牛乳摂取による胃腸障害の生理的バイオマーカーの同定 (MIDI)

牛乳や乳製品の消費に関連する消化器疾患を報告する個人は世界中で増加していますが、多くの場合、この状態は乳糖不耐症またはカゼインアレルギーの十分に文書化された診断とは関連していません. 一部の研究者は、これらの障害（病気の診断がない場合）は、牛乳の消化中に形成される特定のペプチドが原因である可能性があると仮定しています. さらなる証拠は、腸刷子縁酵素の活性の欠如、腸透過性の変化、および/または特定の腸内微生物叢組成などの他の要因が、牛乳の消費によって引き起こされる胃腸 (GI) の不快感の発症に関与している可能性があるという仮説を支持しています。 . 実際、これらすべての要因は、消化をスキップして腸粘膜を通過するペプチドとラクトースの量と種類を調節し、胃腸運動と胃腸ホルモン分泌に影響を与える可能性があります。 同様に、摂食行動のホメオスタシスおよび非ホメオスタシス調節、ならびに痛み調節プロセスにおけるその影響により、牛乳摂取後の消化管症状の進化における内在性カンナビノイド システム (EC) の役割が仮定される可能性があります。

この研究では、乳糖と牛乳タンパク質の消化率を、健康で習慣的な乳消費者 (HMC) と比較して、牛乳の摂取によって誘発される胃腸の不快感のために習慣的な牛乳消費者 (NHMC) である健康な被験者で調査します。 腸の透過性、腸内微生物叢の組成、および被験者の心理的健康状態も調査され、2 つのグループで比較されます。

募集前のアンケートとラクトース呼気試験に基づく参加者の登録後の研究デザインには、腸透過性試験と牛乳試験が含まれます。

この研究に参加する被験者の潜在的な適格性は、募集前のアンケート、ボランティアの個人的および社会人口学的データの収集、牛乳の消費習慣および関連する症状に関する情報、健康に関する一般的な情報（人体測定、健康状態、喫煙およびアルコール摂取習慣）、家庭環境、乳製品とその摂取に関するボランティアの考慮事項、および食習慣に関する情報。

インフォームドコンセントフォームに署名する可能性のある適格な被験者は、ローマコンセンサス会議（2009）で承認されたプロトコルに従って実施されるラクトース呼気検査により、最終的な適格性について評価されます。 胃腸症状も被験者によって記録され、呼気サンプルのH2測定と並行して、テストの開始から最大24時間まで、ビジュアルアナログスケール（VAS）によって記録されます。

ラクトース呼気検査中、被験者は、身体活動アンケート (IPAQ の短縮版)、生活の質、うつ病、不安、ストレス (DASS) に関するアンケート、半定量的な食事頻度アンケート (FFQ) に記入するよう求められます。 )、糞便の頻度と一貫性を評価するための King's Stool Chart、および個々の摂食行動を評価するための Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ)。 体重と身長の人体測定データも測定されます。

ラクトース呼気試験中および呼気試験後に発生した全体的な症状は、呼気サンプルで測定された H2 濃度とともに評価されます。ベースラインを超える 20 ppm のカットオフ値を使用して、ラクトース吸収不良者を特定します。

この選択手順により、適格として識別されます。

• 呼気検査（BT-）に陰性であり、消化管症状（乳糖吸収体）を言及していない、またはいくつかの軽度の胃腸症状を言及していない被験者
• 呼気検査で陽性（BT+）であるが症状がない被験者（症状のない乳糖吸収不良者）。

一方、被験者は次の場合に研究から除外されます。

• 彼らは呼気検査（BT +）に陽性であり、消化管症状（乳糖不耐症）を報告しています
• 彼らは呼気検査（BT-）には陰性ですが、「嘔吐」や「ゆるい、どろどろした、または水っぽい便」などの重度の胃腸症状を報告しています.

履修登録は、以下の 2 つの科目群が構成された時点で終了します。

• グループ 1、常習的な牛乳消費者 (HMC): 定期的に牛乳を消費し (>700 mL/週)、牛乳の摂取後に胃腸の不快感を経験せず、乳糖耐性または乳糖吸収不良者である 20 人の被験者。
• グループ 2、非習慣的な牛乳消費者 (NHMC): 牛乳摂取後の胃腸の不快感のため、通常の牛乳消費者ではなく (< 150 mL/週)、乳糖耐性または乳糖吸収不良者である 20 人の被験者。

両方のグループのすべての被験者に対して、腸透過性テストとミルクテストが実行されます。 これらのテストは、ラクトース呼気テストから 1 週間後にスケジュールされ、その間に 1 週​​間あります。 被験者はまた、通常の食生活の下で糞便サンプルを収集するよう求められます.

腸透過性試験では、被験者は薬物摂取についての指示を受け、試験の 2 日前から管理された食事に従うように求められます (牛乳や乳製品、およびポリオールを含む食品は避けてください)。

断食中の被験者は、水 100 ml にラクツロース 5 g、マンニトール 2 g、スクラロース 2 g を含む溶液を飲む前に、ベースラインの尿サンプルを採取します。 尿は、1 ppm のクロルヘキシジン溶液 1 mL を加えた 2 つの容器に 0 ～ 5 時間および 5 ～ 24 時間収集されます。 24時間にわたって収集され、翌日研究センターに届けられた尿サンプルを等分し(1.5ml)、分析まで-20℃で凍結する。

ミルクテストの前の週に、被験者は食事日記を記入します。 さらに、牛乳、乳製品、および乳タンパク質を含む食品は、牛乳検査の 2 日前から飲まないように指示されます。 牛乳検査の日に、絶食中の被験者は実際の食欲と消化管症状に関するアンケートに記入し、ベースラインの尿と血液サンプルが収集され、指刺しによる空腹時血糖が測定されます。 その後、被験者は 10 分以内に 250 ml の牛乳を飲み、その後、血糖、症状、食欲に関する質問票、および血液サンプルと尿を特定の時点で収集します。 最後の採血後、被験者には昼食が提供され、スタディセンターを出る前に、胃腸症状と食欲のアンケートに記入し、尿を採取し、食事日記に記入し、定食を食べるように指示されます。 アンケート、日記、および 6 ～ 24 時間の尿サンプルは、翌日に検査室に届けられます。

-40°C で保存された血液サンプルは、以下について分析されます。

• アプロチニンで前処理した血漿サンプル中の胃腸ホルモン (インスリン、胃抑制ペプチド (GIP)、グルカゴン様ペプチド 1 (GLP-1)、グルカゴン、c-ペプチド、グレリン、レプチン)。
• エンドカンナビノイドおよびN-アシルエタノールアミン（EC）;
• カゼイン消化由来のペプチド（ベータカソモルフィンおよび乳タンパク質由来のすべての既知のペプチド）;
• アミノ酸プロファイル;
• DPPIV 活動;
• ベースライン DPPIV 濃度。

アリコート (1.5 ml) に分けられ、-40 ° C で凍結された尿サンプルを使用して、以下を測定します。

• ラクトース、ガラクトース + グルコース、およびインジカン排泄レベル (牛乳検査後 24 時間以上に収集された尿の場合)。
• ラクツロース、マンニトール、およびスクラロースの排泄レベル (腸透過性試験後 24 時間にわたって収集された尿について)。

-40℃で保存された糞便サンプルは、国際ヒトマイクロバイオームコンソーシアム（http://www.human-microbiome.org/）の標準操作手順に従ってDNA抽出に使用されます。 統計分析は、特定の微生物叢の特徴と臨床、食事、およびメタボロミクスのパラメーターとの関連性を推測するために、最も適切な方法で実行されます。