Efeito da Transmissão de Energia Sutil e da Prática de Atenção Plena através da Caligrafia Tao na ADN Mitocondrial em Leucócitos do Sangue Periférico

Objetivo

O objetivo deste estudo é medir os efeitos de uma forma única de prática de mindfulness de Caligrafia Tao que envolve o envolvimento com arte Tao (traçar a Caligrafia Tao "Maior Amor" enquanto se ouve ou canta a Música Tao ou Canção Tao "Maior Amor") juntamente com a transmissão de energia subtil no ADN Mitocondrial em leucócitos do sangue periférico.

No nosso estudo anterior, os participantes que praticavam regularmente mostraram um aumento do comprimento dos telómeros em granulócitos do sangue periférico. Nos nossos outros estudos, os participantes relataram uma diminuição dos sintomas da sua doença conforme percecionado subjetivamente, sinais melhorados relatados pelos clínicos tratantes e uma melhoria do bem-estar medida por questionários científicos padronizados.

Hipóteses

A hipótese nula da investigação é que os indivíduos que recebem transmissão de energia subtil para o ADN Mitocondrial no tecido hemato-linfóide, e que se envolverão na prática diária de mindfulness de Caligrafia Tao durante 12 meses, não terão alteração significativa no conteúdo de ADN Mitocondrial em leucócitos do sangue periférico nas análises de seguimento e não mostrarão melhoria do bem-estar medida pelo questionário científico padronizado Rand SF-36 aos 3, 6 e 12 meses.

Para a análise estatística dos dados da avaliação laboratorial e dos scores obtidos dos questionários, a Anova, o Teste T e a análise de regressão serão utilizados para avaliar a hipótese nula. O valor p representará quão improvável os dados observados seriam se a hipótese nula fosse realmente verdadeira e os investigadores irão usá-los para chegar a conclusões. O nível de confiança está definido em 95% e se obtivermos p < 0,05, então H0 é rejeitada. O coeficiente de correlação será usado para determinar qualquer correlação entre vários fatores (ex. efeitos da idade, sexo, duração e frequência das práticas de mindfulness e outros) no resultado e a análise de regressão será usada para determinar a relação entre variáveis independentes e dependentes.

Ferramentas como o Minitabs versão 14 e/ou o Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) ou a versão gratuita do Statistical Package for the Social Sciences (PSPP) serão utilizadas.

Contexto e Enquadramento Teórico

As mitocôndrias são organelos com membrana, autorreplicantes, presentes em quase todas as células eucarióticas. A produção de energia mitocondrial é essencial para todos os processos celulares. Em geral, cada célula humana contém várias centenas a 1.000 mitocôndrias, cada uma com 2-10 cópias de ADN Mitocondrial que codificam 13 proteínas essenciais para a função da cadeia respiratória. Pensadas como tendo origem em ancestrais simbióticos, as mitocôndrias contribuem para muitos processos centrais para a função e disfunção celular, incluindo sinalização de cálcio, crescimento e diferenciação celular, controlo do ciclo celular e morte celular. A forma e posicionamento mitocondrial nas células é rigidamente regulado pelos processos de fissão e fusão, biogénese e autofagia, garantindo uma população mitocondrial relativamente constante. A herança mitocondrial é geralmente aceite como sendo materna, embora pequenas quantidades de mitocôndrias transmitidas paternalmente tenham sido descobertas em raras ocasiões.

A disfunção mitocondrial é considerada uma das características do envelhecimento e de doenças associadas à idade. O genoma mitocondrial é mais vulnerável a danos oxidativos e sofre uma taxa de mutação mais elevada comparado com o ADN nuclear. Causas subjacentes adicionais de disfunção mitocondrial incluem quantidade inadequada de mitocôndrias, exposição a toxinas ambientais, redução na permeabilidade da membrana mitocondrial, transporte prejudicado de metabolitos essenciais e mau funcionamento da cadeia de transporte de eletrões e síntese de Adenosina trifosfato (ATP).

Infelizmente, atualmente não existe nenhuma medida disponível que avalie globalmente a capacidade das mitocôndrias para realizar funções biológicas normais. As funções mitocondriais incluem, mas não se limitam a, fosforilação oxidativa e produção de energia na forma de Adenosina trifosfato (ATP), produção de espécies reativas de oxigénio (ROS), sinalização de morte celular, bem como síntese de hormonas esteróides e sinalização sistémica.

Tem sido proposto que o número de cópias de ADN Mitocondrial por célula (número de cópias de ADN Mitocondrial) reflete a saúde mitocondrial. Um dos principais motivos da popularidade do número de cópias de ADN Mitocondrial como um potencial marcador de saúde mitocondrial reside na facilidade da sua medição a partir de ADN armazenado, ou indiretamente a partir de dados de genotipagem/sequenciação. Comparado com ensaios diretos da função mitocondrial, que requerem tecido fresco, a escalabilidade das avaliações do número de cópias de ADN Mitocondrial é apelativa para estudos de biomarcadores.

No entanto, o número de cópias de ADN Mitocondrial não reflete diretamente a função da cadeia respiratória (RC) ou a capacidade de produção de energia. De acordo com a teoria do "limiar bioquímico", apenas quando o número de cópias de ADN Mitocondrial diminui para 60 a 80% dos níveis normais é que a função RC e a capacidade de produção de energia diminuem. Isto significa que em muitos casos 20-40% do número de cópias de ADN Mitocondrial basal é suficiente para produzir as 13 proteínas necessárias para sustentar a capacidade respiratória. Mas este nível de depleção de ADN Mitocondrial parece ocorrer apenas em raras doenças mitocondriais ou em células isoladas em órgãos doentes. O desacoplamento entre o número de cópias de ADN Mitocondrial e a capacidade respiratória pode ser explicado pelo facto de que a regulação positiva da transcrição e tradução a partir de cópias de ADN Mitocondrial pré-existentes pode aumentar os níveis de ácido ribonucleico mensageiro (mRNA), subunidades proteicas, função RC e capacidade de produção de energia, sem uma alteração no número de cópias de ADN Mitocondrial. Isto ocorre notavelmente em resposta ao exercício, onde o conteúdo mitocondrial e a atividade RC no músculo humano aumentam em dias a semanas sem uma alteração no número de cópias de ADN Mitocondrial. Assim, em tecidos humanos, o número de cópias de ADN Mitocondrial não está diretamente acoplado a, e não reflete diretamente, a bioenergética mitocondrial.

Além disso, o quadro é algo complicado, pois enquanto um baixo número de cópias de ADN Mitocondrial no sangue tem sido associado a doenças neurodegenerativas, doenças cardiovasculares e tanto ao desempenho cognitivo como físico no envelhecimento; outras condições como diabetes, depressão maior, alguns cancros e doenças mitocondriais estão associadas a um número de cópias de ADN Mitocondrial elevado. Relativamente à exposição a tóxicos ambientais, o número de cópias de ADN Mitocondrial tem sido associado a um número de cópias de ADN Mitocondrial mais alto ou mais baixo.

No entanto, o valor e a especificidade do número de cópias de ADN Mitocondrial no sangue podem ser aumentados de várias formas, conforme resumido abaixo:

1. Usar dados de hemogramas completos com diferencial, melhorados com métodos de citometria de fluxo que quantificam subpopulações celulares definidas imunologicamente, depois analisar com modelos multivariados (ex., método de deconvolução) para compreender a proporção da variância no número de cópias de ADN Mitocondrial atribuível não apenas a categorias gerais de células imunes (ex., granulócitos e linfócitos) mas a subtipos celulares específicos (células T naive e de memória cluster de diferenciação 4 (CD4) e cluster de diferenciação 8 (CD8), células B, subtipos de monócitos, etc).
2. Melhorar ainda mais a sensibilidade e interpretabilidade do número de cópias de ADN Mitocondrial em relação a fenótipos relacionados com a saúde, quantificando o número de cópias de ADN Mitocondrial diretamente em subtipos de células imunes definidos molecularmente. Por exemplo, células T Naive CD4+, monócitos, ou outros subtipos imunes específicos existem em abundância suficiente na circulação para serem isolados por citometria de fluxo com separação celular (também conhecida como separação celular ativada por fluorescência, FACS) ou por seleção negativa/positiva por separação celular magnética ativada. Comparado com misturas celulares, a quantificação do número de cópias de ADN Mitocondrial específica da célula adiciona especificidade biológica para detetar associações mitocondriais significativas relacionadas com exposições, outros biomarcadores e possivelmente diferenças relacionadas com idade e sexo.
3. Medir outros marcadores de conteúdo e/ou função mitocondrial em paralelo com o número de cópias de ADN Mitocondrial, ex. ensaios vivos da função mitocondrial. Alguns exemplos incluem i) atividade da citrato sintase (CS), cardiolipina, ou abundância de proteínas mitocondriais para estimar o conteúdo mitocondrial; ii) integridade do ADN Mitocondrial, como danos no ADN, mutações pontuais ou deleções; ou iii) capacidade respiratória mitocondrial, como consumo de oxigénio por respirometria, que pode e deve ser realizada em tipos celulares específicos, bem como atividades enzimáticas da cadeia respiratória que refletem a capacidade de produção de energia por célula ou por mitocôndria. No contexto de medições diretas da função da cadeia respiratória, o número de cópias de ADN Mitocondrial torna-se uma característica de saúde mitocondrial mais biologicamente interpretável.
4. Medir marcadores circulantes de stresse mitocondrial acessíveis no plasma ou outros fluidos biológicos, incluindo Growth Differentiation Factor 15 (GDF15), cf ADN Mitocondrial ou outras cinésias mitocondriais emergentes. No entanto, estes podem carecer de especificidade. Ex. GDF15, cf ADN Mitocondrial e outros marcadores circulantes podem ser induzidos por vários stressores que não refletem necessariamente a capacidade RC mitocondrial ou stresse.
5. Existe uma correlação negativa entre o número de cópias de ADN Mitocondrial, o número de mutações no ácido desoxirribonucleico mitocondrial (ADN Mitocondrial) e a longevidade. Taxas mais elevadas de mutações somáticas de ADN Mitocondrial estão consistentemente associadas a fenótipos de envelhecimento, aumento do risco de doenças relacionadas com a idade e redução da esperança de vida tanto em modelos animais como em populações humanas.
6. A sequenciação completa do ADN Mitocondrial (via sequenciação de próxima geração ou sequenciação Sanger) pode identificar polimorfismos de nucleótido único (SNPs), haplogrupos e carga mutacional associados à longevidade. Esta abordagem permite a deteção de SNPs e haplogrupos específicos que têm sido associados a um aumento da esperança de vida.
7. A relação mitocôndria-núcleo (conteúdo de ADN Mitocondrial) em tecidos e fluidos corporais correlaciona-se com o tamanho e número de mitocôndrias. Teste molecular baseado em Polymerase Chain Reaction (PCR) para determinar a relação mitocôndria-núcleo em leucócitos do sangue periférico.

Concluiu-se que, embora a interpretação biológica das diferenças no número de cópias de ADN Mitocondrial seja ténue, em combinação com marcadores relevantes avaliados em populações celulares homogéneas ou bem definidas, continuar a adicionar o número de cópias de ADN Mitocondrial a estudos existentes com conjuntos ricos de resultados provavelmente contribuirá com insights valiosos sobre o papel das mitocôndrias na saúde humana, envelhecimento e resiliência.

Práticas de Mindfulness e Mitocôndrias

Psicologicamente, o mindfulness reduz a reatividade cognitiva e emocional, a ruminação e a preocupação, enquanto aumenta a autoconsciência e aceitação, o que medeia melhorias na saúde mental e facilita comportamentos mais saudáveis. Estas mudanças psicológicas estão intimamente ligadas aos efeitos biológicos observados.

Os mecanismos biológicos pelos quais as práticas de mindfulness melhoram a saúde envolvem a regulação negativa das vias de stresse e inflamatórias, o reforço da função imunitária e alterações neoplásicas que suportam a autorregulação e o coping adaptativo.

As práticas de mindfulness podem contribuir para prolongar a vida humana ao melhorar a função mitocondrial, reduzir o stresse celular e promover respostas adaptativas ao stresse que melhoram a manutenção e resiliência celular. O stresse psicológico crónico acelera a disfunção mitocondrial, aumenta o dano oxidativo e prejudica os mecanismos de reparação celular, todos associados ao envelhecimento e redução da esperança de vida. Intervenções baseadas em mindfulness mostraram mitigar estes efeitos ao reduzir a inflamação e o stresse oxidativo induzidos pelo stresse, apoiando assim a saúde mitocondrial.

As mitocôndrias regulam vias-chave de longevidade através da produção de energia, sinalização redox e comunicação mitocôndria-núcleo. As práticas de mindfulness podem ativar respostas benéficas de stresse mitocondrial, como a hormese mitocondrial, que envolve stresse mitocondrial leve que desencadeia mecanismos adaptativos de reparação e manutenção celular, promovendo em última análise a longevidade em modelos animais e potencialmente em humanos. Estas respostas incluem osteoporose melhorada, aumento da expressão de fatores sobreprotetores e eficiência metabólica melhorada.

Caligrafia chinesa

A caligrafia chinesa é um processo dinâmico de integração da consciência espacial visual, planeamento cognitivo e habilidades motoras que é manobrado com um pincel para seguir configurações definidas de caracteres. Têm havido estudos empíricos crescentes da caligrafia chinesa que resultaram em melhorias na atenção e amplitude visual, aumento da concentração mental, confirmando-a como um tratamento eficaz para condições psicossomáticas e sintomas de hiperexcitação pós-traumática e exibindo efeitos significativos na hipertensão e diabetes tipo 2. Atividades de lazer ocorrendo mais tarde na vida que incluem caligrafia podem inibir o declínio cognitivo.

A Caligrafia Tao é um ramo único da caligrafia chinesa (Yi Bi Zi) na medida em que é caracterizada pela escrita de um único traço. Cada caracter é escrito com um traço contínuo, com o pincel sempre em contacto com o papel. Resultados de estudos confirmaram eficácia no traçado em ambiente de reabilitação pós-aguda, em que os pacientes relataram menos incontinência, duração reduzida do internamento hospitalar e um aumento no bem-estar geral. A análise retrospetiva dos dados exibiu melhoria no bem-estar geral, um aumento no otimismo e nível de energia, bem como melhoria dos seus sintomas. De acordo com um estudo medindo os efeitos da meditação de traçado de caligrafia com canto de mantra (som ou palavra repetida para ajudar na concentração, falada em voz alta ou silenciosamente) de praticantes espirituais, os resultados exibiram melhoria estatisticamente positiva no Funcionamento Físico; Limitações de Papel devido a problemas de saúde física; Limitações de Papel devido a Problemas Pessoais ou Emocionais; Energia/Fadiga; Bem-Estar Emocional; Funcionamento Social; Dor Corporal; Saúde Geral. No estudo de seguimento prospetivo destes sujeitos, após 6 meses continuaram a melhorar no funcionamento nas áreas acima mencionadas. Os autores concluíram que traçar caligrafia e canto de mantra era simples de seguir, bem tolerado e nenhuma complicação surgiu durante o estudo.

Os investigadores já discutiram o valor das meditações de mindfulness com arte Tao para melhorar a depressão, ansiedade, dor, cancro e saúde, comprimento dos Telómeros em Leucócitos e como isto parece contribuir para resultados benéficos relacionados com o bem-estar (score de Qualidade de Vida SF-36).