用于脂肪肉瘤诊断和预后的新血液生物标志物的鉴定 (ESPACE)

肉瘤是一种罕见疾病，占成人所有恶性疾病的不到 1%¹。 它们的发病率约为每年每 100,000 名居民中有 6 例新病例，即法国每年估计有 4,000 至 5,000 例新病例。

脂肪肉瘤 (LPS) 是最常见的软组织肉瘤亚型，约占所有肉瘤的 15%。

OMS 分类将 LPS 分为 5 类：粘液样、多形性、圆细胞脂肪肉瘤、去分化 (DD-LPS) 和分化良好 (WD-LPS)。 研究团队对本研究的最后两个感兴趣。

影像学检查（肢体肿瘤的 MRI 和腹膜后 LPS 的 CT）怀疑诊断，这应该导致专家中心的多学科肿瘤委员会进行讨论，以验证活检的明确诊断并确定最佳活检途径避免传播的风险。 在法国，肉瘤患者的管理是围绕 24 个“NETSARC”中心网络进行的。

WD-LPS 和 DD-LPS 可能难以分别与良性脂肪瘤和未分化肉瘤区分开来。 基于通过荧光原位杂交(FISH)检测Mdm2基因扩增的分子分析是目前的“金标准”。 它是在肿瘤活检中进行的。 活检是一种放射学活检，因为指南建议这样做以降低疾病传播的风险。 因此，允许诊断的材料有限，使同一样本的形态学、免疫组织化学和分子生物学的实现变得复杂。 另一个限制是这个肿瘤片段并不总是反映肿瘤内的异质性。

治疗是由专门从事肉瘤的外科医生进行整体切除手术。 尽管进行了手术切除，但分化良好的脂肪肉瘤的局部和远处复发风险约为 26%⁵，而去分化腹膜后脂肪肉瘤则高达 59%。 复发的预后因素是切除质量、肿瘤大小、等级和腹膜后/肢体定位。 这两种脂肪肉瘤的问题是不一样的。 在 WD-LPS 中，问题是了解计划外 R1 切除（约占初始手术的 50%）情况下的复发风险。 事实上，对所有这些病例进行系统的手术修复既昂贵又病态，而在 50% 的病例中，手术恢复时不会发现肿瘤残留。 对于 DD-LPS，问题是不同的，因为在非 R0 手术的情况下，手术修正必须是系统的，但是尽管进行了充分的手术，但必须评估局部复发的风险和转移风险，以便提出辅助治疗(化学疗法和/或放射疗法)对具有高复发风险的患者也使得必须确定预后的生物学因素以选择具有高复发风险的患者。

临床医生建议确定一种新的血液测试，以指示疾病的存在。 然后它将用于诊断和预后，使我们能够评估切除手术后的残留病灶。 由于肉瘤的复杂性，用非侵入性方法鉴定 WD-LPS 和 DD-LPS 的有效和可靠的生物标志物是一个挑战，但临床医生希望他们的项目能够提供一种更有效和对患者友好的方法来检测肉瘤这种病。 我们的项目依赖于临床医生、研究人员和生物统计学家密切合作提供的互补专业知识。

临床医生最近表征了 p53 独立性 Mdm2 蛋白在丝氨酸代谢中的一种新功能，这可能在 LPS 的发展中发挥重要作用。 通过泛基因组方法，临床医生已经表征了 Mdm2 的新转录活性，并证明了它在癌细胞代谢中的作用。 这些数据表明，Mdm2 在染色质上的存在使得控制参与某些氨基酸（如丝氨酸）代谢和转运的基因的转录成为可能。

内源性丝氨酸库由营养缺陷型和从头合成之间的平衡维持，在细胞转化过程中强烈解除调节以支持癌细胞的合成代谢需求。 Mdm2 是通过 ATF 家族的转录因子招募到参与从头合成和丝氨酸转运的靶基因上的。

临床医生建议确定一种无需侵入性活检即可用于 LPS 预后和诊断的生物学测试。 纳入研究的患者将是患有 WD-LPS 或 DD-LPS 的患者，目标是在 2 年内纳入 100 名患者。

根据最近的数据显示 LPS 生长是由 Mdm2 介导的丝氨酸代谢调节介导的，临床医生建议测量丝氨酸血液水平作为 LPS 发展的替代标志物。 为了维持丝氨酸的细胞内水平，Mdm2 控制丝氨酸从头合成（一种使用糖酵解中间体 3-磷酸甘油酸在细胞中产生丝氨酸的代谢途径）和丝氨酸通过营养缺陷型进入细胞。 鉴于 LPS 的大小通常可以达到几十厘米，临床医生假设 LPS 可能导致对丝氨酸的大量需求，而丝氨酸可能由微环境产生并通过循环的丝氨酸和甘氨酸池（可以在细胞间-由细胞转化为丝氨酸）。 血浆氨基酸的分析具有很大的临床意义，因为它们很容易通过液相色谱法 (HPLC) 进行测量。 临床医生已经验证了一种 HPLC 方法来测量血清中的不同氨基酸，包括丝氨酸和甘氨酸。 我们的初步数据与我们的假设一致，因为与对照小鼠中测量的血清水平相比，患有患者肿瘤的异种移植小鼠的血清丝氨酸水平更高。 此外，作为对诱导肿瘤生长急剧减少的 Mdm2 抑制剂治疗的响应，可以观察到循环丝氨酸的减少。

临床医生将使用 HPLC 结合已经开发的质谱法来测量来自安捷伦技术的氨基酸。 氨基酸的定量分析结合了速度和灵敏度以及衍生反应和分析技术的可靠性。 这些目标是通过使用 o-phthalaldehyde (OPA) 生成一级氨基酸和 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC) 生成二级氨基酸的自动化和在线衍生化来实现的。 然后将自动推导集成到可靠的 HPLC 分析中。 使用 Agilent 1190 HPLC，整个过程快速、准确、灵敏且可重现。

该项目的主要目标是通过测量循环丝氨酸水平来确定一种用于诊断 LPS 的新型非侵入性生物测试。 目前的金标准是通过 FISH 检测 Mdm2 扩增。