Maidon kulutuksen aiheuttamien maha-suolikanavan vaivojen fysiologisten biomarkkerien tunnistaminen (MIDI)

Maidon ja maitotuotteiden kulutukseen liittyvistä ruoansulatushäiriöistä ilmoittavat ihmiset lisääntyvät maailmanlaajuisesti, mutta monissa tapauksissa tämä sairaus ei liity hyvin dokumentoituun laktoosi-intoleranssin tai kaseiiniallergian diagnoosiin. Jotkut tutkijat olettavat, että nämä häiriöt (sairausdiagnoosin puuttuessa) voivat johtua tietyistä peptideistä, joita muodostuu maidon sulamisen aikana. Lisätodisteet tukevat hypoteesia, että muut tekijät, kuten suolen harjareunusentsyymien aktiivisuuden puute, muuttunut suolen läpäisevyys ja/tai erityinen suoliston mikrobiston koostumus, voivat olla osallisena maidon kulutuksen aiheuttamien maha-suolikanavan (GI) vaivojen ilmaantumiseen. . Todellakin, kaikki nämä tekijät voivat moduloida peptidien ja laktoosin määrää ja tyyppiä jättäen ruoansulatuksen väliin ja kulkeutuen suolen limakalvon läpi, mikä johtaa vaikutuksiin maha-suolikanavan motiliteettiin ja maha-suolikanavan hormonien eritykseen. Vastaavasti endokannabinoidijärjestelmän (EC:n) rooli maidon kulutuksen jälkeisten GI-oireiden kehittymisessä voidaan olettaa, koska sillä on vaikutuksia syömiskäyttäytymisen homeostaattiseen ja ei-homeostaattiseen säätelyyn sekä kipua sääteleviin prosesseihin.

Tässä tutkimuksessa tutkitaan laktoosin ja maitoproteiinien sulavuutta terveillä koehenkilöillä, jotka eivät käytä maitoa (NHMC) maidon nauttimisen aiheuttamien maha-suolikanavan vaivojen vuoksi, verrattuna terveisiin ja tavanomaisiin maidonkuluttajiin (HMC). Suoliston läpäisevyyttä, suoliston mikrobiotan koostumusta ja koehenkilöiden psyykkistä hyvinvointia tutkitaan ja verrataan myös kahdessa ryhmässä.

Rekrytointia edeltäviin kyselylomakkeisiin ja laktoosihengitystestiin perustuvan osallistujien ilmoittautumisen jälkeen tutkimussuunnitelmaan sisältyy suolen läpäisytesti ja maitotesti.

Koehenkilöiden mahdollista kelpoisuutta osallistua tähän tutkimukseen arvioidaan ennen rekrytointia tehtävillä kyselylomakkeilla, keräämällä vapaaehtoisten henkilökohtaisia ​​ja sosiodemografisia tietoja, tietoa maidon kulutustottumuksista ja niihin liittyvistä oireista, yleistä terveystietoa (antropometria, terveydentila, tupakointi ja alkoholinkäyttötottumukset), kotiympäristö, tietoa vapaaehtoisen harkinnasta maitotuotteeseen ja sen kulutukseen sekä ruokailutottumuksiin.

Mahdollisten kelpoisuusvaatimusten mukaisten tutkimushenkilöiden, jotka allekirjoittavat tietoisen suostumuslomakkeen, lopullinen kelpoisuus arvioidaan laktoosihengitystestillä, joka suoritetaan Rooman konsensuskonferenssissa (2009) hyväksytyn pöytäkirjan mukaisesti. Koehenkilöt rekisteröivät myös GI-oireita samanaikaisesti hengitysnäytteiden H2-mittausten kanssa ja enintään 24 tuntia testin alkamisesta Visual Analogue Scales (VAS) -asteikkojen avulla.

Laktoosihengitystestin aikana koehenkilöitä pyydetään täyttämään fyysinen aktiivisuuskysely (lyhyt versio IPAQ:sta), elämänlaatua, masennusta, ahdistusta ja stressiä koskevat kyselylomakkeet (DASS), puolikvantitatiivinen ruokatiheyskysely (FFQ). ), King's Stool Chart, arvioimaan ulosteiden tiheyttä ja konsistenssia, ja Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ) arvioimaan yksilön syömiskäyttäytymistä. Myös antropometriset paino- ja pituustiedot mitataan.

Laktoosihengitystestin aikana ja sen jälkeen kehittyneet yleisoireet arvioidaan yhdessä uloshengitysnäytteistä mitattujen H2-pitoisuuksien kanssa; laktoosin imeytymishäiriöiden tunnistamiseen käytetään raja-arvoa, joka on 20 ppm perusviivan yläpuolella.

Tässä valintamenettelyssä hyväksytään:

• koehenkilöt, jotka ovat negatiivisia hengitystestissä (BT-) eivätkä viittaa mihinkään GI-oireeseen (laktoosin imeytysaine) tai viittaa joihinkin vähäisiin maha-suolikanavan oireisiin
• koehenkilöt, jotka ovat positiivisia hengitystestissä (BT+), mutta joilla ei ole oireita (laktoosin imeytymishäiriöt ilman oireita).

Toisaalta koehenkilöt suljetaan pois tutkimuksesta, jos:

• he ovat positiivisia hengitystestissä (BT+) ja raportoivat GI-oireista (laktoosi-intoleranssi)
• ne ovat negatiivisia hengitystestissä (BT-), mutta raportoivat vakavista GI-oireista, kuten "oksentelusta" ja "löysät, tahmeat tai vetiset ulosteet".

Ilmoittautuminen päättyy, kun 2 aineryhmää muodostetaan seuraavasti

• Ryhmä 1, tavanomaiset maidonkuluttajat (HMC): 20 koehenkilöä, jotka kuluttavat säännöllisesti maitoa (>700 ml/viikko), eivät koe ruoansulatuskanavan epämukavuutta maidon nauttimisen jälkeen ja ovat laktoosia sietäviä tai laktoosi-imeytyviä.
• Ryhmä 2, tavalliset maidonkuluttajat (NHMC): 20 koehenkilöä, jotka eivät käytä säännöllisesti maitoa (< 150 ml/viikko) maidon nauttimisen jälkeisten GI-vaivojen vuoksi ja ovat laktoosia sietäviä tai laktoosia imeytyviä.

Kaikille molempien ryhmien koehenkilöille suoritetaan suolen läpäisevyystesti ja maitotesti. Nämä testit ajoitetaan viikon kuluttua laktoosihengitystestistä ja viikon välein. Tutkittavia pyydetään myös ottamaan ulostenäyte tavanomaisten ruokailutottumusten mukaisesti.

Suolen läpäisevyystestissä koehenkilöt saavat opastusta huumeiden kulutuksesta ja heitä pyydetään noudattamaan hallittua ruokavaliota 2 päivää ennen testiä (välten maitoa ja maitotuotteita sekä polyoleja sisältäviä elintarvikkeita).

Paastoavat koehenkilöt ottavat lähtötilanteen virtsanäytteen ennen kuin juovat liuoksen, joka sisältää 5 g laktuloosia, 2 g mannitolia ja 2 g sukraloosia 100 ml:ssa vettä. Virtsaa kerätään 0-5 tunnin ja 5-24 tunnin ajan kahteen astiaan, joihin on lisätty 1 ml klooriheksidiiniliuosta 1 ppm. Virtsanäytteet, jotka on kerätty 24 tunnin aikana ja toimitettu seuraavana päivänä tutkimuskeskukseen, jaetaan eriin (1,5 ml) ja pakastetaan -20 °C:seen analyyseihin asti.

Maitokoketta edeltävän viikon aikana koehenkilöt täyttävät ruokapäiväkirjaa. Lisäksi heitä kehotetaan olemaan juomatta maitoa, maitotuotteita tai maitoproteiineja sisältäviä elintarvikkeita maitokoketta edeltävien 2 päivän aikana. Maitokokepäivänä paastohenkilöt täyttävät kyselylomakkeet todellisesta ruokahalustaan ​​ja GI-oireistaan, otetaan virtsa- ja verinäytteitä lähtötilanteesta sekä mitataan paastoglukemia sormenpistolla. Myöhemmin koehenkilöt juovat 250 ml maitoa 10 minuutin sisällä ja sen jälkeen kerätään glykemia-, oire- ja ruokahalukyselylomakkeet sekä verinäytteitä ja virtsaa tiettyinä ajankohtina. Viimeisen verenoton jälkeen koehenkilöille tarjotaan lounas ja ennen lähtöä opintokeskuksesta heitä ohjataan GI-oireiden ja ruokahalukyselyiden täyttämiseen, virtsan keräämiseen, ruokapäiväkirjan täyttämiseen ja kiinteän illallisen nauttimiseen. Kyselylomakkeet, päiväkirjat ja 6-24h virtsanäytteet toimitetaan laboratorioon seuraavana päivänä.

-40 °C:ssa säilytetyt verinäytteet analysoidaan:

• maha-suolikanavan hormonit (insuliini, mahalaukkua estävä peptidi (GIP), glukagonin kaltainen peptidi 1 (GLP-1), glukagoni, c-peptidi, greliini, leptiini) plasmanäytteissä, jotka on esikäsitelty aprotiniinilla;
• endokannabinoidit ja N-asyylietanoliamiinit (EC:t);
• kaseiinin pilkkomisesta johdetut peptidit (beeta-kasomorfiinit ja kaikki tunnetut maitoproteiineista johdetut peptidit);
• aminohappoprofiili;
• DPPIV-aktiivisuus;
• lähtötason DPPIV-pitoisuus.

Virtsanäytteitä, jotka on jaettu eriin (1,5 ml) ja pakastettu -40 °C:seen, käytetään mittaamaan:

• laktoosi, galaktoosi + glukoosi ja indikaaninen erittymistasot (virtsalle, joka on kerätty yli 24 tuntia maitokokeen jälkeen).
• laktuloosin, mannitolin ja sukraloosin erittymistasot (virtsalle, joka on kerätty 24 tunnin aikana suolen läpäisevyyden testin jälkeen).

Ulostenäytteitä, joita säilytetään -40°C:ssa, käytetään DNA:n uuttamiseen International Human Microbiome Consortiumin (http://www.human-microbiome.org/) standardien toimintaohjeiden mukaisesti. Tilastollinen analyysi suoritetaan sopivimmilla menetelmillä, jotta voidaan päätellä tiettyjen mikrobiotan tunnusmerkkien ja kliinisten, ruokavalion ja metabolomisten parametrien väliset yhteydet.