Tarkkuuslääketiede nosiseptioon, sngceptioniin ja proprioseptioon.

Precision Medicine Initiative on määritellyt tarkkuuslääketieteen "nousevaksi lähestymistavaksi sairauksien hoitoon ja ennaltaehkäisyyn, jossa otetaan huomioon kunkin henkilön yksilöllinen vaihtelu geeneissä, ympäristössä ja elämäntavoissa".

Kipu määritellään "epämiellyttäväksi aisti- ja emotionaaliseksi kokemukseksi, joka liittyy todelliseen tai mahdolliseen kudosvaurioon tai kuvataan sellaiseksi vaurioksi" International Association for the Study of Pain -järjestössä (IASP). Perinteisesti arkuus tai sng sisältyy myös yksi kivun tuntemuksista. Äskettäin määritimme sngceptionin happo- ja/tai arkuustuntemukseksi somatosensorisessa järjestelmässä ja paljastimme, että lihasten analgesia tapahtuu aineen P ja Tac1:n kautta.

Kliinisen tuloksen mukaan jotkut potilaat reagoivat hyvin fysikaalisiin tekijöihin ja jotkut suosivat injektiota. Edellä mainittujen geenien geneettiset variantit voivat olla erilaisten terapeuttisten vaikutusten määrääviä tekijöitä. Kesti kuitenkin noin 4-8 viikkoa ennen kuin potilas siirtyi hoitovaihtoehdosta toiseen. Jos pystymme määrittelemään optimaalisen hoitomuodon geneettisten biomarkkerien avulla, hoidon kulku ja kokonaislaajennus vähenevät paljon.

Oletamme, että ehdotettujen geenien geneettiset variantit (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TREKTA1SK3 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2, CaV3.2, Nav1.1, Piezo1 ja Piezo2, Runx3 tai Egr3, endoteliinia konvertoiva entsyymi kaltainen 1 (ECEL1), myosiinin raskasketjugeenit MYH3 ja MYH8, myosiinia sitova proteiini C -geeni, MYBPC1 ja TNNI2, TNNT3 ja TPM2, jotka koodaavat lihassäätelyproteiineja troponiini I, troponiini T ja beeta-tropomyosiini) voivat olla sng/kipuhoidon tai proprioseptiivisen toiminnan prognostisia biomarkkereita.

1. Erityiset tavoitteet

1. Luodaan seuraavan sukupolven sekvensointiin (NGS) perustuva lähestymistapa löytääkseen geneettisiä variantteja, jotka voivat määrittää sng/kipuhoitomenetelmien vasteen ja idiopaattisen skolioosin fenotyypin.
2. Löytää sng/kivun mahdollisia metabolomiikkaa ja proteomisia markkereita.
3. Tarkkuuslääketieteen algoritmin määrittäminen kivun/kivun hallintaan geneettisten markkerien avulla.

2. Viime vuosina tiimillämme oli saavutuksia, jotka oikeuttavat geneettisten varianttien etsimisen uuden kivun/kivun hoitoalgoritmin kehittämiseksi.

1. LLLT:n analgesia tapahtuu TRPV1:n kautta.
2. Analgesia terapeuttisella ultraäänellä tapahtuu ASIC3:n kautta.
3. Dekstroosiinjektio vähensi kroonista lihaskipua ASIC1a:n kautta.
4. Biomarkkeri sng/kipulle fibromyalgiassa.

3. Tutkimuksen suunnittelu

(1) Osallistujat kohortista A-Myofascial kipuoireyhtymä: Rekrytoimme 80 potilasta National Taiwan University Hospitalista ja sen haarasairaalasta.

A. Potilaan kelpoisuus:

1. Osallistumiskriteerit: (1) Ikä 18-100 vuotta. (2) VAS>=30 tai VAS>=30 4 kg:n paineessa (3) Diagnoosin myofaskiaalinen kipuoireyhtymä potilas ja halukas saamaan hoitoa (mukaan lukien LLLT, terapeuttinen ultraääni ja paikallinen dekstroosiinjektiohoito). Päätutkija vahvisti MPS-diagnoosin kireällä nauhalla, triggerpisteellä ja säteilevän kivun kriteereillä.
2. Poissulkemiskriteerit: Ne, joilla oli aktiivinen infektio, maligniteetti ja hematologiset sairaudet, suljettiin pois. Potilaat, jotka olivat saaneet paikallista injektiota ylempään puolisuunnikkaan 6 kuukauden sisällä, ovat myös poissuljettuja.

B. Tutkimuksen suunnittelu:

1. Tietoisen suostumuksen saamisen jälkeen kerätään perusdemografiset tiedot, mukaan lukien ikä, sukupuoli, työ, koulutustaso ja aiempi sairaushistoria kelvollisista potilaista.
2. Sopivat potilaat saivat ensin LLLT:tä, jonka aallonpituus oli 685 nm ja teho 30 mW (BTL-5000 Laser, BTL, Stevenage, UK) energiatiheydellä 8 J/cm2 ylemmän puolisuunnikkaan lihaksen laukaisupisteessä. VAS-kipu ennen hoitoa ja sen jälkeinen VAS-sng kerätään LLLT-fenotyypin määritystä varten.
3. Sitten heidät jaetaan kätevästi kahteen ryhmään (40 kohdetta kussakin ryhmässä): A. terapeuttinen ultraääniryhmä; B. proloterapiaryhmä. Ryhmä A saa 1 MHz:n terapeuttista ultraääntä 5 minuutin ajan 2-3 kertaa viikossa kipeälle ylemmälle trapetsilihakselle. Ryhmä B saa hypertonista proloterapiaa ylemmän puolisuunnikkaan lihaksen perimysiuumissa. Injektioaine on 5 ml 5 % dekstroosiliuosta. Sen varmistamiseksi, että neula ei ollut verisuonessa, neula imettiin ennen injektiota. Sama lääkäri (päätutkija) ruiskuttaa kaikki potilaat lääkäreiden välisen vaihtelun välttämiseksi. Mitään muuta lääkitystä tai fyysistä modaalia ei annettu tehon häiriöiden välttämiseksi molemmissa ryhmissä.
4. Rekrytoidut potilaat arvioidaan ennen injektiota ja sen jälkeen sekä 2 viikkoa injektion jälkeen. Ensisijainen tulos on VAS-kipu ja VAS-sng (visuaalinen analoginen asteikko) pisteillä 0-100, jossa 100 on arvo, joka edustaa suurinta kivun astetta. Toissijaisia ​​tuloksia ovat kipukynnys, lihasten sävy ja SF-36-a-kyselylomake koostuu 36 kohdasta ja 8 alueesta, jotka koskevat potilaan käsitystä elämänlaadustaan ​​(QoL). Laskimoveri- ja virtsanäytteet kerättiin ensimmäisellä käynnillä ja 2 viikon käynnillä. Verinäytteet leimattiin anonymisoidulla ID-numerolla, sentrifugoitiin ja säilytettiin -80 ºC:ssa lukitussa pakastimessa tulevaan käsittelyyn asti. Buffy coat erotetaan sentrifugoinnin jälkeen ja säilytetään myös. Virtsanäytteet jaettiin eriin ja säilytettiin -80 ºC:ssa lukitussa pakastimessa tulevaa analysointia varten.
5. Pelastusterapia (cross-over hoito): Jos osallistuja ei ole tyytyväinen ensimmäiseen hoitoon ja VAS:n paraneminen on alle 10, hän on oikeutettu saamaan pelastushoitoa - toisen ryhmän hoitoa. Ja he palaavat klinikalle vielä 2 viikoksi. Tulosmuuttujat kerätään myös kolmannella käynnillä.

(2) Osallistujat kohortin B-idiopaattisesta skolioosista: Rekrytoimme 80 potilasta Taiwanin kansallisesta yliopistosairaalasta ja sen haarasairaalasta sekä Taichungin veteraanisairaalasta.

A. Potilaan kelpoisuus:

1. Osallistumiskriteerit: (1) Ikä 10–65 vuotta. (2) Diagnosoitu idiopaattiseksi skolioosiksi Skolioosin diagnoosi vahvistettiin antero-posteriorisella tavallisella röntgenkuvalla, jonka Cobbs-kulma oli suurempi kuin 10 astetta.
2. Poissulkemiskriteerit: (1) Ne, joilla oli aktiivinen infektio, maligniteetti ja hematologiset sairaudet, suljettiin pois. (2) Sellaiset, joilla on spesifinen skolioosin etiologia, mukaan lukien synnynnäinen skolioosi, joka johtuu nikamien epämuodostuksesta tai virheellisestä segmentaatiosta, ja neuromuskulaarinen skolioosi, joka johtuu lihasten epätasapainosta, syndroomasta skolioosista tai rappeuttavasta skolioosista.

B. Tutkimuksen suunnittelu:

1. Tietoon perustuvan suostumuksen saamisen jälkeen kerätään perusdemografiset tiedot, mukaan lukien ikä, sukupuoli, työ, koulutustaso, fyysinen aktiivisuus ja aiempi sairaushistoria.
2. Rekrytoidut potilaat saavat arvioinnin vain kerran. Kerätyt parametrit ovat Cobbin kulma, selkärangan kiertokulma, VAS-kipu ja VAS-sng (visuaalinen analoginen asteikko) pisteillä 0-100, jossa 100 on arvo, joka edustaa suurinta kivun astetta, kipukynnystä (Park, Kim et al. 2011), paraspinaalisen lihaksen voima ja sävy ja SF-36-a-kyselylomake koostuu 36 kohdasta ja 8 alueesta, jotka käsittelevät potilaan käsitystä elämänlaadustaan ​​(Li, Wang et al. 2003). Myös laskimoveri- ja virtsanäytteitä kerättiin. Verinäytteet leimattiin anonymisoidulla ID-numerolla, sentrifugoitiin ja säilytettiin -80 ºC:ssa lukitussa pakastimessa tulevaan käsittelyyn asti. Buffy coat erotetaan sentrifugoinnin jälkeen ja säilytetään myös. Virtsanäytteet jaettiin eriin ja säilytettiin -80 ºC:ssa lukitussa pakastimessa tulevaa analysointia varten.

(3) DNA:n erottaminen ja NGS-pohjainen sekvensointi ja genotyypitys Genominen DNA uutetaan osallistujien perifeerisen veren mononukleaarisoluista Gentra Puregene -sarjan avulla valmistajan (Qiagen, Hilden, Mettmann, Saksa) ohjeiden mukaisesti ja altistetaan agaroosille. geeli ja O.D. suhdetestit sen puhtauden ja pitoisuuden varmistamiseksi. DNA fragmentoidaan käyttämällä Covarista (Covaris, Woburn, MA, USA), tavoitteena huipun pituus 800 bp. Illumina-kirjastot luodaan gDNA:sta käyttämällä TruSeq Library Preparation Kitiä (Illumina, San Diego, CA, USA).

DNA-sieppauskoettimet suunnitellaan räätälöitynä kohdentamaan TRPV1:tä, ASIC1a:ta, ASIC3:a, Tac1:tä, COMT:tä, TCL1A:ta, POMC:tä ja RGS4:ää, ja ne syntetisoidaan käyttämällä Roche KAPA HyperChoice -protokollaa (Roche, Madison, WI, USA). Kaikki näiden 8 geenin koodaavat alueet ja ei-koodaavat alueet (promoottorit, intronit, transloimattomat 5'- ja 3'-alueet) otetaan mukaan.

NGS-kohdealueen rikastamista käytetään kohdealueen rikastamiseen/kaappaamiseen (~148 Kb). Rikastetut kirjastot sekvensoidaan sitten käyttämällä Illumina MiSeqiä 300 bp:n parillisen pään lukujen luomiseksi. Kohdealueiden odotettu syvyys on keskimäärin 200x.

Tietojen analyysit suoritetaan edellä kuvatulla tavalla. Lyhyesti sanottuna raakasekvensointitiedot kohdistetaan ihmisen vertailugenomiin (helmikuu. 2009, GRCh37/hg19) käyttämällä BWA-MEM:ää. Käytämme Picardia tarvittavien tietojen muuntamiseen, lajitteluun ja indeksointiin. Päävarianttien kutsuprosessi sekä yksittäisille nukleotidivarianteille että indeleille suoritetaan GATK-ohjelmistopaketilla. Myös rakenteelliset variantit tunnistetaan. Käytämme ANNOVARia geneettisten muunnelmien asianmukaiseen merkitsemiseen; tämä sisältää ainakin geenimerkinnän, aminohappomuutosmerkinnän, SIFT-pisteet, PolyPhen2-pisteet, dbSNP-tunnisteet, 1000 genomiprojektin alleelitaajuudet, gnomAD-alleelitaajuudet ja ClinVar-tietokannan, jolla on kliininen merkitys. Käytämme sitten IGV:tä tarkastellaksemme sekvenssien kartoitusta ja huomautuksia graafisessa käyttöliittymässä.

Kiinnostuksen kohteena olevien varianttien alleelitaajuuksia verrataan eri osallistujaryhmien välillä. Etsimme mahdollisia harvinaisia ​​variantteja, joilla on erittäin vahvat vaikutukset (yhden geenin malli) sekä suhteellisen yleisiä variantteja, joilla on kohtalaisia ​​tai voimakkaita vaikutuksia (kompleksifenotyyppimalli).