침해수용(Nociception), 신호수용(Sngception) 및 고유수용(Proprioception)을 위한 정밀의학.

정밀 의학 이니셔티브(Precision Medicine Initiative)는 정밀의학(Precision Medicine)을 “각 개인의 유전자, 환경, 생활 방식의 개인차를 고려하는 질병 치료 및 예방을 위한 새로운 접근 방식”으로 정의합니다.

통증은 국제 통증 연구 협회(IASP)에 의해 "실제 또는 잠재적인 조직 손상과 관련되거나 그러한 손상의 관점에서 설명되는 불쾌한 감각적, 감정적 경험"으로 정의됩니다. 전통적으로 통증 또는 노래도 다음과 같이 포함됩니다. 통증 감각 중 하나. 최근 우리는 sngception을 체성 감각계의 산성 및/또는 통증 감각으로 정의하고 근육의 진통이 물질 P와 Tac1을 통해 이루어진다는 것을 밝혔습니다.

임상 결과에 따르면 일부 환자는 물리적 제제에 잘 반응했으며 일부 환자는 주사를 선호했습니다. 위에서 언급한 유전자의 유전적 변이는 차별적인 치료 효과를 결정하는 요인이 될 수 있습니다. 그러나 환자가 한 치료 옵션에서 다른 치료 옵션으로 전환하는 데 약 4~8주가 걸렸습니다. 유전자 바이오마커를 통해 최적의 치료 방식을 결정할 수 있다면 치료 과정과 전체 치료 기간이 많이 줄어들 것입니다.

우리는 제안된 유전자(TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1)의 유전적 변이체를 가정합니다. , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2, CaV3.2, Nav1.1, Piezo1 및 Piezo2, Runx3 또는 Egr3, 엔도텔린 전환 효소 유사 1(ECEL1), 미오신 중쇄 유전자 MYH3 및 MYH8, 근육 조절 단백질인 트로포닌 I, 트로포닌 T 및 베타-트로포미오신을 암호화하는 미오신 결합 단백질 C 유전자, MYBPC1 및 TNNI2, TNNT3 및 TPM2)는 통증/통증 치료 또는 고유 감각 기능의 예후 바이오마커가 될 수 있습니다.

1.구체적인 목적

1. SNG/통증 치료 방식의 반응과 특발성 척추측만증의 표현형을 결정할 수 있는 유전적 변이를 찾기 위한 차세대 염기서열 분석(NGS) 기반 접근 방식을 설정합니다.
2. 노래/통증의 가능한 대사체학 및 단백질체 마커를 찾으려면.
3. 유전자 표지를 통한 통증/통증 조절을 위한 정밀의료 알고리즘을 결정합니다.

2.지난 몇 년 동안 우리 팀은 새로운 통증/통증 치료 알고리즘 개발을 위한 유전적 변이체 검색을 정당화하는 몇 가지 성과를 거두었습니다.

1. LLLT의 진통은 TRPV1을 통해 이루어집니다.
2. 치료용 초음파에 의한 진통은 ASIC3을 통해 이루어집니다.
3. 포도당 주사는 ASIC1a를 통해 만성 근육통을 감소시켰습니다.
4. 섬유근육통의 통증/통증에 대한 바이오마커.

3. 연구 설계

(1) 코호트 A-근막통증증후군 참가자: 국립대만대학병원 및 분원에서 80명의 환자를 모집합니다.

A. 환자 자격:

1. 포함 기준: (1) 18~100세 사이의 연령. (2) 4kg 압력에서 VAS>=30 또는 VAS>=30 (3) 근막통증증후군 환자로 진단되어 치료(LLLT, 치료용 초음파, 국소 포도당 주사 요법 포함)를 받을 의향이 있는 자. MPS의 진단은 긴장된 띠, 발통점, 방사통의 기준을 사용하여 수석 조사관에 의해 확인되었습니다.
2. 제외기준 : 활동성 감염, 악성종양, 혈액질환이 있는 자를 제외하였다. 6개월 이내에 상부 승모근에 국소 주사를 맞은 환자도 제외됩니다.

B. 연구 설계:

1. 사전 동의를 얻은 후 적격 환자의 연령, 성별, 직업, 교육 수준 및 과거 병력을 포함한 기본 인구 통계 데이터가 수집됩니다.
2. 적격 환자는 먼저 상부 승모근의 발통점에서 8 J/cm2의 에너지 밀도로 685 nm 파장과 30 mW 출력의 LLLT(BTL-5000 레이저, BTL, Stevenage, UK)를 받았습니다. 치료 전 및 치료 후 VAS-통증 및 VAS-sng는 각각 LLLT 표현형 결정을 위해 수집됩니다.
3. 그런 다음 그들은 두 그룹(각 그룹당 40명의 대상)으로 편리하게 배정됩니다: A. 치료 초음파 그룹; B. 증식치료군. A그룹은 통증이 있는 상부 승모근 부위에 일주일에 2~3회 빈도로 5분 동안 1MHz 치료용 초음파를 제공합니다. B군은 상부 승모근 근막 근막에 고장성 증식치료를 시행합니다. 주사제는 5% 덱스트로스 용액 5ml입니다. 바늘이 혈관에 들어가지 않았는지 확인하기 위해 주사 전에 바늘을 흡인했습니다. 의사 간 변동을 피하기 위해 동일한 의사(주요 조사자)가 모든 환자에게 주사합니다. 두 그룹 모두에서 효능 간섭을 피하기 위해 다른 약물이나 신체적 양식은 제공되지 않았습니다.
4. 모집된 환자는 주사 전후, 주사 후 2주 동안 평가를 받습니다. 일차 결과는 VAS-통증 및 VAS-sng(시각적 아날로그 척도)이며 점수는 0~100이며, 여기서 100은 가장 높은 통증 정도를 나타내는 값입니다. 2차 결과는 통증 역치, 근긴장도이며 SF-36 설문지는 환자의 QoL(삶의 질)에 대한 인식을 다루는 36개 항목과 8개 영역으로 구성됩니다. 정맥혈과 소변 샘플은 각각 첫 번째 방문과 2주 방문에서 수집되었습니다. 혈액 샘플은 익명화된 ID 번호로 라벨을 붙인 후 원심분리한 후 향후 처리 시점까지 -80°C의 잠긴 냉동고에 보관했습니다. 버피코트는 원심분리 후 분리하여 보관합니다. 소변 샘플을 분취하여 향후 분석을 위해 잠긴 냉동고에 -80°C에 보관했습니다.
5. 구조치료(교차치료): 참가자가 1차 치료에 만족하지 못하고 VAS 개선도가 10 미만인 경우 다른 그룹의 치료인 구조치료를 받을 수 있습니다. 그리고 그들은 또 2주 동안 병원으로 돌아갈 것입니다. 결과 변수는 3차 방문에서도 수집됩니다.

(2) 코호트 B 특발성 척추측만증 참가자: 국립대만대학병원 및 분원병원, 타이중 보훈병원에서 환자 80명을 모집합니다.

A. 환자 자격:

1. 포함 기준: (1) 10-65세 사이의 연령. (2) 특발성 척추측만증으로 진단 전-후 단순 Xray상 Cobbs angle이 10도 이상인 경우 척추측만증으로 진단됨.
2. 제외기준: (1) 활동성 감염, 악성종양, 혈액질환이 있는 자를 제외하였다. (2) 척추의 기형이나 잘못된 분할로 인한 선천성 척추 측만증, 근육 불균형으로 인한 신경근 척추 측만증, 증후군 척추 측만증 또는 퇴행성 척추 측만증을 포함하여 척추 측만증의 특정 원인이 있는 자.

B. 연구 설계:

1. 사전 동의를 얻은 후 대상 환자의 연령, 성별, 직업, 교육 수준, 신체 활동 수준 및 과거 병력을 포함한 기본 인구 통계 데이터가 수집됩니다.
2. 모집된 환자는 단 한 번만 평가를 받습니다. 수집된 매개변수에는 Cobb 각도, 척추 회전 각도, VAS-pain 및 VAS-sng(시각적 아날로그 척도)가 포함되며 점수는 0~100이며, 100은 가장 높은 통증 정도, 통증 역치를 나타내는 값입니다(Park, Kim et al. al. 2011), 척추 주위 근육의 강도 및 긴장도, SF-36-a 설문지는 환자의 QoL(삶의 질)에 대한 인식을 다루는 36개 항목과 8개 영역으로 구성됩니다(Li, Wang et al. 2003). 정맥혈과 소변 샘플도 수집되었습니다. 혈액 샘플은 익명화된 ID 번호로 라벨을 붙인 후 원심분리한 후 향후 처리 시점까지 -80°C의 잠긴 냉동고에 보관했습니다. 버피코트는 원심분리 후 분리하여 보관합니다. 소변 샘플을 분취하여 향후 분석을 위해 잠긴 냉동고에 -80°C에 보관했습니다.

(3) DNA 추출 및 NGS 기반 시퀀싱 및 유전자형 분석 제조사(Qiagen, Hilden, Mettmann, Germany)의 프로토콜에 따라 Gentra Puregene 키트를 사용하여 참가자의 말초 혈액 단핵 세포에서 게놈 DNA를 추출한 후 아가로스 처리합니다. 젤과 O.D. 순도와 농도를 확인하기 위해 비율 테스트를 실시합니다. DNA는 800bp의 피크 길이를 목표로 Covaris(Covaris, Woburn, MA, USA)를 사용하여 단편화됩니다. Illumina 라이브러리는 TruSeq 라이브러리 준비 키트(Illumina, San Diego, CA, USA)를 사용하여 gDNA에서 생성됩니다.

DNA 포획 프로브는 TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC 및 RGS4를 표적으로 하도록 맞춤 설계되며 Roche KAPA HyperChoice 프로토콜(Roche, Madison, WI, USA)을 사용하여 합성됩니다. 이들 8개 유전자의 모든 코딩 영역과 비코딩 영역(프로모터, 인트론, 5' 및 3' 비번역 영역)이 포함됩니다.

NGS 표적 영역 강화는 표적 영역(~148Kb)을 강화/포착하기 위해 적용됩니다. 그런 다음 강화된 라이브러리는 Illumina MiSeq를 사용하여 시퀀싱되어 300bp의 페어드 엔드 읽기를 생성합니다. 대상 지역의 예상 깊이는 평균 200배입니다.

데이터 분석은 이전에 설명한 대로 수행됩니다. 간단히 말해서, 원시 시퀀싱 데이터는 참조 인간 게놈(2월 20일)에 정렬됩니다. 2009, GRCh37/hg19) BWA-MEM을 사용합니다. Picard를 사용하여 필요한 데이터 변환, 정렬 및 인덱싱을 수행합니다. 단일 뉴클레오티드 변형과 삽입 삭제 모두에 대한 주요 변형 호출 프로세스는 GATK 소프트웨어 패키지로 작동됩니다. 구조적 변형도 식별됩니다. 우리는 ANNOVAR를 적용하여 유전자 변이에 적절하게 주석을 달 것입니다. 여기에는 최소한 유전자 주석, 아미노산 변화 주석, SIFT 점수, PolyPhen2 점수, dbSNP 식별자, 1000 Genome Project 대립 유전자 빈도, gnomAD 대립 유전자 빈도 및 변형 임상적 중요성이 있는 ClinVar 데이터베이스가 포함됩니다. 그런 다음 IGV를 사용하여 그래픽 인터페이스에서 시퀀스의 매핑과 주석을 볼 것입니다.

관심 있는 변종의 대립유전자 빈도는 다양한 참가자 그룹 간에 비교됩니다. 우리는 매우 강력한 효과를 갖는 가능한 희귀 변종(단일 유전자 모델)과 중간에서 강한 효과를 갖는 상대적으로 일반적인 변종(복합 표현형 모델)을 찾을 것입니다.