Probióticos e o Microbioma: Ensaio de Intervenção Clínica para Ansiedade e Depressão

Propósito

O microbioma humano, também conhecido como microflora, é composto pelas colônias bacterianas do corpo. Embora as bactérias sejam comumente associadas a doenças, existem bactérias boas conhecidas como bactérias probióticas que crescem naturalmente no microbioma do intestino humano. As bactérias probióticas são microrganismos vivos e consistem em aproximadamente 400 diferentes cepas bacterianas que sustentam a vida em seu organismo hospedeiro. O microbioma intestinal, também conhecido como flora intestinal, desempenha um papel no desenvolvimento humano normal, na digestão, no peso corporal, na nutrição e na regulação do sistema imunológico, além de influenciar várias funções neurológicas. Verificou-se que fatores ambientais, incluindo antibióticos, doenças, estresse e dieta, podem alterar o microbioma de um indivíduo por meio de seus efeitos nas bactérias probióticas situadas na microflora intestinal.

Embora as bactérias probióticas cresçam naturalmente no intestino humano, a aquisição do microbioma intestinal varia em cada indivíduo, dependendo de vários fatores, incluindo método de nascimento e dieta precoce. A pesquisa sugere que a primeira exposição dos recém-nascidos a bactérias e a aquisição dos primeiros componentes de seu microbioma ocorre durante o nascimento. Os bebês adquirem as bactérias de suas mães ao passarem pelo canal vaginal durante o parto. A pesquisa indica que, por esse motivo, as crianças nascidas por cesariana têm um microbioma menos diversificado (Dominguez-Bello, Costello, Contreras, Magris, Hidalgo, Fierer e Knight, 2010). A pesquisa também sugere que, após o nascimento, os bebês continuam a adquirir seu microbioma intestinal nos primeiros dois anos de vida sob a influência da nutrição dietética. Por exemplo, em um estudo com seis bebês amamentados e seis alimentados com fórmula, aqueles que consumiram uma fórmula especialmente enriquecida que continha prebióticos (substâncias que alimentam os probióticos) e uma variedade de bactérias probióticas apresentaram uma flora intestinal muito mais diversificada do que aqueles que receberam leite materno (Harmsen, Wildeboer-Veloo, Raangs, Wagendorp, Klijn, Bindels e Welling, 2000). Observe que este estudo não nega os benefícios do leite materno e teve como objetivo avaliar o efeito de concentrações elevadas de prebióticos e probióticos em uma fórmula para bebês quimicamente semelhante ao leite materno.

Como as bactérias probióticas são adquiridas naturalmente de fontes ambientais, além de crescerem normalmente no corpo humano, é seguro para os humanos consumirem probióticos. Além disso, a Health Canada rotulou os probióticos como um produto de saúde natural (NHP) seguro para consumo humano. Alimentos comuns que comemos todos os dias contêm bactérias probióticas que enriquecem nossa flora intestinal. Por exemplo, iogurte e queijo contêm bactérias probióticas. Houve um aumento recente no interesse pelos probióticos entre os pesquisadores, à medida que aumentam os efeitos positivos dos probióticos no microbioma intestinal e o reconhecimento de seu grande potencial terapêutico para uma ampla variedade de condições.

O microbioma e a saúde física

A pesquisa mostrou que cepas bacterianas probióticas, como Bifidobacteria e Lactobacilli, auxiliam no tratamento da Síndrome do Cólon Irritável e outras doenças gastrointestinais e intestinais, inibindo a colonização e o crescimento de bactérias que causam doenças. Além disso, acredita-se que o microbioma intestinal desempenhe um papel integral na regulação do funcionamento saudável do sistema imunológico. O funcionamento do sistema imunológico é mantido por relações homeostáticas com o microbioma, que por sua vez desempenha um papel no desenvolvimento dos tecidos linfóides e do sistema imunológico (Hooper, Littman e Macpherson, 2012). Desequilíbrios na microflora intestinal têm sido associados a respostas imunes prejudicadas.

O microbioma e a saúde mental

O microbioma tem sido associado a uma variedade de condições de saúde mental. Os pesquisadores apelidaram essa conexão de "eixo intestino-cérebro" (Forsythe, Sudo, Dinan, Taylor e Bienenstock, 2010). Verificou-se que bactérias no intestino produzem GABA e serotonina, embora o mecanismo exato pelo qual esses neurotransmissores produzidos gastrointestinalmente influenciam o funcionamento do cérebro seja desconhecido até o momento. No entanto, interrupções no microbioma têm sido associadas ao autismo, bem como à ansiedade e aos transtornos depressivos.

Desequilíbrios na flora intestinal como resultado do uso precoce de antibióticos, por exemplo, também têm sido implicados no desenvolvimento do autismo. Foi demonstrado que os probióticos auxiliam no tratamento dos sintomas autistas, promovendo o crescimento de bactérias benéficas e inibindo o crescimento de bactérias nocivas. Pesquisadores identificaram um crescimento excessivo de certas cepas de Clostridia que produzem ácido propiônico no intestino de crianças autistas. O ácido propiônico é uma neurotoxina que atravessa a barreira hematoencefálica e pode interromper o desenvolvimento normal do cérebro na primeira infância (Parracho, Gibson, Knott, Bosscher, Kleerebezem e McCartney, 2010).

Interrupções no desenvolvimento da microflora normal também foram associadas a alterações na reatividade ao estresse que continuam na vida adulta. Por exemplo, várias vias metabólicas, como as que envolvem ácidos biliares e sintetizadores de hormônios esteroides, necessárias para as funções corporais dependem de um microbioma saudável (Antunes, Han, Ferreira, Lolic, Borchers, & Finlay, 2011). A pesquisa mostra que o uso de antibióticos no início da vida leva a uma redução na flora e diversidade intestinal e pode estar envolvido em causar um estado fisiológico de alerta, semelhante a um traço conhecido como "sensibilidade à ansiedade". A sensibilidade à ansiedade refere-se a uma tendência em alguns indivíduos de monitorar seu estado fisiológico continuamente e interpretar erroneamente as flutuações normais na homeostase como eventos que ameaçam a vida. Em estudos com animais, o consumo de probióticos leva a reduções nos comportamentos relacionados à ansiedade, bem como a alterações nos receptores GABA que medeiam os hormônios relacionados ao estresse (Bravo, Forsythe, Chew, Escaravage, Savignac, Dinan, Bienenstock e Cryan, 2011). Os efeitos benéficos da microbiota intestinal sobre o estresse e a ansiedade também foram evidenciados ao comparar camundongos livres de germes (ou seja, camundongos sem microbioma) com camundongos com microflora intestinal rica. Camundongos com microflora intestinal rica mostram menos reatividade ao estresse do que ratos livres de germes.

Proposta atual

O projeto proposto investigará os efeitos dos probióticos na ansiedade e fatores psicológicos e fisiológicos associados em humanos. O potencial terapêutico dos probióticos para reduzir a ansiedade e outros fatores associados a um microbioma interrompido será avaliado em um projeto duplo-cego placebo-cruzado. Com base nos resultados da pesquisa até o momento, existe a hipótese de que os probióticos reduzirão a ansiedade e os sintomas depressivos.

Metodologia

Setenta e cinco participantes masculinos e femininos com mais de 18 anos serão recrutados por meio de anúncios publicados em vários locais da área de Wolfville, bem como jornais locais e sites de mídia social como o Facebook. Anúncios on-line, incluindo um link para um site que contém informações sobre a elegibilidade e os requisitos do estudo (http://www.probioticstudy.com) serão postados nos grupos do Facebook de várias organizações em Wolfville, incluindo Inner Sun Yoga Center, Wolfville Farmer's Market e conselho da comunidade EOS Fine Foods, bem como em jornais locais como o Grapevine e o Advertiser (consulte o Apêndice A). Brochuras informativas serão distribuídas ao Valley Regional Hospital, Eastern Kings Memorial Health Center e Mud Creek Medical Co-op Ltd. para exibição em suas salas de espera (consulte o Apêndice B). Cartazes de anúncios também serão postados na área de Wolfville (incluindo o conselho da comunidade Acadia Athletic Complex, Wolfville Shopper's Drug Mart e conselho da comunidade Wolfville Post Office) com abas contendo o URL do site para a página de informações do estudo (consulte o Apêndice C). Um e-mail de todos os funcionários também será enviado aos funcionários da Acadia University direcionados a ocupações não acadêmicas para recrutamento (consulte o Apêndice D).

Como há pesquisas limitadas em participantes com menos de 18 anos, os participantes devem ter pelo menos 18 anos de idade. Os participantes também devem morar perto de Wolfville, Nova Escócia, poder ir a Wolfville para consultas com os pesquisadores e ter um endereço de e-mail válido. Os critérios de exclusão para participação incluem ter uma ocupação acadêmica, incluindo professor ou aluno de universidade/faculdade (para evitar efeitos de coorte relacionados a flutuações específicas em condições associadas a alto estresse durante o período letivo); ter HIV/AIDS; atualmente em quimioterapia; ter um problema metabólico, imunológico ou digestivo grave diagnosticado, incluindo câncer, doença de Crone ou colite ulcerativa, esclerose múltipla, lúpus, doença de Addison ou outra forma de insuficiência adrenal; atualmente em uso de medicamentos para ansiedade; tomar cápsulas probióticas; tomar antibióticos; ou ter qualquer outra doença médica grave.

Uma vez que os potenciais participantes tenham analisado as informações no site do estudo e indicado que desejam participar, eles serão direcionados para uma página de consentimento informado. Ao marcar a caixa e clicar em "Enviar" na página de consentimento informado on-line, eles indicarão seu consentimento para participar e serão direcionados para um questionário demográfico (consulte o Apêndice E). O questionário conterá perguntas sobre a saúde dos participantes, histórico médico e alimentos que consomem. Todos os dados coletados online durante este estudo serão armazenados em um servidor canadense para evitar problemas do Patriot Act associados a dados armazenados em servidores dos EUA. O pesquisador agendará consultas com os participantes que derem consentimento on-line para participar.

O estudo será realizado em um período de 22 semanas, durante o qual os participantes consumirão um probiótico oral por 10 semanas e um placebo (uma substância inerte sem efeito terapêutico) por 10 semanas, com um período de washout de duas semanas entre . Os participantes receberão o probiótico ou o placebo nas primeiras dez semanas e o outro nas 10 semanas seguintes. Nem o participante nem o pesquisador que administra os probióticos e placebos saberão qual deles o participante está tomando. Por se tratar de um projeto duplo-cego, apenas a supervisora, Dra. Susan Potter, terá conhecimento da condição experimental dos participantes. O supervisor designará aleatoriamente os participantes para uma condição placebo ou probiótica.

O probiótico usado neste estudo será o Organic Probiotics 7 Strains 20 Billion por grama adquirido de Prescribed For Life. Este é um pó probiótico orgânico natural, incluindo cepas de bactérias probióticas Acidophilus, Bifidum, Casei e Rhamnosus, 400 mg por cápsula. As cápsulas de placebo conterão 400 mg de farinha de arroz. Cada participante receberá dois frascos de comprimidos - um com 70 cápsulas de probióticos por dez semanas e outro com 70 cápsulas de placebo por dez semanas. Estas cápsulas devem ser consumidas por via oral, uma cápsula por dia.

O pesquisador e o supervisor agendarão uma reunião com cada participante para fornecer instruções detalhadas para o estudo e obter o consentimento informado para a continuação de cada participante no estudo (consulte o Apêndice F e o Apêndice G). Na consulta inicial, na consulta de dez semanas e na consulta final de vinte semanas, os participantes preencherão a escala Depressão, Ansiedade e Estresse (DASS) e o Índice de Sensibilidade à Ansiedade (ASI). Os participantes completarão essas medidas três vezes durante o período do estudo para que os pesquisadores possam medir a mudança nos sintomas de ansiedade e depressão nos três pontos de tempo. Em cada uma dessas reuniões, os participantes também receberão seu frasco de cápsulas de probióticos ou cápsulas de placebo para serem tomadas durante o período de 10 semanas. Na consulta de dez semanas, os participantes também receberão cópias do DASS e do ASI para serem preenchidos no final do estudo (consulte o Apêndice H). No terceiro e último encontro, os participantes trarão seus questionários preenchidos e terão a oportunidade de fazer quaisquer perguntas que possam ter sobre o estudo, bem como preencher uma cédula para o sorteio dos prêmios. Se desejarem saber em quais fases receberam as cápsulas de probiótico e placebo, serão informados de que as informações serão enviadas a eles por e-mail assim que o estudo for concluído.

Os participantes serão contatados pelo pesquisador no terceiro e sexto dia de cada fase (probiótico e placebo) via e-mail para fazer check-in e responder a quaisquer perguntas que possam ter (ver Apêndice I). Os participantes serão solicitados a preencher um breve questionário uma vez a cada duas semanas durante o período do estudo, que não deve levar mais de 5 minutos para ser concluído (consulte o Apêndice J e o Apêndice K), para registrar quaisquer alterações na ansiedade e/ou saúde física, conforme bem como manter as linhas de comunicação abertas caso surja alguma dúvida.

Consentimento

Os participantes preencherão dois formulários de consentimento, um online antes da coleta de informações demográficas e de identificação e outro antes de iniciar a fase probiótica do estudo (consulte o Apêndice E e o Apêndice G, respectivamente).

Engano e Debriefing

Embora não seja um engano técnico, os participantes receberão um placebo ou probiótico por intervalos de dez semanas no período do estudo, mas não serão informados sobre qual dos dois estão recebendo, embora sejam informados de que não serão informados. Após a conclusão do estudo, os participantes que desejarem saber qual dos dois (probióticos ou placebo) receberam durante cada período de dez semanas. Os participantes também terão a oportunidade de ter todas as suas perguntas respondidas pelo pesquisador e aqueles que desejarem receber uma cópia dos resultados serão enviados por e-mail assim que o estudo for concluído.

Riscos e Benefícios

Os probióticos são boas bactérias que crescem naturalmente no intestino humano. Até o momento, não há riscos publicados associados ao consumo de probióticos. No entanto, os participantes serão contatados duas vezes durante a primeira semana de cada fase (probiótico e placebo) para garantir que não estejam apresentando nenhum efeito colateral adverso. Além disso, os participantes enviarão atualizações sobre sua saúde física e mental a cada duas semanas durante o estudo, além de serem incentivados a entrar em contato com os pesquisadores caso tenham alguma dúvida durante o período do estudo.

É possível que os participantes fiquem mais conscientes de quaisquer sintomas ansiosos ou depressivos que estejam experimentando por meio da participação neste projeto de pesquisa e, como resultado do aumento da frequência, possam experimentar aumentos em seu sofrimento emocional. Para abordar essas preocupações, os participantes receberão informações de contato específicas para provedores de serviços de saúde mental na área de Wolfville.

Embora os benefícios diretos para os participantes sejam incertos neste ponto, é possível que eles experimentem uma redução na ansiedade e/ou sintomas depressivos, e é bastante provável que eles experimentem uma redução em quaisquer sintomas fisiológicos relacionados ao intestino, como resultado de tomar os probióticos. No entanto, será impossível determinar se quaisquer melhorias nos sintomas são atribuíveis à intervenção probiótica até que o estudo seja concluído.

Confidencialidade

A confidencialidade será mantida em todos os momentos. Uma vez inscritos no estudo, cada participante receberá um número de código exclusivo que será usado em todos os questionários e outros dados. Os nomes dos participantes não aparecerão em conjunto com nenhum dado, exceto para o questionário on-line inicial. Assim que os potenciais participantes forem contatados sobre sua participação na fase de intervenção do estudo, os dados do questionário online serão removidos do servidor e os nomes serão substituídos por números de código. Uma lista mestra de números de código e nomes será mantida em um arquivo protegido por senha em uma pasta separada no computador protegido por senha do pesquisador.

Segurança de dados: Todos os questionários em papel serão armazenados em um arquivo trancado em um escritório trancado. Todos os arquivos de dados eletrônicos serão armazenados em um computador protegido por senha. Como esta área de pesquisa é relativamente nova, os dados serão mantidos indefinidamente, pois podem ajudar a orientar estudos futuros.