Identificación de biomarcadores fisiológicos de molestias gastrointestinales inducidas por el consumo de leche (MIDI)

Los individuos que reportan trastornos digestivos asociados al consumo de leche y productos lácteos aumentan a nivel mundial, pero en muchos casos esta condición no está asociada con un diagnóstico bien documentado de intolerancia a la lactosa o alergia a la caseína. Algunos investigadores plantean la hipótesis de que estos trastornos (en ausencia de un diagnóstico de enfermedad) pueden deberse a la formación de ciertos péptidos durante la digestión de la leche. Evidencia adicional respalda la hipótesis de que otros factores, como la falta de actividad de las enzimas del borde en cepillo intestinal, una permeabilidad intestinal alterada y/o una composición específica de la microbiota intestinal, pueden estar involucrados en la aparición de molestias gastrointestinales (GI) inducidas por el consumo de leche. . De hecho, todos estos factores podrían modular la cantidad y el tipo de péptidos y lactosa que saltan la digestión y pasan a través de la mucosa intestinal, lo que tiene efectos sobre la motilidad gastrointestinal y la secreción de hormonas gastrointestinales. Del mismo modo, debido a sus implicaciones en la regulación homeostática y no homeostática de la conducta alimentaria, así como en los procesos de regulación del dolor, se podría plantear la hipótesis de un papel del sistema endocannabinoide (EC) en la evolución de los síntomas gastrointestinales posteriores al consumo de leche.

En este estudio se explorará la digestibilidad de la lactosa y las proteínas de la leche en sujetos sanos consumidores no habituales de leche (NHMC) por molestias gastrointestinales inducidas por la ingesta de leche, en comparación con consumidores sanos y habituales de leche (HMC). La permeabilidad intestinal, la composición de la microbiota intestinal y el estado de bienestar psicológico de los sujetos también se investigarán y compararán en los 2 grupos.

El diseño del estudio, después de la inscripción de los participantes en base a cuestionarios previos al reclutamiento y una prueba de aliento con lactosa, incluye una prueba de permeabilidad intestinal y una prueba de leche.

La elegibilidad potencial de los sujetos para participar en este estudio se evaluará a través de cuestionarios previos al reclutamiento, recogiendo datos personales y sociodemográficos de los voluntarios, información sobre hábitos de consumo de leche y síntomas asociados, información general sobre salud (antropometría, estado de salud, tabaquismo y hábitos de consumo de alcohol), entorno familiar, información sobre la consideración del voluntario sobre el producto lácteo y su consumo, y hábitos alimentarios.

Los sujetos potencialmente elegibles que firmarán el formulario de consentimiento informado serán evaluados para la elegibilidad final mediante una prueba de aliento con lactosa, realizada de acuerdo con el protocolo aprobado durante la Conferencia de Consenso de Roma (2009). Los síntomas GI también serán registrados por los sujetos, en paralelo con las mediciones de H2 en muestras de aliento y hasta 24 horas desde el inicio de la prueba, mediante Escalas Analógicas Visuales (EVA).

Durante la prueba de aliento con lactosa, se les pedirá a los sujetos que completen el cuestionario de actividad física (versión corta del IPAQ), cuestionarios sobre calidad de vida, sobre depresión, ansiedad y estrés (DASS), un cuestionario semicuantitativo de frecuencia de alimentos (FFQ ), el King's Stool Chart, para evaluar la frecuencia y consistencia de las heces, y el Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ) para evaluar el comportamiento alimentario individual. También se medirán datos antropométricos de peso y talla.

Los síntomas generales desarrollados durante y después de la prueba de aliento con lactosa se evaluarán junto con las concentraciones de H2 medidas en las muestras de aliento; se usará un valor de corte de 20 ppm sobre la línea de base para identificar a los que tienen malabsorción de lactosa.

Este procedimiento de selección identificará como elegibles:

• sujetos que son negativos a la prueba de aliento (BT-) y no refieren ningún síntoma GI (absorbedor de lactosa) o refieren algunos síntomas gastrointestinales menores
• sujetos que dan positivo en la prueba del aliento (BT+) pero sin ningún síntoma (malabsortores de lactosa sin síntomas).

Por otro lado, los sujetos serán excluidos del estudio si:

• son positivos a la prueba de aliento (BT+) y reportan síntomas GI (intolerantes a la lactosa)
• son negativos a la prueba de aliento (BT-) pero informan síntomas gastrointestinales graves como "vómitos" y "heces sueltas, blandas o acuosas".

La inscripción se dará por concluida cuando se constituyan 2 grupos de sujetos de la siguiente forma

• Grupo 1, consumidores habituales de leche (HMC): 20 sujetos que son consumidores regulares de leche (> 700 ml / semana), no experimentan molestias gastrointestinales después de la ingesta de leche y son tolerantes a la lactosa o malabsordores de lactosa.
• Grupo 2, consumidores no habituales de leche (NHMC): 20 sujetos que no son consumidores regulares de leche (< 150 ml/semana), debido a molestias gastrointestinales después de la ingesta de leche y son tolerantes a la lactosa o malabsordores de lactosa.

A todos los sujetos de ambos grupos se les realizará la prueba de permeabilidad intestinal y la prueba de la leche. Estas pruebas se programarán después de una semana de la prueba de aliento con lactosa y con una semana de diferencia. También se les pedirá a los sujetos que recolecten una muestra fecal bajo los hábitos dietéticos habituales.

Para la prueba de permeabilidad intestinal, los sujetos recibirán instrucciones sobre el consumo de drogas y se les pedirá que sigan una dieta controlada durante 2 días antes de la prueba (evitando la leche y los productos lácteos y los productos alimenticios que contengan polioles).

Los sujetos en ayunas recogerán una muestra de orina de referencia, antes de beber una solución que contiene 5 g de lactulosa, 2 g de manitol y 2 g de sucralosa en 100 ml de agua. Se recogerán orinas por periodos de tiempo de 0-5 hy 5-24 h en dos recipientes a los que se les añade 1 mL de una solución de clorhexidina a 1 ppm. Las muestras de orina recogidas durante 24 h y entregadas al día siguiente al centro de estudio se dividirán en alícuotas (1,5 ml) y se congelarán a -20 °C hasta su análisis.

Durante la semana anterior a la prueba de leche, los sujetos llenarán un diario de alimentos. Además, se les indicará que no beban leche, productos lácteos ni productos alimenticios que contengan proteínas de leche durante los 2 días anteriores a la prueba de leche. El día de la prueba de leche, los sujetos en ayunas completarán cuestionarios sobre su apetito real y síntomas gastrointestinales, se recolectarán muestras de orina y sangre de referencia y se medirá la glucemia en ayunas mediante un pinchazo en el dedo. Posteriormente, los sujetos beberán 250 ml de leche en 10 minutos y, posteriormente, se recogerán cuestionarios de glucemia, síntomas y apetito, así como muestras de sangre y orina en puntos de tiempo específicos. Después de la última extracción de sangre, a los sujetos se les ofrecerá un almuerzo y, antes de abandonar el centro de estudio, se les indicará que completen los síntomas gastrointestinales y los cuestionarios de apetito, recolecten orina, completen un diario de alimentos y consuman una cena fija. Los cuestionarios, diarios y muestras de orina de 6-24h se entregarán al laboratorio al día siguiente.

Las muestras de sangre almacenadas a -40 °C se analizarán para:

• hormonas gastrointestinales (insulina, péptido inhibidor gástrico (GIP), péptido similar al glucagón 1 (GLP-1), glucagón, péptido c, grelina, leptina) en muestras de plasma pretratadas con aprotinina;
• endocannabinoides y N-acil-etanolaminas (EC);
• péptidos derivados de la digestión de caseína (beta-casomorfinas y todos los péptidos conocidos derivados de proteínas de la leche);
• perfil de aminoácidos;
• actividad DPPIV;
• concentración inicial de DPPIV.

Las muestras de orina, en alícuotas (1,5 ml) y congeladas a -40°C, se utilizarán para medir:

• lactosa, galactosa + glucosa e indican los niveles de excreción (para orinas recolectadas más de 24 h después de la prueba de leche).
• niveles de excreción de lactulosa, manitol y sucralosa (para orinas recolectadas durante 24 h después de la prueba de permeabilidad intestinal).

Las muestras fecales, almacenadas a -40 °C, se utilizarán para la extracción de ADN de acuerdo con los procedimientos operativos estándar del International Human Microbiome Consortium (http://www.human-microbiome.org/). El análisis estadístico se llevará a cabo mediante los métodos más apropiados para inferir las asociaciones entre firmas de microbiota específicas y parámetros clínicos, dietéticos y metabolómicos.