Identificação de Biomarcadores Fisiológicos de Desconfortos Gastrointestinais Induzidos pelo Consumo de Leite (MIDI)

Indivíduos relatando distúrbios digestivos associados ao consumo de leite e produtos lácteos aumentam em todo o mundo, mas em muitos casos essa condição não está associada a um diagnóstico bem documentado de intolerância à lactose ou alergia à caseína. Alguns pesquisadores levantam a hipótese de que esses distúrbios (na ausência de qualquer diagnóstico de doença) podem ser devidos à formação de certos peptídeos durante a digestão do leite. Evidências adicionais apoiam a hipótese de que outros fatores, como a falta de atividade das enzimas da borda em escova intestinal, uma permeabilidade intestinal alterada e/ou uma composição específica da microbiota intestinal, podem estar envolvidos no aparecimento de desconfortos gastrointestinais (GI) induzidos pelo consumo de leite . De fato, todos esses fatores podem modular a quantidade e o tipo de peptídeos e lactose, ignorando a digestão e passando pela mucosa intestinal, levando a efeitos na motilidade gastrointestinal e na secreção de hormônios gastrointestinais. Da mesma forma, devido às suas implicações na regulação homeostática e não homeostática do comportamento alimentar, bem como nos processos de regulação da dor, pode-se supor um papel do sistema endocanabinóide (CEs) na evolução dos sintomas gastrointestinais pós-consumo de leite.

Neste estudo, a digestibilidade da lactose e das proteínas do leite será explorada em indivíduos saudáveis ​​que são consumidores não habituais de leite (NHMC) devido a desconfortos gastrointestinais induzidos pela ingestão de leite, em comparação com consumidores saudáveis ​​e habituais de leite (HMC). A permeabilidade intestinal, a composição da microbiota intestinal e o estado de bem-estar psicológico dos indivíduos também serão investigados e comparados nos 2 grupos.

O desenho do estudo, após a inscrição dos participantes com base em questionários de pré-recrutamento e um teste respiratório de lactose, inclui um teste de permeabilidade intestinal e um teste de leite.

A potencial elegibilidade dos sujeitos para participar deste estudo será avaliada por meio de questionários pré-recrutamento, coletando dados pessoais e sociodemográficos dos voluntários, informações sobre hábitos de consumo de leite e sintomas associados, informações gerais sobre saúde (antropometria, estado de saúde, tabagismo e hábitos de consumo de álcool), ambiente doméstico, informações sobre a consideração do voluntário sobre produtos lácteos e seu consumo e hábitos alimentares.

Os potenciais indivíduos elegíveis que assinarão o termo de consentimento informado serão avaliados para elegibilidade final por meio de um teste respiratório da lactose, realizado de acordo com o protocolo aprovado durante a Conferência de Consenso de Roma (2009). Os sintomas gastrointestinais também serão registrados pelos sujeitos, paralelamente às medidas de H2 em amostras respiratórias e até 24 horas do início do teste, por meio de Escalas Analógicas Visuais (EVA).

Durante o teste respiratório da lactose, os sujeitos serão solicitados a preencher o questionário de atividade física (versão curta do IPAQ), questionários de qualidade de vida, de depressão, ansiedade e estresse (DASS), questionário semiquantitativo de frequência alimentar (FFQ ), o King's Stool Chart, para avaliar a frequência e a consistência das fezes, e o Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ), para avaliar o comportamento alimentar individual. Também serão aferidos dados antropométricos de peso e altura.

Os sintomas gerais desenvolvidos durante e após o teste respiratório da lactose serão avaliados juntamente com as concentrações de H2 medidas em amostras respiratórias; um valor de corte de 20 ppm acima da linha de base será usado para identificar os malabsorventes de lactose.

Este procedimento de seleção identificará como elegíveis:

• indivíduos que são negativos ao teste respiratório (BT-) e não referem qualquer sintoma gastrointestinal (absorvente de lactose) ou referem alguns sintomas gastrointestinais menores
• indivíduos com teste respiratório positivo (BT+) mas sem qualquer sintoma (má absorção de lactose sem sintomas).

Por outro lado, os indivíduos serão excluídos do estudo se:

• são positivos ao teste respiratório (BT+) e relatam sintomas gastrointestinais (intolerantes à lactose)
• eles são negativos no teste respiratório (BT-), mas relatam sintomas gastrointestinais graves, como "vômitos" e "fezes soltas, pastosas ou aquosas".

A inscrição será concluída quando 2 grupos de disciplinas forem constituídos da seguinte forma

• Grupo 1, consumidores habituais de leite (HMC): 20 indivíduos que são consumidores regulares de leite (>700 mL/semana), não apresentam desconforto gastrointestinal após a ingestão de leite e são tolerantes ou mal-absorventes à lactose.
• Grupo 2, consumidores não habituais de leite (NHMC): 20 indivíduos que não são consumidores regulares de leite (< 150 mL/semana), devido a desconfortos gastrointestinais após a ingestão de leite e são tolerantes ou mal-absorventes à lactose.

Para todos os sujeitos de ambos os grupos será realizado o teste de permeabilidade intestinal e o teste do leite. Esses testes serão agendados uma semana após o teste respiratório da lactose e com uma semana de intervalo. Os indivíduos também serão solicitados a coletar uma amostra fecal sob hábitos alimentares habituais.

Para o teste de permeabilidade intestinal, os indivíduos receberão instruções sobre o consumo de drogas e serão solicitados a seguir uma dieta controlada por 2 dias antes do teste (evitando leite e derivados e alimentos que contenham polióis).

Indivíduos em jejum irão coletar uma amostra de urina basal, antes de beber uma solução contendo 5 g de lactulose, 2 g de manitol e 2 g de sucralose em 100 ml de água. As urinas serão coletadas nos períodos de 0-5 h e 5-24 h em dois recipientes adicionados de 1 mL de solução de clorexidina a 1 ppm. As amostras de urina coletadas ao longo de 24 horas e entregues no dia seguinte ao centro de estudo serão aliquotadas (1,5 ml) e congeladas a -20°C até as análises.

Durante a semana anterior ao teste do leite, os participantes preencherão um diário alimentar. Além disso, eles serão instruídos a não beber leite, laticínios e qualquer produto alimentar que contenha proteínas do leite durante os 2 dias anteriores ao teste do leite. No dia do teste do leite, os indivíduos em jejum preencherão questionários sobre seu apetite real e sintomas gastrointestinais, amostras de urina e sangue serão coletadas e a glicemia de jejum por picada no dedo será medida. Posteriormente, os indivíduos beberão 250 ml de leite em 10 minutos e, posteriormente, glicemia, sintomas e questionários de apetite, bem como amostras de sangue e urina serão coletados em momentos específicos. Após a última coleta de sangue, será oferecido um almoço aos participantes e, antes de deixar o centro de estudo, eles serão instruídos a preencher questionários de sintomas gastrointestinais e de apetite, coletar urina, preencher um diário alimentar e consumir um jantar fixo. Questionários, diários e amostras de urina de 6-24h serão entregues no laboratório no dia seguinte.

As amostras de sangue armazenadas a -40°C serão analisadas quanto a:

• hormônios gastrointestinais (insulina, peptídeo inibidor gástrico (GIP), peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1), glucagon, c-peptídeo, grelina, leptina) em amostras de plasma pré-tratadas com aprotinina;
• endocanabinóides e N-acil-etanolaminas (ECs);
• peptídeos derivados da digestão de caseína (beta-casomorfinas e todos os peptídeos conhecidos derivados de proteínas do leite);
• perfil de aminoácidos;
• atividade DPPIV;
• concentração basal de DPPIV.

Amostras de urina, aliquotadas (1,5 ml) e congeladas a -40°C, serão usadas para medir:

• níveis de excreção de lactose, galactose + glicose e indican (para urinas coletadas mais de 24 h após o teste do leite).
• níveis de excreção de lactulose, manitol e sucralose (para urinas coletadas mais de 24 h após o teste de permeabilidade intestinal).

Amostras fecais, armazenadas a -40°C, serão utilizadas para extração de DNA de acordo com os procedimentos operacionais padrão do International Human Microbiome Consortium (http://www.human-microbiome.org/). A análise estatística será realizada pelos métodos mais adequados para inferir as associações entre assinaturas específicas da microbiota e parâmetros clínicos, dietéticos e metabolômicos.