 주성분 분석을 적용하여 두 그룹의 특성을 식별합니다.