Pulmonális immunsejt-mikrobiom kölcsönhatások ARDS-ben (ILLUMINA-1)

Háttér A neutrocita- és makrofág-invázióval és a T-sejt-fogyással járó pulmonalis hipergyulladás az akut légzési distressz szindróma (ARDS) közös jellemzője, de még tisztázni kell, hogy az ARDS-ben szenvedő betegek tüdejében lévő T-sejtek hiperaktiváltak és/vagy kimerültek-e. hogy ez mennyiben járul hozzá a neutrociták inváziójához és ezáltal a tüdőszövet pusztulásához. Ezen túlmenően, a pulmonális mikrobiom az ARDS diverzitásának és kölcsönhatásainak csökkenését mutatta, ami fontos lehet a normál T-sejtek működéséhez. Jelenleg az immunsejt-mikrobiom kölcsönhatásokat és azok kapcsolatát a betegség súlyosságával és progressziójával még nem vizsgálták ARDS-ben.

Átfogó tervezés A berlini definíció szerint 20 gépi lélegeztetésben szenvedő, nem-enyhe és 20 közepestől súlyos nem COVID-19 ARDS-ben szenvedő betegnél külön tüdőszegmensekből endotracheális aspirátumot és BAL-folyadékot (BALF) nyernek. Ezenkívül szájból és orrból tampont, valamint vérmintát vesznek. Ez az intubálás után 72 órán belül megtörténik, és 7-10 nap múlva ismételten meg kell tenni, ha a beteg még mindig intubálva van.

A páciens elektronikus egészségügyi nyilvántartása A felvételt követően a következőket kapjuk: diagnózis kódok és gyógyszeres kezelés (típus és adagolás, beleértve az érszűkítőket és nyugtatókat), valamint a dohányzási előzmények (jelenlegi/előző/soha nem dohányzó; csomagévek); felvételi idő; vérnyomás, szívritmus és pulzusszám, hőmérséklet, lélegeztetőgép beállításai, szupportív ellátás (dialízis, ECMO), vérvizsgálati eredmények a felvételkor és a vizsgálati napokon (vérsejtszám, alvadási paraméterek, vese-, máj- és elektrolitpanel; artériás, ill. kevert vénás vérgázok); klinikai pontszámok a felvételkor és a vizsgálati napokon (SAPS3, APACHE II, SOFA), halálozás 30 napon belül

Vérmintavétel Az artériás vérmintákat a páciens invazív artériás katéteréből (klinikai célból, intenzív invazív vérnyomás-monitorozáshoz és ismételt artériás vérgáz-felvételhez kell behelyezni) közvetlenül a BALF gyűjtés előtt veszik.

Bronchoszkópia BALF kollekcióval Ezt az eljárást a jelenlegi klinikai irányelvek szerint szabványosított módon hajtják végre. Közvetlenül az eljárás előtt szájból, orrból készült tampont és endotracheális aspirátumot (ETA) veszünk. A FIO2-t ezután 1,0-ra növeljük, és a bronchoszkópos eljárást 5,0 mm külső átmérőjű eldobható videoszkóppal végezzük. Három egymást követő 50 ml-es előmelegített (37 °C) izotóniás sóoldat a jobb középső lebeny mediális szegmensébe csepegtetve azonnal leszívatjuk alacsony negatív szívónyomás mellett (< 100 cm H2O), majd jégen steril üvegtartályba egyesítjük. hogy egy BALF-mintát kapjunk.

Ezt követően mini-BAL-t végeznek a jobb tüdő felső és alsó lebenyében, 20 ml izotóniás sóoldat egyszeri behelyezésével mindegyik lebenybe, azonnal steril tartályba szívva.

Mérések Az immunsejtpopuláció összetételét, valamint a különböző sejtvonalak működését és differenciálódását egysejtes RNS szekvenálás (scRNA-seq) segítségével vizsgáljuk a BALF, ETA és vér kiválasztott immunsejtjein. kiegészítve tömeges RNS szekvenálással minta vonalkódolással és multiplexeléssel, így az összes minta részletes expressziós mintázata.

A BALF, ETA és az orális tamponok mikrobiomának összetételét a baktériumok riboszomális RNS-génjének 16S alegységének hipervariábilis régióinak 1-3.

A statisztikai elemzéseket az R statisztikai szoftver 4.1.1-es verziójával végezzük (R Project for Statistical Computing) az RStudio statisztikai szoftver 1.4.1717 verzióján belül (RStudio), és p<0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető. A normalitás és a variancia homogenitásának vizsgálata qq-grafikonok és hisztogramok létrehozásával történik. A SPIEC-EASI és a HeatMaps statisztikai következtetési eszközöket fogják használni, és a korrelációs elemzések alapján a főkomponens-elemzéseket, beleértve a nem hierarchikus klaszteranalízist is, a két csoport jellemzőinek azonosítására.