Identifikace fyziologických biomarkerů gastrointestinálních potíží vyvolaných konzumací mléka (MIDI)

Jednotlivci uvádějící poruchy trávení spojené s konzumací mléka a mléčných výrobků celosvětově rostou, ale v mnoha případech tento stav není spojen s dobře zdokumentovanou diagnózou intolerance laktózy nebo alergie na kasein. Někteří výzkumníci předpokládají, že tyto poruchy (při absenci jakékoli diagnózy onemocnění) mohou být způsobeny určitými peptidy, které se tvoří během trávení mléka. Další důkazy podporují hypotézu, že další faktory, jako je nedostatečná aktivita enzymů střevního kartáčkového lemu, změněná propustnost střeva a/nebo specifické složení střevní mikroflóry, se mohou podílet na nástupu gastrointestinálních (GI) nepohodlí vyvolaných konzumací mléka. . Všechny tyto faktory by skutečně mohly modulovat množství a typ peptidů a laktózy, které by vynechávaly trávení a procházely střevní sliznicí, což vedlo k účinkům na motilitu GI a sekreci hormonů v gastrointestinálním traktu. Podobně, vzhledem k jeho důsledkům v homeostatické a nehomeostatické regulaci stravovacího chování, stejně jako v procesech regulace bolesti, lze předpokládat roli endokanabinoidního systému (EC) ve vývoji GI symptomů po konzumaci mléka.

V této studii bude zkoumána stravitelnost laktózy a mléčných bílkovin u zdravých jedinců, kteří jsou neobvyklí konzumenti mléka (NHMC) kvůli gastrointestinálním potížím vyvolaným požitím mléka, ve srovnání se zdravými a obvyklými konzumenty mléka (HMC). Ve 2 skupinách bude také zkoumána a srovnávána střevní propustnost, složení střevní mikrobioty a stav psychické pohody subjektů.

Návrh studie po zařazení účastníků na základě přednáborových dotazníků a laktózového dechového testu zahrnuje test propustnosti střev a test mléka.

Potenciální způsobilost subjektů k účasti v této studii bude posouzena prostřednictvím přednáborových dotazníků, sběru osobních a sociodemografických údajů dobrovolníků, informací o návycích konzumace mléka a souvisejících symptomů, obecných informací o zdraví (antropometrie, zdravotní stav, kouření a návyky konzumace alkoholu), prostředí domácnosti, informace o tom, jak dobrovolník zvažuje mléčný výrobek a jeho konzumaci, a stravovací návyky.

Potenciální způsobilé subjekty, které podepíší formulář informovaného souhlasu, budou posouzeny z hlediska konečné způsobilosti pomocí laktózového dechového testu, provedeného podle protokolu schváleného během Římské konsensuální konference (2009). GI symptomy budou subjekty také zaznamenávány souběžně s měřením H2 ve vzorcích dechu a to až do 24 hodin od začátku testu pomocí vizuálních analogových vah (VAS).

Během laktózového dechového testu budou subjekty požádány, aby vyplnily dotazník o fyzické aktivitě (zkrácená verze IPAQ), dotazníky o kvalitě života, o depresi, úzkosti a stresu (DASS), semikvantitativní dotazník o frekvenci jídla (FFQ). ), King's Stool Chart, pro hodnocení frekvence a konzistence stolice, a Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ) pro hodnocení individuálního stravovacího chování. Rovněž budou měřeny antropometrické údaje o hmotnosti a výšce.

Celkové symptomy vzniklé během a po laktózovém dechovém testu budou hodnoceny společně s koncentracemi H2 naměřenými ve vzorcích dechu; mezní hodnota 20 ppm nad základní linií bude použita k identifikaci malabsorbérů laktózy.

Toto výběrové řízení určí jako způsobilé:

• subjekty, které jsou negativní na dechový test (BT-) a nevykazují žádné GI symptomy (absorbér laktózy) nebo vykazují některé menší gastrointestinální příznaky
• subjekty, které jsou pozitivní na dechový test (BT+), ale bez jakýchkoli příznaků (malabsorbéry laktózy bez příznaků).

Na druhou stranu, subjekty budou ze studie vyloučeny, pokud:

• jsou pozitivní na dechový test (BT+) a hlásí GI příznaky (nesnášenlivost laktózy)
• jsou negativní na dechový test (BT-), ale hlásí závažné GI příznaky, jako je „zvracení“ a „řídká, kašovitá nebo vodnatá stolice“.

Zápis bude ukončen, když se sestaví 2 skupiny předmětů následovně

• Skupina 1, obvyklí konzumenti mléka (HMC): 20 subjektů, které jsou pravidelnými konzumenty mléka (>700 ml/týden), nepociťují po příjmu mléka zažívací potíže a jsou tolerantní k laktóze nebo mají laktózu malabsorbující.
• Skupina 2, neobvyklí konzumenti mléka (NHMC): 20 subjektů, které nejsou pravidelnými konzumenty mléka (< 150 ml/týden), kvůli gastrointestinálním potížím po příjmu mléka a jsou tolerantní k laktóze nebo mají laktózu malabsorbující.

U všech subjektů z obou skupin bude proveden test střevní propustnosti a test mléka. Tyto testy budou naplánovány po jednom týdnu od laktózového dechového testu a jeden týden mezi nimi. Subjekty budou také požádány, aby odebraly vzorek stolice podle obvyklých stravovacích návyků.

U testu propustnosti střeva dostanou subjekty instrukce o konzumaci léků a budou požádány, aby 2 dny před testem dodržovaly kontrolovanou dietu (vyhýbání se mléku a mléčným výrobkům a potravinářským výrobkům obsahujícím polyoly).

Subjekty nalačno odeberou základní vzorek moči a poté vypijí roztok obsahující 5 g laktulózy, 2 g mannitolu a 2 g sukralózy ve 100 ml vody. Moč bude shromažďována po dobu 0-5 hodin a 5-24 hodin ve dvou nádobách, do kterých se přidá 1 ml roztoku chlorhexidinu v koncentraci 1 ppm. Vzorky moči odebrané během 24 hodin a dodané den poté do centra studie budou rozděleny na alikvoty (1,5 ml) a zmraženy při -20 °C až do analýzy.

Během týdne před mléčným testem budou subjekty plnit deník potravin. Kromě toho budou poučeni, aby během 2 dnů před testem mléka nepili žádné mléko, mléčné výrobky a žádné potraviny obsahující mléčné bílkoviny. V den testu mléka vyplní subjekty nalačno dotazníky o své skutečné chuti k jídlu a GI symptomech, odeberou se základní vzorky moči a krve a změří se glykémie nalačno píchnutím do prstu. Následně subjekty vypijí 250 ml mléka během 10 minut a poté budou v určitých časových bodech odebírány dotazníky o glykémii, symptomech a chuti k jídlu, jakož i vzorky krve a moči. Po posledním odběru krve bude subjektům nabídnut oběd a před opuštěním studijního centra budou instruováni, aby vyplnili GI symptomy a dotazníky k chuti k jídlu, odebírali moč, vyplnili jídelní deník a konzumovali pevnou večeři. Dotazníky, deníky a 6-24h vzorky moči budou doručeny do laboratoře následující den.

Vzorky krve skladované při -40 °C budou analyzovány na:

• gastrointestinální hormony (inzulín, žaludeční inhibiční peptid (GIP), glukagonu podobný peptid 1 (GLP-1), glukagon, c-peptid, ghrelin, leptin) ve vzorcích plazmy předem ošetřených aprotininem;
• endokanabinoidy a N-acyl-ethanolaminy (EC);
• peptidy odvozené od kaseinového štěpení (beta-kasomorfiny a všechny známé peptidy odvozené z mléčných proteinů);
• aminokyselinový profil;
• aktivita DPPIV;
• základní koncentrace DPPIV.

Vzorky moči, rozdělené na alikvoty (1,5 ml) a zmrazené na -40 °C, budou použity k měření:

• laktóza, galaktóza + glukóza a indikované hladiny vylučování (pro moči odebrané během 24 hodin po testu mléka).
• hladiny vylučování laktulózy, mannitolu a sukralózy (pro moči odebrané během 24 hodin po testu propustnosti střeva).

Vzorky stolice skladované při -40 °C budou použity pro extrakci DNA podle standardních pracovních postupů International Human Microbiome Consortium (http://www.human-microbiome.org/). Statistická analýza bude provedena nejvhodnějšími metodami, aby bylo možné odvodit souvislosti mezi specifickými znaky mikroflóry a klinickými, dietními a metabolomickými parametry.