Влияние физических упражнений на системное воспаление и восстановление мышц в зависимости от фенотипа обструктивной хронической болезни легких (ХОБЛ)

Исследуемая популяция: пациенты с диагнозом ХОБЛ в соответствии с критериями, установленными ATS (Американское торакальное общество) и SEPAR (Испанское общество пульмонологии и торакальной хирургии) с обструкцией дыхательных путей от умеренной до тяжелой (ОФВ1 <60%) и клиническими последствиями заболевания. . Пациенты должны находиться в стабильном состоянии и получать соответствующую терапию, а также не должны иметь обострений заболевания в течение трех месяцев до начала исследования и не получать лечение пероральными кортикостероидами в течение как минимум такого же периода.

ОБЪЕМ ВЫБОРКИ: 30 пациентов, диагностированных в отделении пульмонологии больницы Вирхен-дель-Росио-де-Севилья, информированное согласие.

Расчет размера выборки: Анализ размера эффекта за счет улучшения работы, достигнутого более чем на 15 Вт в нагрузочном тесте, и рассмотрение стандартного отклонения этого параметра +/- 10 Вт, что позволяет выявить различия в метаболических переменных мышц, принимая некоторые риски альфа <0,05 и бета <0,2 и вычисляя процент потерь 15%, исследователи оценивают размер выборки в 15 пациентов для каждой группы (размер ПК).

КРИТЕРИИ ВЫХОДА ИЗ ОБУЧЕНИЯ:

• клиническая декомпенсация больного
• Потеря 3 или 5 последовательных сеансов тренировочной программы прекращается.
• По инициативе больного

ХАРАКТЕРИСТИКИ ГРУПП И ДИЗАЙНА ИССЛЕДОВАНИЯ:

Это проспективный случай-контроль, с двойной ориентацией ex vivo и in vitro.

Различают больных ХОБЛ «преобладание эмфиземы» (15 больных) или ХОБЛ без «преимущественно эмфиземы» (15 больных), достигаемые по объективным критериям количественных методов компьютерной томографии высокого разрешения.

Исследование будет следовать рекомендациям Хельсинкской декларации об экспериментах на людях и уровнях безопасности защиты данных, требуемых Законом 15/1999 от 13 декабря. Исследование было одобрено комитетом по этике нашего учреждения и получит информированное согласие набранных лиц.

ПРОГРАММА ОБУЧЕНИЯ ГОДА:

Всем пациентам была проведена программа тренировок, проводимая в течение 12 недель сеансами по 60 минут:

1. .- 20 минут велоэргометрии с начальным уровнем нагрузки около 70% от исходного пикового потребления кислорода, увеличивая нагрузку каждые две недели по мере переносимости.
2. - Тяжелая атлетика в 2 подхода по 6 повторений 5 простых упражнений. Они проводятся на станции мультигимнастики (CLASSIC Fitness Center, KETTLER) и включают: или простое сгибание рук (тяга троса к груди «Тяга от груди»): воздействие на широчайшие мышцы спины, дельтовидные мышцы и бицепсы. Сидя лицом к башне двигайтесь, приближая штангу к груди, а затем выпрямляя руки после возвращения в исходное положение.

или простое разгибание рук («Жим от плеч»): Воздействие на дельтовидные мышцы и трицепсы. Сидя прямо на скамье и удерживая вес на уровне плеч, вы будете вытягивать руки над головой, медленно возвращаясь после сгибания рук в исходное положение.

или сгибание и разгибание рук с сопротивлением («Баттерфляй» «Бабочка»): Воздействие на грудные и дельтовидные мышцы. Сидя прямо на скамье, положив предплечья и локти на рычаг, отведите его к средней линии, медленно уступая исходное положение.

или растяжка ног («разгибание ног»): воздействие на четырехглавую мышцу. Разгибание ног сидя на скамье выполняется с сопротивлением.

или приседания («сгибание ног»): воздействие на двуглавую мышцу бедра и икры. Лежа на скамье, ноги согнуты против веса.

Сопротивление будет увеличиваться постепенно, начиная с 70% от максимального веса, который вы можете поднять за один прием (Тест 1ПМ). Каждые две недели максимальный вес повторно оценивается для корректировки тренировочной нагрузки у каждого пациента.

ПЕРЕМЕННЫЕ, ОТБОР И ИЗМЕРЕНИЕ:

Все пациенты прошли базовые и после программы обучения следующие тесты.

• Аналитическая элементарная электрокардиограмма в 12 отведениях
• Спирометрия и бронхорасширяющий тест просты: проводится в приборе Datospir 92 исходно и после введения 200 мкг сальбутамола.
• Газы крови
• статические объемы легких (ФОЕ, РВ, ТСХ) с помощью плетизмографии.
• Исследование диффузии (DLCO) методом одиночного дыхания (аппаратура Masterlab).
• максимальное мышечное давление как на вдохе, так и на выдохе, используя специальный датчик (Micro Medical, Рочестер, США), подключенный к датчику давления и цифровой системе записи.
• КТ грудной клетки (только на исходном уровне): томоскан Phillips с рабочей станцией Easy Vision версии 4.2, которая позволяет выполнять денситометрический анализ паренхимы легких. Количественный анализ степени эмфиземы легких проводили с помощью программного обеспечения 3D MeVisPULMO (MeVis Research, исследовательский партнер Бременского университета, Германия). Это прототип программного обеспечения, позволяющего проводить функциональную диагностику на основе изображений КТ и в отношении анатомических отделов легкого. Включает автоматизированную сегментацию дыхательных путей, легких, долей легкого и сегментов поддолевого доступа. Эта функция делает его особенно полезным для улучшения диагностического процесса при тяжелых заболеваниях легких. Программное обеспечение для анализа обеспечивает региональную оценку MeVisPULMO позволяет правильно измерять параметры легких с помощью КТ, такие как: общий объем, средняя плотность, индекс пикселей или индекс булл (7.22).

• Оценка мышечной силы:

  1. Тест одного повторного максимума (тест 1 RM) измеряет максимальное количество веса (в кг), которое можно поднять за одно упражнение с использованием мультигимнастической станции (Classic Fitness Centre, Kettler, Postfach, США). Он может выполняться для каждого из пяти упражнений на верхние и нижние конечности, которые разрабатываются (тяга груди, баттерфляй, жим от плеч, разгибание ног и сгибание ног).

максимальная изометрическая четырехглавая мышца б. преобладает сила. Для этой процедуры будет специально подготовлен четырехместный стул (HUR Labs, Sanro) с использованием кабеля динамометра (регистратор производительности). Будет как минимум 3 маневра максимальной изометрической силы продолжительностью от 5 до 10 секунд. Это действительные упражнения, которые представляют вариабельность менее 10%. Наибольшее значение принимается за максимальную силу.

• Состав тела: жировые и обезжиренные тела, а также вода в организме оцениваются по мощности биоэлектрического импеданса (Bodystat 1500, остров Мэн, Великобритания). ИМТ рассчитывается путем деления веса (кг) на рост (м2) массы без жира, массы без жира (FFM) и жира (FM), измеренных с помощью биоимпеданса (). Соотношение индекса FFM (FFMi) рассчитывается по FFM (кг) и росту (м2). Потеря мышечной массы определяется как индекс FFM <16 кг/м2 у мужчин и <15 кг/м2 у женщин.

• Упражнение Тест:

  1. Максимальный с помощью велоэргометра и уже известной методики (20), в том числе: определение по дыхательным газам потребления кислорода, продукции углерода и непрямого анаэробного порога, модели дыхания (минутная вентиляция, дыхательный объем, частота дыхания), электрокардиографический мониторинг и пульсоксиметрия во время упражнения с контролем ЧСС, артериального давления и одышки по шкале Борга.
  2. Субмаксимальное значение велоэргометра с сопротивлением при нагрузке 70%, достигнутое в конечном тесте, с контролем времени сопротивления в первую очередь, пройденного расстояния и контроля насыщения (пульсоксиметрия) и частоты сердечных сокращений.
  3. Тест 6-минутной ходьбы, согласно стандартным рекомендациям ATS.

• Оценка одышки и качества жизни:

  1. Показатели одышки и скорости перехода измеряют функциональное ухудшение, величину задачи и величину усилия (тест Малера).
  2. Оценка качества жизни на основе специального опросника (CRDQ), предложенного Guyatt для пациентов с ХОБЛ и модифицированного для вашего понимания испаноязычными субъектами.
• Оценка маркеров воспаления и катаболизма: он будет проводить подсчет лейкоцитов с помощью проточной цитометрии и измерять уровни СРБ в образцах крови с помощью количественной ПЦР в реальном времени. Обнаружение различных циркулирующих цитокинов, ИЛ6, ИЛ8, ИЛ10, ИЛ12, ФНО-альфа, ИФР-1 и МИК-А и МИК-В проводят иммуноферментным анализом (ИФА) с использованием специфического набора для каждого маркера.
• Биопсия четырехглавой мышцы: биопсию выполняли в середине бедра, получая образцы латеральной широкой мышцы четырехглавой мышцы. Образцы были получены в амбулаторных условиях. Часть биоптатов фиксировали в формалине и заключали в парафиновые блоки, часть замораживали жидким азотом и хранили при -80°С для последующего использования в генетическом и иммуногистохимическом исследовании.

Для анализа экспрессии выбранных генов приступают к извлечению РНК из тканей, предварительно замороженных в жидком азоте. Для этого будет использоваться реагент Trizol (Invitrogen). С выделенной РНК выполняли обратную транскрипцию с использованием набора обратной транскриптазы Superscript II RNase (Invitrogen) и полученную кДНК использовали для проведения количественной ПЦР в реальном времени. Реакцию ПЦР проводили с использованием флуорохромов, таких как зонды SYBR Green или Taqman (Applied Biosystems). Следующее будет оцениваться на основе их генов в мышечном транскриптоме:

• TNF-альфа и два его рецептора (TNFR-I и TNFR-II), две изоформы мышечного IGF-1 (IGF-1EA и FGM) и его специфический рецептор (IGF-1R).
• Гены, связанные с биогенезом: парный бокс-ген 7 (Pax7), M-кадгерин и Myo-D.
• Маркеры клеточного стрессового повреждения: взрослые изоформы тяжелой цепи демиозина, как эмбриональные (MyHC-emb), так и перинатальные (MyHC-peri).

Ранее иммуногистохимические исследования проводили на срезах парафиновых блоков ткани толщиной 5 мкм. Эти исследования позволят выявить такие маркеры, как тяжелые цепи миозина (MyHC) I и II (для типирования и морфометрического исследования фибриллярных клеток), N-CAM/CD 56 и Met (для количественного определения клеток-сателлитов в мышечной ткани) и десмин (для определения происхождения мышечной ткани). ). Для детекции используют стандартную методику иммунопероксидаз-биотин.авидинов (DakoCytomation, Dako Дания) с антителами, специфичными к каждому из маркеров.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ:

Для сравнения числовых переменных между группами использовали непараметрические или параметрические критерии в зависимости от их распределения (дисперсионный анализ, критерий Стьюдента и критерий Манна-Уитни). Для анализа влияния тренировки на функциональные и морфометрические переменные также был проведен анализ процентного изменения [(пост-значение - значение до/пред-значение) х 100]. Изучить взаимосвязь между различными переменными, используя коэффициенты корреляции Пирсона или Спирмена, в соответствии с их распределением. Также будет многомерный анализ, множественная регрессия. Считаться статистически значимым при p <0,05. Дисперсия среднего значения выражается как среднее ± стандартное отклонение.