Идентификация нового биомаркера крови для диагностики и прогноза липосарком (ESPACE)

Саркомы являются редкими заболеваниями, на их долю приходится менее 1% всех злокачественных заболеваний у взрослых¹. Их заболеваемость составляет около 6 новых случаев на 100 000 жителей в год, т. е. от 4 000 до 5 000 новых случаев в год во Франции.

Липосаркома (ЛПС) является наиболее распространенным подтипом сарком мягких тканей, на долю которого приходится примерно 15% всех сарком.

Классификация OMS выделяет 5 категорий ЛПС: миксоидные, плеоморфные, круглоклеточные липосаркомы, дедифференцированные (DD-LPS) и высокодифференцированные (WD-LPS). Исследовательская группа заинтересована двумя последними в этом исследовании.

Диагноз предполагается при визуализирующих исследованиях (МРТ для опухолей конечностей и КТ для ретроперитонеальной ЛПС), которые должны привести к обсуждению на междисциплинарной комиссии по опухолям в экспертном центре для подтверждения биопсии для окончательного диагноза и определения наилучшего пути биопсии для избежать риска распространения. Во Франции ведение пациентов с саркомой организовано вокруг сети из 24 центров «NETSARC».

WD-LPS и DD-LPS может быть трудно отличить от доброкачественных жировых опухолей и недифференцированных сарком соответственно. Молекулярный анализ, основанный на обнаружении амплификации гена Mdm2 с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), в настоящее время является «золотым стандартом». Выполняется на биопсии опухоли. Биопсия является радиологической биопсией, поскольку она рекомендуется в руководствах для снижения риска распространения заболевания. Таким образом, материал, позволяющий поставить диагноз, ограничен, что усложняет проведение морфологии, иммуногистохимии и молекулярной биологии на одном и том же образце. Другим ограничением является то, что этот фрагмент опухоли не всегда отражает гетерогенность внутри опухоли.

Лечение хирургическое с моноблочной резекцией хирургом, специализирующимся на саркомах. Несмотря на хирургическое удаление, риск местного и отдаленного рецидива составляет приблизительно 26% для высокодифференцированных липосарком⁵ и до 59% для дедифференцированных забрюшинных липосарком. Прогностическими факторами рецидива являются качество иссечения, размер опухоли, ее степень и забрюшинная/конечностная локализация. Проблема, связанная с этими двумя типами липосарком, не одинакова. В WD-LPS вопрос заключается в том, чтобы знать риск рецидива в случае незапланированной резекции R1 (что составляет примерно 50% первоначальных операций). Действительно, систематическая хирургическая ревизия во всех этих случаях является дорогостоящей и болезненной, тогда как в 50% случаев после хирургического восстановления не будет обнаружено остатков опухоли. Для DD-LPS проблема иная, потому что хирургическая ревизия должна быть систематической в ​​случае операции, отличной от R0, но это риск местного рецидива, несмотря на адекватную операцию, и риск метастазирования, который необходимо оценить, чтобы предложить адъювантное лечение. (химиотерапия и/или лучевая терапия) пациентам с высоким риском рецидива, что также делает необходимым определение биологического фактора прогноза для отбора пациентов с высоким риском рецидива.

Клиницисты предлагают выявить новый анализ крови, который указывал бы на наличие заболевания. Затем он будет служить для диагностики, а также для прогноза, позволяющего нам оценить остаточное заболевание после операции по иссечению. Из-за сложности сарком определение эффективного и надежного биомаркера для WD-LPS и DD-LPS с помощью неинвазивных методов является сложной задачей, но клиницисты надеются, что их проект предоставит более эффективный и удобный для пациентов метод обнаружения сарком. болезнь. Наш проект опирается на дополнительный опыт, предоставленный клиницистами, исследователями и биостатистиками в тесном сотрудничестве.

Клиницисты недавно охарактеризовали новую функцию p53-независимого белка Mdm2 в метаболизме серина, которая может играть фундаментальную роль в развитии LPS. С помощью пангеномных подходов клиницисты охарактеризовали новую транскрипционную активность Mdm2 и продемонстрировали его роль в метаболизме раковых клеток. Эти данные показывают, что присутствие Mdm2 в хроматине позволяет контролировать транскрипцию генов, участвующих в метаболизме и транспорте определенных аминокислот, таких как серин.

Эндогенный пул серина поддерживается за счет баланса между ауксотрофией и синтезом de novo, которые сильно дерегулируются во время клеточной трансформации для поддержки анаболических потребностей раковых клеток. Mdm2 рекрутируется через факторы транскрипции семейства ATF на гены-мишени, участвующие в синтезе de novo и транспорте серина.

Клиницисты предлагают определить биологический тест для прогноза и диагностики ЛПС, не требующий инвазивной биопсии. Пациенты, включенные в исследование, будут пациентами с WD-LPS или DD-LPS, с целью включения 100 пациентов в течение 2 лет.

Основываясь на недавних данных, показывающих, что рост LPS опосредуется Mdm2-опосредованной регуляцией метаболизма серина, клиницисты предлагают измерять уровни серина в крови в качестве суррогатного маркера развития LPS. Чтобы поддерживать внутриклеточный уровень серина, Mdm2 контролирует как синтез серина de novo (метаболический путь, который использует гликолитический промежуточный продукт 3-фосфо-глицерат для образования серина в клетках), так и проникновение серина в клетку путем ауксотрофии. Учитывая размер ЛПС, который часто может достигать нескольких десятков сантиметров, клиницисты предположили, что ЛПС может приводить к значительной потребности в серине, которая может продуцироваться микроокружением и передаваться в опухоль посредством циркулирующих пулов серина и глицина (которые могут взаимодействовать друг с другом). -превращается клетками в серин). Определение профиля аминокислот плазмы представляет большой клинический интерес, поскольку их легко измерить с помощью жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Клиницисты уже утвердили метод ВЭЖХ для измерения различных аминокислот, включая серин и глицин, в сыворотке. Наши предварительные данные согласуются с нашей гипотезой, поскольку уровень серина в сыворотке выше у ксенотрансплантированных мышей с больной опухолью по сравнению с уровнями в сыворотке, измеренными у контрольных мышей. Кроме того, в ответ на лечение ингибитором Mdm2, вызывающим резкое снижение роста опухоли, может наблюдаться снижение циркулирующего серина.

Клиницисты будут использовать ВЭЖХ в сочетании с масс-спектрометрией, уже разработанной для измерения аминокислот по технологии Agilent. Количественный анализ аминокислот сочетает в себе скорость и чувствительность с надежностью реакции деривации и аналитической техники. Эти цели достигаются путем автоматической и онлайновой дериватизации с использованием о-фталевого альдегида (OPA) для первичных аминокислот и 9-флуоренилметилхлорформиата (FMOC) для вторичных аминокислот. Затем автоматизированное получение интегрируется в надежный анализ ВЭЖХ. Вся процедура выполняется быстро, точно, чувствительно и воспроизводимо с использованием ВЭЖХ Agilent 1190.

Основной целью этого проекта является определение нового неинвазивного биологического теста для диагностики ЛПС путем измерения уровня циркулирующего серина. Текущим золотым стандартом является обнаружение амплификации Mdm2 с помощью FISH.