Identification de biomarqueurs physiologiques des inconforts gastro-intestinaux induits par la consommation de lait (MIDI)

Les personnes signalant des troubles digestifs associés à la consommation de lait et de produits laitiers augmentent dans le monde, mais dans de nombreux cas, cette affection n'est pas associée à un diagnostic bien documenté d'intolérance au lactose ou d'allergie à la caséine. Certains chercheurs émettent l'hypothèse que ces troubles (en l'absence de tout diagnostic de maladie) pourraient être dus à la formation de certains peptides lors de la digestion du lait. D'autres preuves soutiennent l'hypothèse selon laquelle d'autres facteurs, tels qu'un manque d'activité des enzymes de la bordure en brosse intestinale, une perméabilité intestinale altérée et/ou une composition spécifique du microbiote intestinal, peuvent être impliqués dans l'apparition d'inconforts gastro-intestinaux (GI) induits par la consommation de lait. . En effet, tous ces facteurs pourraient moduler la quantité et le type de peptides et de lactose sautant la digestion et traversant la muqueuse intestinale, entraînant des effets sur la motilité gastro-intestinale et la sécrétion hormonale gastro-intestinale. De même, en raison de ses implications dans la régulation homéostatique et non homéostatique du comportement alimentaire ainsi que dans les processus de régulation de la douleur, un rôle du système endocannabinoïde (CE) dans l'évolution des symptômes gastro-intestinaux après la consommation de lait pourrait être supposé.

Dans cette étude, la digestibilité du lactose et des protéines du lait sera explorée chez des sujets sains consommateurs de lait non habituels (NHMC) en raison d'inconforts gastro-intestinaux induits par l'ingestion de lait, en comparaison avec des consommateurs de lait sains et habituels (HMC). La perméabilité intestinale, la composition du microbiote intestinal et l'état de bien-être psychologique des sujets seront également étudiés et comparés dans les 2 groupes.

La conception de l'étude, après le recrutement des participants sur la base de questionnaires de pré-recrutement et d'un test respiratoire au lactose, comprend un test de perméabilité intestinale et un test de lait.

L'éligibilité potentielle des sujets à participer à cette étude sera évaluée à travers des questionnaires de pré-recrutement, recueillant des données personnelles et socio-démographiques des volontaires, des informations sur les habitudes de consommation de lait et les symptômes associés, des informations générales sur la santé (anthropométrie, état de santé, tabagisme et habitudes de consommation d'alcool), l'environnement du ménage, des informations sur la considération des volontaires à l'égard du produit laitier et de sa consommation, et les habitudes alimentaires.

Les sujets éligibles potentiels qui signeront le formulaire de consentement éclairé seront évalués pour l'éligibilité finale au moyen d'un test respiratoire au lactose, effectué selon le protocole approuvé lors de la conférence de consensus de Rome (2009). Les symptômes gastro-intestinaux seront également enregistrés par les sujets, parallèlement aux mesures de H2 dans les échantillons d'haleine et jusqu'à 24 heures après le début du test, au moyen d'échelles visuelles analogiques (EVA).

Lors du test respiratoire au lactose, les sujets seront invités à remplir le questionnaire d'activité physique (version courte de l'IPAQ), des questionnaires sur la qualité de vie, sur la dépression, l'anxiété et le stress (DASS), un questionnaire semi-quantitatif de fréquence alimentaire (FFQ ), le King's Stool Chart, pour évaluer la fréquence et la consistance des matières fécales, et le Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ) pour évaluer le comportement alimentaire individuel. Les données anthropométriques de poids et de taille seront également mesurées.

Les symptômes globaux évolués pendant et après le test respiratoire au lactose seront évalués ainsi que les concentrations de H2 mesurées dans les échantillons d'haleine ; une valeur seuil de 20 ppm au-dessus de la ligne de base sera utilisée pour identifier les malabsorbeurs de lactose.

Cette procédure de sélection identifiera comme éligibles :

• les sujets qui sont négatifs au test respiratoire (BT-) et qui ne signalent aucun symptôme gastro-intestinal (absorbeur de lactose) ou qui signalent certains symptômes gastro-intestinaux mineurs
• sujets positifs au test respiratoire (BT+) mais sans aucun symptôme (malabsorbeurs de lactose sans symptômes).

En revanche, les sujets seront exclus de l'étude si :

• ils sont positifs au test respiratoire (BT+) et signalent des symptômes gastro-intestinaux (intolérance au lactose)
• ils sont négatifs au test respiratoire (BT-) mais signalent des symptômes gastro-intestinaux graves tels que « vomissements » et « selles molles, pâteuses ou aqueuses ».

L'inscription sera conclue lorsque 2 groupes de matières seront constitués comme suit

• Groupe 1, consommateurs habituels de lait (CHM) : 20 sujets qui consomment régulièrement du lait (>700 ml/semaine), ne ressentent pas d'inconfort gastro-intestinal après la prise de lait et sont tolérants au lactose ou malabsorbent le lactose.
• Groupe 2, consommateurs non habituels de lait (NHMC) : 20 sujets non consommateurs réguliers de lait (< 150 mL/semaine), en raison d'inconforts gastro-intestinaux après prise de lait et tolérants au lactose ou malabsorbants de lactose.

Pour tous les sujets des deux groupes, le test de perméabilité intestinale et le test du lait seront effectués. Ces tests seront programmés après une semaine à partir du test respiratoire au lactose et avec une semaine entre les deux. Les sujets seront également invités à prélever un échantillon fécal dans le cadre d'habitudes alimentaires habituelles.

Pour le test de perméabilité intestinale, les sujets recevront des instructions sur la consommation de médicaments et seront invités à suivre un régime contrôlé pendant 2 jours avant le test (en évitant le lait et les produits laitiers et les produits alimentaires contenant des polyols).

Les sujets à jeun prélèveront un échantillon d'urine de base, avant de boire une solution contenant 5 g de lactulose, 2 g de mannitol et 2 g de sucralose dans 100 ml d'eau. Les urines seront recueillies pendant des périodes de temps 0-5 h et 5-24 h dans deux récipients additionnés de 1 mL d'une solution de chlorhexidine à 1 ppm. Les échantillons d'urine prélevés sur 24h et livrés le lendemain au centre d'étude seront aliquotés (1,5 ml) et congelés à -20°C jusqu'aux analyses.

Au cours de la semaine précédant le test de lait, les sujets rempliront un journal alimentaire. De plus, il leur sera demandé de ne pas boire de lait, de produit laitier et de tout produit alimentaire contenant des protéines de lait pendant les 2 jours précédant le test de lait. Le jour du test de lait, les sujets à jeun rempliront des questionnaires sur leur appétit réel et leurs symptômes gastro-intestinaux, des échantillons d'urine et de sang de base seront prélevés et la glycémie à jeun par piqûre au doigt sera mesurée. Par la suite, les sujets boiront 250 ml de lait en 10 minutes et par la suite, des questionnaires sur la glycémie, les symptômes et l'appétit, ainsi que des échantillons de sang et d'urine seront collectés à des moments précis. Après la dernière prise de sang, les sujets se verront offrir un déjeuner et, avant de quitter le centre d'étude, il leur sera demandé de remplir des questionnaires sur les symptômes gastro-intestinaux et l'appétit, de collecter l'urine, de remplir un journal alimentaire et de consommer un dîner fixe. Les questionnaires, agendas et échantillons d'urine 6-24h seront livrés au laboratoire le lendemain.

Des échantillons de sang, conservés à -40°C seront analysés pour :

• hormones gastro-intestinales (insuline, peptide inhibiteur gastrique (GIP), peptide 1 de type glucagon (GLP-1), glucagon, peptide C, ghréline, leptine) dans des échantillons de plasma prétraités à l'aprotinine ;
• endocannabinoïdes et N-acyl-éthanolamines (EC);
• les peptides dérivés de la digestion de la caséine (bêta-casomorphines et tous les peptides connus dérivés des protéines du lait) ;
• profil d'acides aminés ;
• activité DPPIV ;
• concentration initiale de DPPIV.

Des échantillons d'urine, aliquotés (1,5 ml) et congelés à -40°C, seront utilisés pour mesurer :

• niveaux d'excrétion de lactose, de galactose + glucose et d'indican (pour les urines recueillies plus de 24 h après le test du lait).
• niveaux d'excrétion de lactulose, de mannitol et de sucralose (pour les urines recueillies plus de 24 h après le test de perméabilité intestinale).

Des échantillons fécaux, conservés à -40°C, seront utilisés pour l'extraction d'ADN selon les procédures opératoires standard de l'International Human Microbiome Consortium (http://www.human-microbiome.org/). L'analyse statistique sera effectuée par les méthodes les plus appropriées afin d'inférer les associations entre les signatures spécifiques du microbiote et les paramètres cliniques, alimentaires et métabolomiques.