牛奶消费引起的胃肠道不适的生理生物标志物的鉴定 (MIDI)

报告与牛奶和乳制品消费相关的消化系统疾病的个人在世界范围内增加，但在许多情况下，这种情况与乳糖不耐症或酪蛋白过敏的有据可查的诊断无关。 一些研究人员假设这些疾病（在没有任何疾病诊断的情况下）可能是由于牛奶消化过程中形成的某些肽。 进一步的证据支持以下假设：其他因素，例如肠道刷状缘酶缺乏活性、肠道通透性改变和/或特定的肠道微生物群组成，可能与牛奶摄入引起的胃肠道 (GI) 不适有关. 事实上，所有这些因素都可以调节跳过消化和通过肠粘膜的肽和乳糖的数量和类型，从而对胃肠道运动和胃肠道激素分泌产生影响。 同样，由于其对饮食行为的稳态和非稳态调节以及疼痛调节过程的影响，可以假设内源性大麻素系统 (EC) 在牛奶消费后 GI 症状演变中的作用。

在这项研究中，将在非习惯性牛奶消费者 (NHMC) 的健康受试者中探索乳糖和牛奶蛋白的消化率，因为与健康和习惯性牛奶消费者 (HMC) 相比，由于摄入牛奶会引起胃肠道不适。 还将对两组受试者的肠道通透性、肠道菌群组成和心理健康状况进行调查和比较。

在根据招募前问卷和乳糖呼吸测试招募参与者后，研究设计包括肠道通透性测试和牛奶测试。

受试者参与本研究的潜在资格将通过预招募问卷进行评估，收集志愿者的个人和社会人口统计数据、有关牛奶消费习惯和相关症状的信息、有关健康的一般信息（人体测量学、健康状况、吸烟和饮酒习惯）、家庭环境、志愿者对奶制品及其消费的考虑、饮食习惯等信息。

将签署知情同意书的潜在合格受试者将根据罗马共识会议（2009 年）期间批准的方案通过乳糖呼气测试评估最终资格。 胃肠道症状也将由受试者记录，与呼吸样本中的 H2 测量同时进行，并在测试开始后最多 24 小时内通过视觉模拟量表 (VAS) 进行记录。

在乳糖呼气测试期间，受试者将被要求填写身体活动问卷（IPAQ 的简短版本）、生活质量问卷、抑郁、焦虑和压力问卷（DASS）、半定量食物频率问卷（FFQ） )、King's Stool Chart 来评估粪便的频率和稠度，以及三因素饮食问卷 (TFEQ) 来评估个人饮食行为。 体重和身高的人体测量数据也将被测量。

在乳糖呼吸测试期间和之后出现的总体症状将与呼吸样本中测量的 H2 浓度一起进行评估；超过基线 20 ppm 的临界值将用于识别乳糖吸收不良。

此选择程序将确定为合格：

• 呼气试验 (BT-) 呈阴性且没有任何胃肠道症状（乳糖吸收剂）或一些轻微的胃肠道症状的受试者
• 呼气试验 (BT+) 呈阳性但无任何症状的受试者（无症状的乳糖吸收不良者）。

另一方面，如果出现以下情况，受试者将被排除在研究之外：

• 他们呼气试验 (BT+) 呈阳性并报告胃肠道症状（乳糖不耐症）
• 他们呼气试验 (BT-) 呈阴性，但报告有严重的胃肠道症状，例如“呕吐”和“稀便、糊状或水样便”。

2组科目组成如下

• 第 1 组，习惯性牛奶消费者 (HMC)：20 名定期牛奶消费者（>700 毫升/周）、摄入牛奶后没有出现胃肠道不适并且乳糖耐受或乳糖吸收不良的受试者。
• 第 2 组，非习惯性牛奶消费者 (NHMC)：20 名不经常牛奶消费者（< 150 毫升/周）的受试者，因为摄入牛奶后出现胃肠道不适并且存在乳糖耐受性或乳糖吸收不良。

将对来自两组的所有受试者进行肠通透性测试和牛奶测试。 这些测试将安排在乳糖呼气测试一周后，中间间隔一周。 还将要求受试者在通常的饮食习惯下收集粪便样本。

对于肠道渗透性测试，受试者将收到有关药物消耗的说明，并被要求在测试前 2 天控制饮食（避免牛奶和乳制品以及含有多元醇的食品）。

禁食受试者将收集基线尿液样本，然后饮用含有 5 g 乳果糖、2 g 甘露醇和 2 g 三氯蔗糖的 100 ml 水中的溶液。 将在 0-5 小时和 5-24 小时的时间段内将尿液收集在两个容器中，这些容器添加了 1 mL 的 1 ppm 氯己定溶液。 在 24 小时内收集并在次日送至研究中心的尿液样本将被等分（1.5 毫升）并冷冻在 -20°C 直至分析。

在牛奶测试前一周，受试者将填写食物日记。 此外，他们将被指示在牛奶测试前的 2 天内不要饮用任何牛奶、乳制品和任何含有牛奶蛋白的食品。 牛奶测试当天，禁食受试者将填写有关其实际食欲和胃肠道症状的问卷，收集基线尿液和血液样本，并通过手指采血测量空腹血糖。 随后，受试者将在 10 分钟内饮用 250 毫升牛奶，然后在特定时间点收集血糖、症状和食欲问卷，以及血液样本和尿液。 在最后一次抽血后，受试者将享用午餐，在离开研究中心之前，他们将被指导填写胃肠道症状和食欲问卷、收集尿液、填写食物日记并食用固定的晚餐。 问卷、日记和6-24小时尿液样本将在次日送至实验室。

储存在 -40°C 的血液样本将用于分析：

• 用抑肽酶预处理的血浆样品中的胃肠激素（胰岛素、胃抑制肽 (GIP)、胰高血糖素样肽 1 (GLP-1)、胰高血糖素、c 肽、生长素释放肽、瘦素）；
• 内源性大麻素和 N-酰基乙醇胺 (EC)；
• 酪蛋白消化衍生肽（β-酪啡肽和所有已知的乳蛋白衍生肽）；
• 氨基酸概况；
• DPPIV 活动；
• 基线 DPPIV 浓度。

等分（1.5 毫升）并在 -40°C 下冷冻的尿液样本将用于测量：

• 乳糖、半乳糖 + 葡萄糖和尿糖排泄水平（针对牛奶测试后 24 小时内收集的尿液）。
• 乳果糖、甘露醇和三氯蔗糖排泄水平（肠道通透性测试后 24 小时内收集的尿液）。

根据国际人类微生物组联盟 (http://www.human-microbiome.org/) 的标准操作程序，将粪便样本储存在 -40°C 下用于 DNA 提取。 将通过最合适的方法进行统计分析，以推断特定微生物群特征与临床、饮食和代谢组学参数之间的关联。