Идентификация физиологических биомаркеров желудочно-кишечных расстройств, вызванных потреблением молока (MIDI)

Во всем мире увеличивается число людей, сообщающих о расстройствах пищеварения, связанных с потреблением молока и молочных продуктов, но во многих случаях это состояние не связано с хорошо задокументированным диагнозом непереносимости лактозы или аллергии на казеин. Некоторые исследователи предполагают, что эти расстройства (при отсутствии какого-либо диагноза заболевания) могут быть связаны с образованием определенных пептидов при переваривании молока. Дополнительные данные подтверждают гипотезу о том, что другие факторы, такие как отсутствие активности ферментов щеточной каймы кишечника, изменение проницаемости кишечника и/или специфический состав кишечной микробиоты, могут быть связаны с возникновением желудочно-кишечного дискомфорта, вызванного потреблением молока. . Действительно, все эти факторы могут модулировать количество и тип пептидов и лактозы, пропускающих переваривание и проходящих через слизистую оболочку кишечника, что приводит к влиянию на перистальтику ЖКТ и секрецию желудочно-кишечных гормонов. Точно так же, из-за его влияния на гомеостатическую и негомеостатическую регуляцию пищевого поведения, а также на процессы регуляции боли, можно предположить роль эндоканнабиноидной системы (ЭК) в развитии желудочно-кишечных симптомов после употребления молока.

В этом исследовании усвояемость лактозы и молочных белков будет изучаться у здоровых людей, которые не употребляют молоко регулярно (NHMC) из-за дискомфорта в желудочно-кишечном тракте, вызванного приемом молока, по сравнению со здоровыми и привычными потребителями молока (HMC). Проницаемость кишечника, состав кишечной микробиоты и состояние психологического благополучия субъектов также будут исследованы и сравнены в 2 группах.

Дизайн исследования после набора участников на основе предварительных анкет и дыхательного теста на лактозу включает тест на проницаемость кишечника и тест на молоко.

Потенциальная пригодность испытуемых для участия в этом исследовании будет оцениваться с помощью анкетирования перед набором, сбора личных и социально-демографических данных добровольцев, информации о привычках потребления молока и связанных с ними симптомах, общей информации о здоровье (антропометрия, состояние здоровья, курение и привычки потребления алкоголя), бытовая обстановка, информация о том, что волонтеры думают о молочных продуктах и ​​их употреблении, и пищевых привычках.

Потенциально подходящие субъекты, которые подпишут форму информированного согласия, будут оцениваться на предмет окончательного соответствия требованиям с помощью дыхательного теста на лактозу, проводимого в соответствии с протоколом, одобренным на Римской консенсусной конференции (2009 г.). Субъекты также будут регистрировать желудочно-кишечные симптомы параллельно с измерениями H2 в образцах дыхания и в течение 24 часов с начала теста с помощью визуальных аналоговых шкал (ВАШ).

Во время дыхательного теста на лактозу испытуемым будет предложено заполнить анкету физической активности (короткая версия IPAQ), анкеты по качеству жизни, депрессии, тревоге и стрессу (DASS), полуколичественную анкету частоты приема пищи (FFQ). ), Таблица стула короля, чтобы оценить частоту и консистенцию фекалий, и Трехфакторный вопросник пищевого поведения (TFEQ) для оценки индивидуального пищевого поведения. Также будут измерены антропометрические данные веса и роста.

Общие симптомы, развившиеся во время и после дыхательного теста на лактозу, будут оцениваться вместе с концентрациями H2, измеренными в образцах выдыхаемого воздуха; пороговое значение на 20 частей на миллион выше базового уровня будет использоваться для выявления мальабсорбторов лактозы.

В рамках этой процедуры отбора в качестве правомочных будут определены:

• субъекты с отрицательным результатом дыхательного теста (BT-) и не указывающие на какие-либо желудочно-кишечные симптомы (поглотитель лактозы) или имеющие незначительные желудочно-кишечные симптомы
• субъекты с положительным результатом дыхательного теста (BT+), но без каких-либо симптомов (нарушение всасывания лактозы без симптомов).

С другой стороны, субъекты будут исключены из исследования, если:

• они положительны в дыхательном тесте (BT+) и сообщают о желудочно-кишечных симптомах (непереносимость лактозы)
• они отрицательны на дыхательный тест (BT-), но сообщают о тяжелых желудочно-кишечных симптомах, таких как «рвота» и «жидкий, кашицеобразный или водянистый стул».

Зачисление будет завершено, когда будут сформированы 2 группы предметов следующим образом.

• Группа 1, обычные потребители молока (HMC): 20 человек, которые регулярно потребляют молоко (> 700 мл в неделю), не испытывают желудочно-кишечного дискомфорта после приема молока и имеют толерантность к лактозе или мальабсорбцию лактозы.
• Группа 2, непривычные потребители молока (NHMC): 20 человек, которые не употребляют молоко регулярно (< 150 мл в неделю) из-за желудочно-кишечного дискомфорта после приема молока и имеют толерантность к лактозе или мальабсорбцию лактозы.

Для всех субъектов из обеих групп будет проведен тест на проницаемость кишечника и тест на молоко. Эти тесты будут запланированы через одну неделю после дыхательного теста на лактозу и с интервалом в одну неделю между ними. Субъектов также попросят собрать образец фекалий в соответствии с обычными диетическими привычками.

Для теста на проницаемость кишечника испытуемых проинструктируют о потреблении лекарств, и им будет предложено соблюдать контролируемую диету в течение 2 дней до теста (избегая молока и молочных продуктов, а также пищевых продуктов, содержащих полиолы).

Субъекты натощак собирают базовый образец мочи, прежде чем выпить раствор, содержащий 5 г лактулозы, 2 г маннита и 2 г сукралозы в 100 мл воды. Моча будет собираться в течение периодов времени 0-5 часов и 5-24 часов в два контейнера с добавлением 1 мл раствора хлоргексидина с концентрацией 1 ppm. Образцы мочи, собранные в течение 24 часов и доставленные на следующий день в исследовательский центр, будут разделены на аликвоты (1,5 мл) и заморожены при -20°C до анализа.

За неделю до теста на молоко испытуемые заполняют пищевой дневник. Кроме того, им будет предписано не пить молоко, молочные продукты и любые пищевые продукты, содержащие молочные белки, в течение 2 дней до анализа молока. В день теста на молоко испытуемые натощак заполнят анкеты об их фактическом аппетите и желудочно-кишечных симптомах, будут собраны исходные образцы мочи и крови, а также будет измерена гликемия натощак с помощью прокола пальца. Впоследствии субъекты выпивают 250 мл молока в течение 10 минут, после чего в определенные моменты времени будут собираться опросники гликемии, симптомов и аппетита, а также образцы крови и мочи. После последнего забора крови испытуемым будет предложен обед, и перед тем, как покинуть исследовательский центр, им будет предложено заполнить анкеты по желудочно-кишечным симптомам и аппетиту, собрать мочу, заполнить дневник питания и съесть фиксированный ужин. Анкеты, дневники и пробы мочи за 6-24 часа будут доставлены в лабораторию на следующий день.

Образцы крови, хранящиеся при температуре -40°C, будут проанализированы на:

• желудочно-кишечные гормоны (инсулин, желудочный ингибирующий пептид (ГИП), глюкагоноподобный пептид 1 (ГПП-1), глюкагон, с-пептид, грелин, лептин) в образцах плазмы, предварительно обработанных апротинином;
• эндоканнабиноиды и N-ацилэтаноламины (ЭК);
• пептиды, полученные путем переваривания казеина (бета-казоморфины и все известные пептиды, полученные из молочных белков);
• аминокислотный профиль;
• активность ДППИВ;
• исходная концентрация DPPIV.

Образцы мочи, разделенные на аликвоты (1,5 мл) и замороженные при температуре -40°C, будут использоваться для измерения:

• уровни экскреции лактозы, галактозы + глюкозы и индикана (для мочи, собранной в течение 24 часов после анализа на молоко).
• уровни экскреции лактулозы, маннита и сукралозы (для мочи, собранной в течение 24 часов после теста на проницаемость кишечника).

Образцы фекалий, хранящиеся при температуре -40°C, будут использоваться для выделения ДНК в соответствии со стандартными операционными процедурами Международного консорциума микробиома человека (http://www.human-microbiome.org/). Статистический анализ будет проводиться с использованием наиболее подходящих методов, чтобы сделать вывод о связи между конкретными признаками микробиоты и клиническими, диетическими и метаболическими параметрами.