Efeitos do Treinamento Físico na Inflamação Sistêmica e no Reparo Muscular de acordo com o Fenótipo da Doença Pulmonar Crônica Obstrutiva (DPOC)

POPULAÇÃO DO ESTUDO: Pacientes diagnosticados com DPOC de acordo com os critérios estabelecidos pela ATS (American Thoracic Society) e pela SEPAR (Sociedade Espanhola de Pneumologia e Cirurgia Torácica) apresentando obstrução moderada a grave das vias aéreas (VEF1 <60%) e impacto clínico de sua doença . Os pacientes deveriam estar estáveis ​​e com terapia adequada, não devendo ter sofrido exacerbações da doença por um período de três meses antes do estudo e sem tratamento com corticosteroides orais por pelo menos o mesmo período.

TAMANHO DA AMOSTRA: 30 pacientes diagnosticados no Departamento de Pneumologia, Hospital Virgen del Rocío de Sevilla, consentimento informado.

Cálculo do tamanho da amostra: Analisando o tamanho do efeito em detrimento de uma melhora no trabalho realizado acima de 15 W no teste de esforço, e considerando um desvio padrão deste parâmetro +/- 10W, permitindo detectar diferenças nas variáveis ​​metabólicas musculares, tomando algumas riscos alfa <0,05 e beta < 0,2 e calculando uma porcentagem de perdas de 15%, os pesquisadores estimam um tamanho de amostra de 15 pacientes para cada grupo (tamanho do PC).

CRITÉRIOS DE SAÍDA DO ESTUDO:

• descompensação clínica do paciente
• Perda de 3 ou 5 sessões consecutivas do programa de treinamento interrompido.
• Por iniciativa do paciente

CARACTERÍSTICAS DOS GRUPOS E DESENHO DO ESTUDO:

Trata-se de um caso-controle prospectivo, com dupla orientação ex vivo e in vitro.

Os pacientes diferem em DPOC "dominância enfisema" (15 pacientes) ou DPOC sem "predominantemente enfisema" (15 pacientes) obtidos de acordo com critérios objetivos para métodos quantitativos de uma Tomografia Computadorizada de Alta Resolução.

O estudo seguirá as recomendações da Declaração de Helsinque sobre experimentação humana e níveis de segurança de proteção de dados exigidos pela Lei 15/1999 de 13 de dezembro. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética de nossa instituição e obterá o consentimento informado dos indivíduos recrutados.

PROGRAMA DE TREINAMENTO DO ANO:

Todos os pacientes foram submetidos a um programa de treinamento a ser realizado por 12 semanas em sessões de 60 minutos:

1. .- 20 minutos de bicicleta ergométrica com um nível de carga inicial de cerca de 70% do pico de consumo basal de oxigênio, aumentando a carga a cada duas semanas conforme tolerado.
2. - Halterofilismo em 2 séries de 6 repetições de 5 exercícios simples. Estes são realizados em uma estação multigimnastyc (CLASSIC Fitness Center, KETTLER) e compreendem: ou simples flexão de braço (puxar cabo para o peito "Puxas de peito"): efeitos sobre o grande dorsal, deltóides e bíceps. Sentado de frente para o drive da torre, aproximando a barra do peito e depois estendendo os braços após retornar à posição inicial.

ou simples extensão dos braços ("Shoulder press"): Efeitos nos deltóides e tríceps. Sentado no banco ereto e segurando o peso na altura dos ombros, haverá extensão dos braços acima da cabeça, retornando lentamente após dobrar os braços para a posição inicial.

ou flexão e extensão do braço contra resistência (Butterfly "Butterfly"): Efeitos nos músculos peitorais e deltóides. Sentado ereto no banco com os antebraços e cotovelos apoiados em uma alavanca, leva-o até a linha média, cedendo lentamente até a posição inicial.

ou alongamento da perna ("extensão da perna"): Efeitos no quadríceps. Sentado no banco, a extensão das pernas é realizada contra resistência.

ou agachamentos ("Leg curls"): Efeitos nos bíceps femorais e panturrilhas. Deitado de bruços no banco, as pernas são dobradas contra o peso.

A resistência será aumentada gradativamente a partir de 70% do peso máximo que o paciente consegue levantar em uma única manobra (Teste 1RM). A cada duas semanas o peso máximo é reavaliado para ajustar a carga de treinamento em cada paciente.

VARIÁVEIS, AMOSTRAGEM E MEDIÇÃO:

Todos os pacientes foram submetidos a testes iniciais e após o programa de treinamento.

• Eletrocardiograma elementar analítico de 12 derivações
• Espirometria e prova broncodilatadora simples: ser realizada em Datospir 92 no início e após administração de 200 microgramas de salbutamol
• gases sanguíneos
• volumes pulmonares estáticos (CRF, VR, CPT) por pletismografia.
• Estudo da difusão (DLCO) pela técnica de respiração única (equipamento Masterlab).
• pressões musculares máximas inspiratórias e expiratórias, utilizando um medidor específico (Micro Medical, Rochester, EUA) conectado a um transdutor de pressão e um sistema de registro digital.
• TC de tórax (apenas na linha de base): Phillips Tomoscan com estação de trabalho Easy Vision versão 4.2 que permite a análise densitométrica do parênquima pulmonar. A análise quantitativa do grau de enfisema foi realizada com o software 3D MeVisPULMO (MeVis Research, Research Partner, University of Bremen, Alemanha). Trata-se de um protótipo de software que permite o diagnóstico funcional baseado em imagens de TC e em relação aos compartimentos anatômicos do pulmão. Inclui segmentação automatizada das vias aéreas, pulmões, lobos pulmonares e abordagem sublobar dos segmentos. Esse recurso o torna especialmente útil para aprimorar o processo de diagnóstico em doenças pulmonares graves. O software de análise fornece uma avaliação regional MeVisPULMO permite parâmetros adequados medidos por TC de pulmão, tais como: volume total, densidade média, índice de pixels ou índice de bolhas (7,22).

• Avaliação da força muscular:

  1. O teste de uma repetição máxima (teste de 1 RM) mede a quantidade máxima de peso (em kg) que pode ser levantada em uma única manobra usando uma estação multiginástica (Classic Fitness Centre, Kettler, Postfach, EUA). Pode para cada um dos cinco exercícios de membros superiores e inferiores que são desenvolvidos (puxada de peito, borboleta, desenvolvimento de ombro, extensão de perna e flexão de perna).

quadríceps isométrico máximo b.força dominante. Haverá uma cadeira quádrupla especialmente preparada para este procedimento (HUR Labs, Sanro) e utilizando um cabo de dinamômetro (Performance recorder). Haverá pelo menos 3 manobras de força isométrica máxima de 5 a 10 segundos de duração. São exercícios válidos que apresentam uma variabilidade inferior a 10%. O valor mais alto é tomado como força máxima.

• Composição corporal: compartimentos corporais estimados como gordurosos, não gordurosos e água corporal por impedância bioelétrica (Bodystat 1500, Ilha de Man, Reino Unido). O IMC é calculado dividindo-se o peso (Kg) pela altura (m2) massa isenta de gordura, massa isenta de gordura (MLG) e gordura (MG) medida por bioimpedância (). A relação do índice de MLG (FFMi) é calculada pela MLG (kg) e altura (m2). A perda de massa muscular é definida como índice de MLG <16 kg/m2 para homens e <15 kg/m2 para mulheres.

• Teste de Exercício:

  1. Máxima com cicloergômetro e metodologia já conhecida (20), incluindo: Determinar, a partir dos gases respiratórios, consumo de oxigênio, produção de carbono e limiar anaeróbio indireto, padrão respiratório (ventilação por minuto, volume corrente, frequência respiratória), monitoração eletrocardiográfica e oximetria de pulso durante exercício com controle da frequência cardíaca, pressão arterial e escala de Borg para dispnéia.
  2. Submáxima de cicloergômetro de resistência a 70% de carga alcançada no teste final, com controle de tempo de resistência principalmente, distância percorrida e controle de saturação (oximetria de pulso) e frequência cardíaca alcançados.
  3. Teste de caminhada de 6 minutos, conforme orientações padrão da ATS.

• Avaliação da dispneia e qualidade de vida:

  1. Índices de dispnéia e taxa de transição medem a deterioração funcional, a magnitude da tarefa e a magnitude do esforço (Teste de Mahler).
  2. Avaliação da qualidade de vida com base no questionário específico (CRDQ) proposto por Guyatt para pacientes com DPOC e modificado para sua compreensão em indivíduos de língua espanhola.
• Avaliação de marcadores de inflamação e catabolismo: Será realizada contagem de glóbulos brancos por citometria de fluxo e medida dos níveis de PCR em amostras de sangue por PCR quantitativo em tempo real. A detecção de diversas citocinas, IL6, IL8, IL10, IL12, TNF alfa, IGF-1 e MIC-A e MIC-B circulantes é realizada por ensaio imunossorvente (ELISA) utilizando kit específico para cada marcador.
• Biópsia do Músculo Quadríceps: As biópsias foram realizadas no meio da coxa, obtendo amostras do vasto lateral do músculo quadríceps. As amostras foram obtidas em ambiente ambulatorial. Algumas das biópsias foram fixadas em formalina e incluídas em blocos de parafina e algumas serão congeladas com nitrogênio líquido e armazenadas a -80°C para posterior utilização em estudo genético e imuno-histoquímico.

Para análise da expressão dos genes selecionados, proceda à extração do RNA dos tecidos previamente congelados em nitrogênio líquido. Neste será utilizado Reagente Trizol (Invitrogen). A partir do RNA isolado foi realizada a transcrição reversa utilizando o kit Superscript II RNase transcriptase reversa (Invitrogen) e o cDNA resultante foi utilizado para realizar PCR quantitativo em tempo real. A reação de PCR foi realizada usando fluorocromos como sondas SYBR Green ou Taqman (Applied Biosystems). Serão avaliados com base em seus genes no transcriptoma muscular:

• TNF-alfa e seus dois receptores (TNFR-I e TNFR-II), as duas isoformas musculares IGF-1 (IGF-1EA e FGM) e seu receptor específico (IGF-1R).
• Genes ligados à biogênese: Paired box gene 7 (Pax7), M-caderina e Myo-D.
• Marcadores-lesão por estresse celular: isoformas adultas demiosina cadeia pesada, tanto embrionárias (MyHC-emb) quanto perinatais (MyHC-peri).

Estudos imuno-histoquímicos foram realizados em seções de 5 um de blocos de tecido de parafina previamente. Esses estudos irão detectar marcadores como cadeias pesadas de miosina (MyHC) I e II (para tipagem e estudo morfométrico fibrilar) N-CAM/CD 56 e Met (para quantificação de células satélites no tecido muscular) e desmina (para determinação da origem muscular ). Para detecção usando a técnica padrão de imunoperoxidase-biotina.avidinas (DakoCytomation, Dako Denmark) com anticorpos específicos para cada um dos marcadores.

ANÁLISE ESTATÍSTICA:

Para comparação das variáveis ​​numéricas entre os grupos foram utilizados testes não paramétricos ou paramétricos, dependendo de sua distribuição (análise de variância, teste t de Student e Mann-Whitney). Para analisar a influência do treinamento nas variáveis ​​funcionais e morfométricas também foi realizada uma análise da variação percentual [(valor pós - valor pré / valor pré) x 100]. Examinar a relação entre diferentes variáveis ​​usando os coeficientes de correlação de Pearson ou Spearman, de acordo com a distribuição das mesmas. Haverá também uma análise multivariada, regressão múltipla. Ser considerado estatisticamente significativo em p < 0,05. A dispersão de um valor médio é expressa como média ± desvio padrão.