Identificación de un nuevo biomarcador sanguíneo para el diagnóstico y pronóstico de liposarcomas (ESPACE)

Los sarcomas son enfermedades raras que representan menos del 1% de todas las enfermedades malignas en adultos¹. Su incidencia es de unos 6 nuevos casos por 100.000 habitantes al año, es decir, de 4.000 a 5.000 nuevos casos estimados al año en Francia.

El liposarcoma (LPS) es el subtipo de sarcoma de tejidos blandos más común y representa aproximadamente el 15 % de todos los sarcomas.

La clasificación de la OMS distingue 5 categorías de LPS: mixoide, pleomorfo, liposarcomas de células redondas, desdiferenciado (DD-LPS) y bien diferenciado (WD-LPS). El equipo de investigación está interesado en los dos últimos en este estudio.

El diagnóstico se sospecha en los exámenes de imagen (IRM para tumores de extremidades y TC para LPS retroperitoneal) lo que debe conducir a una discusión en una junta multidisciplinaria de tumores en un centro experto para validar la biopsia para el diagnóstico definitivo y definir la mejor ruta de biopsia para evitar el riesgo de propagación. En Francia, la gestión de pacientes con sarcoma se organiza en torno a la red de 24 centros "NETSARC".

WD-LPS y DD-LPS pueden ser difíciles de distinguir de los tumores adiposos benignos y los sarcomas indiferenciados, respectivamente. El análisis molecular, basado en la detección de la amplificación del gen Mdm2 por hibridación in situ con fluorescencia (FISH), es actualmente el "estándar de oro". Se realiza sobre una biopsia tumoral. La biopsia es una biopsia radiológica como se recomienda en las guías para reducir el riesgo de propagación de la enfermedad. El material que permite el diagnóstico es así limitado, lo que complica la realización de morfología, inmunohistoquímica y biología molecular en una misma muestra. La otra limitación es que este fragmento tumoral no siempre refleja la heterogeneidad intratumoral.

El tratamiento es quirúrgico con resección monobloque por un cirujano especialista en sarcomas. A pesar de la extirpación quirúrgica, el riesgo de recurrencia local ya distancia es de aproximadamente 26 % para liposarcomas bien diferenciados⁵ y hasta 59 % para liposarcomas retroperitoneales desdiferenciados. Los factores pronósticos de recurrencia son la calidad de la escisión, el tamaño del tumor, el grado y la localización retroperitoneal/de las extremidades. La problemática de estos 2 tipos de liposarcomas no es la misma. En WD-LPS, la cuestión es conocer el riesgo de recurrencia en caso de resección R1 no planificada (que representa aproximadamente el 50% de las cirugías iniciales). De hecho, una revisión quirúrgica sistemática de todos estos casos es costosa y morbosa, mientras que en el 50% de los casos no se encontrará ningún residuo tumoral en la recuperación quirúrgica. Para el DD-LPS el problema es diferente porque la revisión quirúrgica debe ser sistemática en caso de cirugía no R0, pero es el riesgo de recurrencia local a pesar de una cirugía adecuada y el riesgo metastásico lo que debe evaluarse para proponer un tratamiento adyuvante. (quimioterapia y/o radioterapia) a pacientes con alto riesgo de recidiva por lo que también es fundamental identificar un factor biológico de pronóstico para seleccionar pacientes con alto riesgo de recidiva.

Los médicos proponen identificar un nuevo análisis de sangre que indique la presencia de la enfermedad. Entonces serviría para el diagnóstico pero también para el pronóstico permitiéndonos evaluar la enfermedad residual después de la cirugía de escisión. Debido a la complejidad de los sarcomas, identificar un biomarcador efectivo y confiable para WD-LPS y DD-LPS con métodos no invasivos es un desafío, pero los médicos esperan que su proyecto proporcione un método más eficiente y fácil de usar para el paciente para la detección de sarcomas. la enfermedad. Nuestro proyecto se basa en la experiencia complementaria proporcionada por médicos, investigadores y bioestadísticos en estrecha colaboración.

Los médicos han caracterizado recientemente una función novedosa de la proteína Mdm2 independiente de p53 en el metabolismo de la serina, que podría desempeñar un papel fundamental en el desarrollo de LPS. A través de enfoques pangenómicos, los médicos han caracterizado una nueva actividad transcripcional de Mdm2 y han demostrado su papel en el metabolismo de las células cancerosas. Estos datos indican que la presencia de Mdm2 en la cromatina permite controlar la transcripción de genes implicados en el metabolismo y transporte de determinados aminoácidos como la serina.

La reserva de serina endógena se mantiene mediante un equilibrio entre la auxotrofia y la síntesis de novo, que se desregulan fuertemente durante la transformación celular para satisfacer las necesidades anabólicas de las células cancerosas. Mdm2 se recluta a través de factores de transcripción de la familia ATF en genes diana implicados en la síntesis de novo y el transporte de serina.

Los médicos proponen identificar una prueba biológica para el pronóstico y diagnóstico de LPS que no requiera una biopsia invasiva. Los pacientes incluidos en el estudio serán pacientes con WD-LPS o DD-LPS, con el objetivo de incluir 100 pacientes durante 2 años.

Sobre la base de datos recientes que muestran que el crecimiento de LPS está mediado por la regulación del metabolismo de la serina mediada por Mdm2, los médicos proponen medir los niveles de serina en sangre como un marcador sustituto del desarrollo de LPS. Para mantener el nivel intracelular de serina, Mdm2 controla tanto la síntesis de serina de novo (una vía metabólica que utiliza el intermediario glucolítico 3-fosfoglicerato para generar serina en las células) como la entrada de la serina en la célula por auxotrofia. Dado el tamaño del LPS, que a menudo puede alcanzar varias decenas de centímetros, los médicos plantearon la hipótesis de que el LPS puede dar lugar a una demanda significativa de serina que podría ser producida por el microambiente y transmitida al tumor a través de las reservas circulantes de serina y glicina (que pueden estar interconectadas). -convertido en serina por las células). El perfilado de aminoácidos plasmáticos es de gran interés clínico ya que son fáciles de medir por cromatografía líquida (HPLC). Los médicos ya han validado un método de HPLC para medir diferentes aminoácidos, incluidos la serina y la glicina, en el suero. Nuestros datos preliminares están en línea con nuestra hipótesis, ya que el nivel de serina sérica es mayor en los ratones xenoinjertados con tumor del paciente en comparación con los niveles séricos medidos en los ratones de control. Además, en respuesta al tratamiento con un inhibidor de Mdm2, que induce una reducción drástica del crecimiento tumoral, se puede observar una disminución de la serina circulante.

Los médicos utilizarán una HPLC junto con espectrometría de masas ya desarrollada para medir los aminoácidos de la tecnología de Agilent. El análisis cuantitativo de aminoácidos combina rapidez y sensibilidad con la fiabilidad de la reacción de derivación y la técnica analítica. Estos objetivos se logran mediante la derivatización automatizada y en línea utilizando o-ftalaldehído (OPA) para los aminoácidos primarios y cloroformiato de 9-fluorenilmetilo (FMOC) para los aminoácidos secundarios. Luego, la derivación automatizada se integra en un sólido análisis de HPLC. El procedimiento completo es rápido, preciso, sensible y reproducible con Agilent 1190 HPLC.

El objetivo principal de este proyecto es identificar una nueva prueba biológica no invasiva para el diagnóstico de LPS mediante la medición de los niveles de serina circulante. El estándar de oro actual es la detección de la amplificación de Mdm2 por el FISH.