Identificação de um Novo Biomarcador Sanguíneo para o Diagnóstico e Prognóstico de Lipossarcomas (ESPACE)

Os sarcomas são doenças raras, representando menos de 1% de todas as doenças malignas em adultos¹. Sua incidência é de cerca de 6 novos casos por 100.000 habitantes por ano, ou seja, 4.000 a 5.000 novos casos estimados por ano na França.

O lipossarcoma (LPS) é o subtipo mais comum de sarcoma de tecidos moles, representando aproximadamente 15% de todos os sarcomas.

A classificação da OMS distingue 5 categorias de LPS: mixóide, pleomórfico, lipossarcoma de células redondas, indiferenciado (DD-LPS) e bem diferenciado (WD-LPS). A equipe de pesquisa está interessada nos dois últimos neste estudo.

A suspeita diagnóstica é feita nos exames de imagem (ressonância magnética para tumores de membros e TC para LPS retroperitoneal) que devem levar à discussão em um conselho de tumor multidisciplinar em um centro especializado para validar a biópsia para diagnóstico definitivo e definir a melhor rota de biópsia para evitar o risco de propagação. Na França, o tratamento de pacientes com sarcoma é organizado em torno da rede de 24 centros "NETSARC".

WD-LPS e DD-LPS podem ser difíceis de distinguir de tumores adiposos benignos e sarcomas indiferenciados, respectivamente. A análise molecular, baseada na detecção da amplificação do gene Mdm2 por Fluorescence in situ Hybridization (FISH) é atualmente o "padrão ouro". É realizado em uma biópsia do tumor. A biópsia é uma biópsia radiológica, pois é recomendada nas diretrizes para reduzir o risco de propagação da doença. O material que permite o diagnóstico é assim limitado dificultando a realização da morfologia, imuno-histoquímica e biologia molecular na mesma amostra. A outra limitação é que esse fragmento de tumor nem sempre reflete a heterogeneidade intratumoral.

O tratamento é cirúrgico com ressecção em monobloco por cirurgião especializado em sarcomas. Apesar da excisão cirúrgica, o risco de recorrência local e à distância é de aproximadamente 26% para lipossarcomas bem diferenciados⁵ e de até 59% para lipossarcomas retroperitoneais indiferenciados. Os fatores prognósticos para recorrência são a qualidade da excisão, tamanho do tumor, grau e localização retroperitoneal/membro. A problemática destes 2 tipos de lipossarcomas não é a mesma. No WD-LPS, a questão é saber o risco de recorrência em caso de ressecção R1 não planejada (representando aproximadamente 50% das cirurgias iniciais). De fato, uma revisão cirúrgica sistemática de todos esses casos é cara e mórbida, enquanto em 50% dos casos nenhum resíduo tumoral será encontrado na recuperação cirúrgica. Para o DD-LPS o problema é diferente porque a revisão cirúrgica deve ser sistemática em caso de cirurgia não-R0, mas é o risco de recidiva local apesar da cirurgia adequada e o risco metastático que devem ser avaliados para propor um tratamento adjuvante (quimioterapia e/ou radioterapia) a pacientes com alto risco de recidiva, tornando-se também fundamental a identificação de um fator biológico de prognóstico para selecionar pacientes com alto risco de recidiva.

Os médicos se propõem a identificar um novo exame de sangue que indicaria a presença da doença. Serviria então para o diagnóstico mas também prognóstico permitindo-nos avaliar a doença residual após cirurgia de excisão. Devido à complexidade dos sarcomas, identificar um biomarcador eficaz e confiável para WD-LPS e DD-LPS com métodos não invasivos é um desafio, mas os médicos esperam que seu projeto forneça um método mais eficiente e amigável para o paciente para a detecção de sarcomas. a doença. Nosso projeto conta com a experiência complementar fornecida por médicos, pesquisadores e bioestatísticos em estreita colaboração.

Os clínicos caracterizaram recentemente uma nova função da proteína Mdm2 independente de p53 no metabolismo da serina, que pode desempenhar um papel fundamental no desenvolvimento do LPS. Por meio de abordagens pan-genômicas, os médicos caracterizaram uma nova atividade transcricional de Mdm2 e demonstraram seu papel no metabolismo das células cancerígenas. Esses dados indicam que a presença de Mdm2 na cromatina permite controlar a transcrição de genes envolvidos no metabolismo e transporte de certos aminoácidos como a serina.

O pool endógeno de serina é mantido por um equilíbrio entre a auxotrofia e a síntese de novo, que são fortemente desregulados durante a transformação celular para atender às necessidades anabólicas das células cancerígenas. Mdm2 é recrutado via fatores de transcrição da família ATF em genes alvo envolvidos na síntese de novo e transporte de serina.

Os clínicos propõem identificar um teste biológico para o prognóstico e diagnóstico de LPS que não requeira biópsia invasiva. Os pacientes incluídos no estudo serão pacientes com WD-LPS ou DD-LPS, com o objetivo de incluir 100 pacientes em 2 anos.

Com base em dados recentes mostrando que o crescimento de LPS é mediado pela regulação mediada por Mdm2 do metabolismo de serina, os médicos propõem medir os níveis de serina no sangue como um marcador substituto para o desenvolvimento de LPS. Para manter o nível intracelular de serina, Mdm2 controla tanto a síntese de serina de novo (uma via metabólica que usa o intermediário glicolítico 3-fosfo-glicerato para gerar serina nas células) quanto a entrada da serina na célula por auxotrofia. Dado o tamanho do LPS, que muitas vezes pode atingir várias dezenas de centímetros, os médicos levantaram a hipótese de que o LPS pode resultar em demanda significativa de serina que pode ser produzida pelo microambiente e transmitida ao tumor por pools circulantes de serina e glicina (que podem ser interdependentes). -convertido em serina pelas células). O perfil de aminoácidos plasmáticos é de grande interesse clínico, pois são fáceis de medir por cromatografia líquida (HPLC). Os médicos já validaram um método de HPLC para medir diferentes aminoácidos, incluindo serina e glicina, no soro. Nossos dados preliminares estão de acordo com nossa hipótese, uma vez que o nível sérico de serina é maior nos camundongos xenoenxertados com tumor do paciente em comparação com os níveis séricos medidos nos camundongos controle. Além disso, em resposta ao tratamento com um inibidor de Mdm2, que induz uma redução drástica no crescimento do tumor, pode ser observada uma diminuição da serina circulante.

Os médicos usarão um HPLC acoplado à espectrometria de massa já desenvolvida para medir os aminoácidos da tecnologia Agilent. A análise quantitativa de aminoácidos combina rapidez e sensibilidade com a confiabilidade da reação de derivação e da técnica analítica. Esses objetivos são alcançados por derivatização automatizada e online usando o-ftalaldeído (OPA) para aminoácidos primários e 9-fluorenilmetil cloroformato (FMOC) para aminoácidos secundários. A derivação automatizada é então integrada à robusta análise de HPLC. O procedimento completo é rápido, preciso, sensível e reproduzível usando Agilent 1190 HPLC.

O principal objetivo deste projeto é identificar um novo teste biológico não invasivo para o diagnóstico de LPS por meio da medição dos níveis circulantes de serina. O padrão ouro atual é a detecção da amplificação do Mdm2 pelo FISH.