围绝经期妇女的性激素和动脉粥样硬化预防 (SHAPE2)

内皮功能障碍以减少血管内皮依赖性扩张 (EDD) 为特征，是心血管 (CV) 事件的重要预测因子。 减少的 EDD 的特点是一氧化氮 (NO) 生产的损失。 与男性相比，女性的 EDD 随着年龄的增长而下降的速度较慢，但​​在绝经后迅速下降并迅速赶上男性，这表明雌激素 (E2) 具有有益作用。 我们的研究调查了 E2 的内皮保护机制，包括绝经前后早期的激素波动如何导致内皮功能障碍，以及这些激素变化如何与衰老相互作用。 使用描述良好的实验模型（全身输注抗坏血酸；AA）来急剧减少活性氧（ROS），我们的初步发现表明氧化应激是解释绝经过渡期间 EDD 受损的潜在机制。 具体而言，我们发现晚期围绝经期和绝经后妇女对 AA 的 EDD 有所改善，但围绝经前或早期围绝经期妇女则没有。 这些数据表明，E2 可以在围绝经前和围绝经早期保护脉管系统免受自由基损伤。 为了支持这一概念，我们证明了 AA 可以逆转绝经前和早期围绝经期妇女在短期 E2 缺乏（3 天促性腺激素释放激素拮抗剂；GnRHant）的情况下发生的 EDD 下降。

四氢生物蝶呤 (BH4) 是内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 产生 NO 的关键辅助因子，在水平不足的情况下，eNOS 的解偶联会导致产生 ROS 而不是 NO。 围绝经期和绝经后早期发生的 ROS 增加和 EDD 受损是否与血管 BH4 减少有关目前尚不清楚。 然而，我们发现 AA 不能改善早期围绝经期妇女减少的 EDD 或将围绝经期和绝经后妇女的 EDD 恢复到绝经前水平，这表明 ROS 的其他来源或低 NO 的原因与各个阶段的 EDD 受损有关更年期过渡和女性衰老。 体外研究表明，与单独施用任何一种相比，BH4 和 AA 的共同施用完全阻止了 eNOS 解偶联并减少了用过氧亚硝酸盐 (ONOO-) 供体处理的内皮细胞中的 NO 生成。 此次更新的全球目标是跟进我们之前的研究结果，并确定 BH4 作为内皮功能障碍调解剂的作用 [跨越女性绝经过渡和衰老阶段。 这一全球目标将通过 3 个具体目标 (SA) 来解决。 使用横断面设计，SA1 将测量健康的绝经前、围绝经期和绝经后妇女的 EDD：1) 在基础条件下；和 2) 在 BH4 急剧增加之后。 SA2 将通过短期（10 天）卵巢抑制 (GnRhant) 在绝经前和早期围绝经期妇女中扩展横断面比较，以分离 E2 的年龄无关效应。 SA3 将检查 BH4 和 AA 的共同给药是否能完全恢复围绝经期和绝经后妇女的年轻 EDD。

SA1：确定 BH4 缺乏在围绝经期和绝经后早期内皮功能下降中可能涉及的机制及其与氧化应激的潜在关系。 这将通过比较健康的绝经前、绝经期和绝经后妇女的肱动脉 EDD 和氧化应激和 NO 的血浆和内皮细胞标记物（详见方法）来评估：1）在基础条件下；和 2) 对急性口服 BH4（相对于 PL）补充剂的反应。

假设 1 (H1)：a) EDD 会随着 BH4 的反应在围早期、围晚期和绝经后妇女中增加，但绝经前妇女不会。 b) 响应于 BH4 的 EDD 增加将与血浆氧化应激标志物的减少有关。 c) 围绝经期和绝经后妇女减少的 EDD 将与较低的内皮细胞标记物 NO 和较高的氧化应激相关。

SA2：确定围绝经前和早期围绝经期妇女急性卵巢抑制引起的 EDD 降低是否与 BH4 生物利用度降低和氧化应激标志物升高有关。 这将通过比较急性口服补充 BH4（或 PL）后的 EDD 和血浆氧化应激标志物进行评估，然后急性卵巢抑制有（GnRHant+E2）或没有（GnRHant+PL）E2 加回。 此外，BH4 生物合成和氧化应激标志物的内皮细胞蛋白表达将在抑制/添加范例之前和之后进行测量。

H2：a) 在口服 BH4 (GnRHant+PL+BH4) 治疗组中，急性卵巢抑制后预期的 EDD 减少和血浆氧化应激标志物增加将得到缓解；将 BH4 添加到 E2 加回组中几乎没有或没有影响。 b) 单独抑制卵巢会减少 BH4 生物合成的内皮蛋白标记，并会增加氧化应激的标记。 在使用 E2 回加和口服 BH4 进行卵巢抑制后，将不会观察到这些变化。 这些实验组将提供证据表明，响应于 E2 抑制的 EDD 氧化应激相关降低部分与 BH4 生物利用度降低有关。

SA3：确定 BH4 与 AA 的共同给药是否会完全恢复绝经期和绝经后妇女以及卵巢抑制后早期围绝经期妇女的 EDD。

H3：BH4 与 AA 的共同给药将使 EDD 恢复到绝经前水平 a) 围绝经期和绝经后妇女，和 b) 急性卵巢抑制后的早期围绝经期。