Új vér biomarker azonosítása a liposarcomák diagnosztizálására és prognózisára (ESPACE)

A szarkómák ritka betegségek, a felnőttek összes rosszindulatú betegségének kevesebb mint 1%-át teszik ki. Előfordulásuk 100 000 lakosra számítva körülbelül 6 új eset évente, azaz Franciaországban évente 4-5000 új esetet becsülnek.

A liposarcoma (LPS) a lágyszöveti szarkóma leggyakoribb altípusa, amely az összes szarkóma körülbelül 15%-át teszi ki.

Az OMS besorolása az LPS 5 kategóriáját különbözteti meg: myxoid, pleomorphe, kerek sejtes liposzarkómák, dedifferenciált (DD-LPS) és jól differenciált (WD-LPS). A kutatócsoportot az utolsó kettő érdekli ebben a tanulmányban.

A diagnózis gyanúja a képalkotó vizsgálatok (MRI a végtagdaganatokra és CT a retro-peritoneális LPS-re) alapján, amelyek egy szakértői központ multidiszciplináris tumorbizottságán történő megbeszéléshez vezetnek, hogy validálják a biopsziát a végleges diagnózishoz, és meghatározzák a legjobb biopsziás útvonalat elkerülje a terjedés veszélyét. Franciaországban a szarkómás betegek kezelése 24 „NETSARC” központból álló hálózat köré szerveződik.

A WD-LPS-t és a DD-LPS-t nehéz lehet megkülönböztetni a jóindulatú zsírdaganatoktól, illetve a differenciálatlan szarkómáktól. Az Mdm2 génamplifikáció fluoreszcens in situ hibridizációval (FISH) történő kimutatásán alapuló molekuláris elemzés jelenleg az "arany standard". Tumorbiopszián történik. A biopszia radiológiai biopszia, mivel az irányelvekben javasolt a betegség terjedésének kockázata. A diagnózist lehetővé tevő anyag tehát korlátozott, ami megnehezíti a morfológia, immunhisztokémia és molekuláris biológia megvalósítását ugyanazon a mintán. A másik korlátozás az, hogy ez a tumorfragmens nem mindig tükrözi a tumoron belüli heterogenitást.

A kezelés sebészeti, monoblokk reszekcióval, szarkómára szakosodott sebész által. A sebészeti kimetszés ellenére a lokális és távoli kiújulás kockázata körülbelül 26% jól differenciált liposarcoma⁵ esetén, és akár 59% dedifferenciált retroperitoneális liposarcomák esetén. A kiújulás prognosztikai tényezői a kivágás minősége, a daganat mérete, fokozata és a retroperitoneális/végtag lokalizációja. A liposzarkóma két típusával kapcsolatos probléma nem ugyanaz. A WD-LPS-ben a kérdés az, hogy ismerjük a kiújulás kockázatát nem tervezett R1 reszekció esetén (ez a kezdeti műtétek körülbelül 50%-át teszi ki). Valójában mindezen esetek szisztematikus műtéti felülvizsgálata költséges és morbid, míg az esetek 50%-ában a műtéti felépülés során nem találnak tumormaradványt. A DD-LPS esetében más a probléma, mert a sebészeti revíziónak szisztematikusnak kell lennie nem R0 műtét esetén, de a megfelelő műtét ellenére a lokális kiújulás kockázatát és a metasztatikus kockázatot kell értékelni ahhoz, hogy adjuváns kezelést javasolhassunk. (kemoterápia és/vagy sugárterápia) olyan betegek számára, akiknél a kiújulás magas kockázata áll fenn, ezért elengedhetetlen a prognózis biológiai tényezőjének azonosítása a magas relapszus kockázatú betegek kiválasztásához.

A klinikusok új vérvizsgálatot javasolnak, amely jelezné a betegség jelenlétét. Ez a diagnózis, de egyben prognózis is szolgálhat, lehetővé téve a kimetszés utáni maradék betegség értékelését. A szarkómák összetettsége miatt a WD-LPS és DD-LPS hatékony és megbízható biomarkerének non-invazív módszerekkel történő azonosítása kihívást jelent, de a klinikusok remélik, hogy projektjük hatékonyabb és betegbarátabb módszert kínál majd a szarkómák kimutatására. a betegség. Projektünk a klinikusok, kutatók és biostatisztikusok által biztosított kiegészítő szaktudásra támaszkodik szoros együttműködésben.

A klinikusok a közelmúltban jellemezték a p53 független Mdm2 fehérje új funkcióját a szerin metabolizmusban, amely alapvető szerepet játszhat az LPS kialakulásában. Pán-genom megközelítések révén a klinikusok jellemezték az Mdm2 új transzkripciós aktivitását, és kimutatták szerepét a rákos sejtek metabolizmusában. Ezek az adatok azt mutatják, hogy az Mdm2 jelenléte a kromatinban lehetővé teszi bizonyos aminosavak, például a szerin metabolizmusában és szállításában részt vevő gének transzkripciójának szabályozását.

Az endogén szerinkészletet az auxotrófia és a de novo szintézis közötti egyensúly tartja fenn, amelyek a sejttranszformáció során erősen deregulálódnak, hogy támogassák a rákos sejtek anabolikus szükségleteit. Az Mdm2-t az ATF család transzkripciós faktorai révén toborozzák a de novo szintézisben és szerintranszportban részt vevő célgénekben.

A klinikusok olyan biológiai teszt meghatározását javasolják az LPS prognózisára és diagnosztizálására, amely nem igényel invazív biopsziát. A vizsgálatban WD-LPS-ben vagy DD-LPS-ben szenvedő betegek vesznek részt, és a cél 100 beteg bevonása 2 éven keresztül.

A legújabb adatok alapján, amelyek azt mutatják, hogy az LPS növekedését a szerin metabolizmusának Mdm2 által közvetített szabályozása közvetíti, a klinikusok azt javasolják, hogy mérjék a szerin vérszintjét az LPS fejlődésének helyettesítő markereként. A szerin intracelluláris szintjének fenntartása érdekében az Mdm2 szabályozza mind a de novo szerinszintézist (olyan anyagcsereút, amely a glikolitikus intermedier 3-foszfo-glicerátot használja szerin előállítására a sejtekben), mind pedig a szerin auxotrófiával történő bejutását a sejtbe. Tekintettel az LPS méretére, amely gyakran elérheti a több tíz centimétert is, a klinikusok azt feltételezték, hogy az LPS jelentős szerinigényt eredményezhet, amelyet a mikrokörnyezet termelhet, és a keringő szerin és glicin készletek révén továbbíthat a daganatba (amelyek lehetnek -a sejtek szerinné alakítják). A plazma aminosavak profilozása nagy klinikai érdeklődésre tart számot, mivel folyadékkromatográfiával (HPLC) könnyen mérhetőek. A klinikusok már validáltak egy HPLC-módszert a szérumban található különböző aminosavak, köztük a szerin és a glicin mérésére. Előzetes adataink egybevágnak hipotézisünkkel, mivel a szérum szerinszint magasabb a beteg tumoros xenograft egereiben, mint a kontroll egerekben mért szérumszinteknél. Ezenkívül a tumornövekedés drasztikus csökkenését kiváltó Mdm2 inhibitorral végzett kezelés hatására a keringő szerin csökkenése figyelhető meg.

A klinikusok a már kifejlesztett tömegspektrometriával párosított HPLC-t fognak használni az Agilent technológiából származó aminosavak mérésére. Az aminosavak kvantitatív elemzése a gyorsaságot és az érzékenységet a származtatási reakció és az analitikai technika megbízhatóságával ötvözi. Ezeket a célokat automatizált és online származékképzéssel érik el, o-ftálaldehidet (OPA) használva az elsődleges aminosavak, és 9-fluorenilmetil-kloroformiátot (FMOC) használva a szekunder aminosavakat. Az automatizált származtatás ezután beépül a robusztus HPLC elemzésbe. A teljes eljárás gyors, pontos, érzékeny és reprodukálható az Agilent 1190 HPLC segítségével.

A projekt fő célja egy új, nem invazív biológiai teszt azonosítása az LPS diagnosztizálására a keringő szerinszint mérésével. A jelenlegi aranystandard az Mdm2 erősítésének FISH általi észlelése.