针对多发性硬化症患者的益生菌干预

1. 引言 2020年，全球多发性硬化症（MS）患者估计人数已增至280万，全球患病率为每10万人中35.9例[95%置信区间：35.87, 35.95]。这比2013年的估计值高出30%[1]。

   多发性硬化症（MS）是一种影响中枢神经系统（CNS）的复杂慢性自身免疫性疾病。疾病修饰疗法（DMTs）通过靶向免疫系统来减轻炎症和神经损伤，从而降低复发率、MRI病变和残疾进展，帮助管理MS。然而，它们的疗效、安全性和耐受性各不相同，存在显著的副作用，且在进展性MS中益处有限[2,3]。因此，症状的长期自我管理是治疗的关键部分。

   胃肠道与大脑之间的联系（即肠-脑轴）以及神经系统疾病中胃肠道症状患病率的增加已广为人知[4,5,6]。肠道微生物组的作用在神经系统疾病中正被日益探索，并在MS中受到越来越多的关注[7,8,9,10]。据报道，MS患者（PwMS）的肠道微生物组病原体负荷较重[11]，并且在组成和功能上与健康对照组不同[12,13]。许多减少的细菌产生短链脂肪酸（SCFAs），这可能驱动在PwMS中观察到的慢性炎症[12]。这些SCFAs也被认为影响疾病发作、复发率和总体预后[14]。

   益生菌被认为是一种以微生物组为靶点的疗法，通过调节肠道微生物组为疾病管理提供潜力[10]。当前研究益生菌在神经系统疾病中潜力的研究仍处于起步阶段，主要集中在临床前动物模型或关注特定机制或症状的小规模试验中。在PwMS中进行的少数研究表明，某些益生菌可能改善心理健康不佳等症状[15,16]。最近的研究评估了含有植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）的益生菌对MS症状的影响，报告了认知障碍、记忆和焦虑的改善[15]，研究建议医疗保健专业人员应考虑使用已批准的益生菌补充剂来帮助管理MS症状[10]。

   SymproveTM UK是一种市售益生菌，含有植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）并结合其他三种细菌菌株，在其他神经退行性疾病（如帕金森病）中显示出前景[18,19]。迄今为止，关于PwMS服用益生菌的可行性和可接受性的数据极少，初步数据表明其耐受性和安全性良好[20]。

   拟议项目旨在使用混合方法评估在PwMS中进行益生菌（SymproveTM UK）试验的可行性、可接受性、安全性和有效性[21]。

2. 材料与方法 2.1. 研究设计 这是一项混合方法单臂试验，旨在确定在PwMS中进行12周益生菌干预的可行性、可接受性、安全性，并探索其疗效。在此阶段未考虑随机对照试验（RCT）[22]，这种方法需要较少的参与者，并提供更具成本效益和伦理的方法。本研究经谢菲尔德哈勒姆大学研究伦理委员会批准（ER46295102）。研究设计概述见图1。

2.2. 参与者 2.2.1. 样本量 对于可行性和预试验，建议每个研究组的样本量在12至25之间[23,24]。考虑到15-25%的流失率，本单臂研究的目标样本量为25-30名参与者。

2.2.2. 纳入和排除标准 年龄18岁或以上、居住在英国、自我报告临床诊断为MS的成年人。排除标准包括：过去四周内出现症状复发或住院；快速进展的MS定义为过去一年内发生两次或更多致残性复发；免疫功能低下且需要使用类固醇（不包括服用抗CD20单克隆抗体[Ocrevus或Kesimpta]的PwMS）；2型糖尿病；心血管疾病、肾脏疾病、慢性胃肠道健康问题；怀孕或哺乳期；吞咽困难；过去三个月内使用过抗生素；过去四周内使用过益生菌；过去四周内使用过针对肠道健康的食品补充剂；以及如果医疗建议不使用益生菌。

2.2.3. 招募和设置 研究广告通过在线MS兴趣小组和口碑传播。对研究感兴趣的人由研究人员联系以检查资格。参与者信息表和同意书通过电子邮件或邮寄发送给潜在参与者。使用纸质或在线同意书从所有参与研究的受试者处获得知情同意。研究的所有方面均远程进行。研究文件、评估和益生菌邮寄至参与者偏好的地址。向参与者提供预付包装以寄回文件和评估。

2.3. 干预 向参与者提供12周供应的原味益生菌饮料（SymproveTM UK）。该益生菌是一种水基发酵谷物饮料，含有四种活细菌菌株：鼠李糖乳杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）（NCIMB 30174）、粪肠球菌（Enterococcus faecium）（NCIMB 30176）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）（NCIMB 30175）和植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）（NCIMB 30173）。在制造时，每70毫升份量提供至少100亿菌落形成单位（CFU）（50%乳杆菌属和50%肠球菌属）。

参与者需要在连续84天（12周）内，每天摄入70毫升益生菌饮料，尽可能在醒来后、空腹状态下，至少在第一次进餐前10分钟服用。延迟和错过的剂量记录在依从性日记中，错过的剂量在12周结束时补服。益生菌的预期急性副作用包括胀气增加、打嗝、腹部胀气、腹痛或不适、便秘和腹泻。这些副作用通常轻微且短暂，通常在常规使用益生菌的前2-3周内缓解。可能的副作用信息在参与者信息表中传达，并在参与前通过电话告知。

2.5. 评估和结果指标 2.5.1 主要结果指标 招募、保留和依从性 在整个项目期间监测招募、保留和依从率。招募报告为表达兴趣的参与者中符合条件者的百分比。保留报告为完成研究所有方面的参与者百分比。依从性通过纸质日记监测，包括错过/延迟剂量的原因。

安全性 参与者在纸质日记中记录任何潜在副作用。此外，研究人员在干预的第一、第二和第六周通过电话或电子邮件联系每位参与者，根据良好临床实践指南监测潜在副作用和不良事件。

可接受性 干预后的回顾性可接受性使用基于可接受性理论框架（TFA）的七项问卷评估[25]。问卷领域包括情感态度、负担、伦理性、干预连贯性、自我效能、机会成本和总体可接受性。此外，进行了两个在线焦点小组，以更详细地探索可接受性，并获取关于研究程序和效果的定性反馈。焦点小组访谈脚本由TFA指导[21,25]。焦点小组主题指南由在该领域工作的研究人员和从业者制定。

2.5.2. 次要结果指标 次要结果数据在干预前（第0周）和干预后（第12周）收集。

健康相关症状评估和认知功能 在基线和干预后评估以下结果指标：MS相关生活质量（MSQoL-54）[26]、健康相关生活质量（EuroQol-5D-3L）[27,28]、心理健康（短版华威-爱丁堡心理健康量表[SWEMWS]）[29]、功能能力（患者确定的疾病步骤[PDDS]）[30]、肠道症状（肠易激综合征严重程度评分系统[IBS-SSS]）[31]、疲劳（改良疲劳影响量表[MFIS]）[32,33]。认知功能使用韦氏成人智力量表（第四版英国版[WAIS-IV]）的自评子量表评估[34.35]。

生活方式行为 要求参与者在试验期间保持其通常的生活方式行为，以减少对肠道微生物组的额外影响。在干预前后监测身体活动和饮食，以确定在12周期间是否发生可能影响肠道微生物组的显著变化。身体活动水平使用国际身体活动问卷短版（IPAQ-SF）评估[36]。参与者在干预前后还完成了一份4天饮食日记（两个周末和两个工作日），以确定饮食一致性。使用Nutritics软件（版本6）进行分析。Nutritics是一个基于云端的食品数据管理软件平台，提供详细的营养分析。

粪便样本可接受性 在家采集粪便样本的可接受性记录为提供的样本数量和适合分析（16s DNA测序）质量的样本百分比。在干预前后使用市售粪便样本采集套件（Biomesight，英国）收集粪便样本。所有样本由参与者在完成问卷、认知评估和4天食物日记后的七天内采集。粪便样本用拭子采集，然后插入收集管中并与保存液混合30秒。丢弃收集拭子后，密封收集管盖并剧烈摇晃10秒。然后将收集管密封在标本袋中，使用预付包装邮寄至Biomesight实验室。样本用Zymo Research的DNA Shield保存，并至少可稳定保存1个月。所有样本在1-2周内收集和处理，记录收集和处理日期。

此处研究人员报告了此过程对PwMS的可接受性，详细的微生物组分析正在进行中，并将适时报告。

2.6. 数据分析 使用混合方法评估干预的可行性、可接受性、安全性和初步疗效。可接受性理论框架（TFA）问卷数据使用描述性统计总结。此外，根据Lancaster等人（2004）为预试验和可行性研究推荐的方法[37]，进行了初步假设检验以比较干预前后得分。对于参数有序和连续数据，使用配对样本t检验确定干预前后结果的差异。干预前后生活方式数据（身体活动和饮食）按上述方法评估。最后，焦点小组的录音由第三方转录公司逐字转录。使用TFA的七个领域作为指导进行演绎主题分析[38]。然后由三名研究人员验证和细化主题。