Hodnocení perifolikulární vaskularity při oplodnění in vitro

Do divokého protokolu bude zařazeno 111 žen s tubárním faktorem nebo nevysvětlitelnou neplodností podstupujících IVF programy na našem oddělení. Následně budou zařazení pacienti rozděleni do dvou různých dílčích protokolů hodnotících roli perifolikulární vaskularity u pacientů s dobrou a špatnou prognózou. Diagnóza bude stanovena hysterosalpingografií a/nebo laparoskopickým barevným testem a analýzou spermatu partnera.

Všichni pacienti budou náhodně rozděleni do dvou nezávislých skupin (experimentální a kontrolní skupiny) pomocí počítačového softwaru a sekvence náhodného přidělení bude skryta v uzavřené a tmavé obálce, dokud nebudou přiřazeny intervence.

V samotné experimentální skupině bude v den odběru oocytů (36 hodin po injekci hCG) provedeno power dopplerovské hodnocení perifolikulární vaskularity. Vaskularita každého ovulačního folikulu bude postupně studována pomocí pokročilého softwaru pro analýzu obrazu a její rozšíření bude hodnoceno pomocí dobře ověřeného systému hodnocení. Periovulační folikuly budou rozděleny do kategorií vysokého stupně (3.-4. stupně) a nízkého stupně (1.-2. stupně).

Po sedaci pacientky IV propofolem budou oocyty odebrány nízkotlakou aspirační jehlou 17 G s dvojitým lumenem a individuálně kultivovány s označením zkumavky a následně kultivační destičky s kódem odpovídajícím stupni perifolikulární vaskularity. Získané oocyty budou promyty a zralé oocyty, určené přítomností prvního polárního tělíska (metafáze II; oocyty MII), budou klasifikovány zkušeným biologem, který byl původně zaslepený k předchozí perifolikulární vaskularizaci. Konkrétně MII oocyty budou klasifikovány do tří skupin podle počtu anomálií: stupeň I, oocyty bez jakékoli anomálie; stupeň II, oocyty s jednou anomálií; a stupeň III, oocyty s alespoň dvěma anomáliemi.

Tři oocyty s nejvyšším stupněm kvality budou považovány za "nejlepší" oocyty k oplodnění v kontrolní skupině, zatímco v experimentální skupině budou vybrány na základě integrujících morfologických a ultrasonografických kritérií. Embryolog použije zejména ultrasonografická kritéria k výběru v rámci oocytů s podobným morfologickým stupněm.

V obou skupinách budou tři MII oocyty inseminovány 4 hodiny po zotavení 10000-20000 pohyblivými spermiemi a umístěny do CO2 inkubátoru při teplotě 37 °C v 5% CO2 ve vzduchu a oplodnění bude vyhodnoceno o 18 hodin později a potvrzeno přítomností dvou pronukleí a dvou polárních těles. Oplodněné oocyty budou klasifikovány dobře standardizovaným skórovacím systémem pro zygoty a kultivovány po dobu celkem 48 hodin z IVF oocytů. Před transferem budou štěpená embrya opět klasifikována podle morfologie embrya a relativního podílu bezjaderných fragmentů přítomných v zona pellucida.

Všechna embrya, s výjimkou zastavených (neštěpených po 24 hodinách od IVF), budou u každého pacienta nahrazena bez ultrasonografického vedení pomocí ultraměkkého Frydmanova katétru. Luteální fáze bude podpořena podáváním 100 mg přírodního progesteronu denně. Stanovení β-hCG v séru bude provedeno 15. den po transferu embryí.

Pro každý cyklus budou zaznamenány hladiny estradiolu v séru a počet dominantních folikulů v den podání hCG, trvání ovariální stimulace a jednotky podaného r-FSH. V každém případě bude také hodnocena shoda mezi ultrasonografickým skóre gradingu a stupněm oocytů.

Zrušené cykly (případy absence folikulární odpovědi po 35 dnech léčby nebo hodnota E2 v séru >2500 pg/ml), oplodnění (procento oplodněných oocytů / celkový počet oocytů), implantace (procento nitroděložních gestačních váčků / celkový počet přenesených embryí ), klinické (procento stoupajícího β-hCG se sonografickým průkazem nitroděložního gestačního vaku a srdeční aktivity plodu v 7. týdnu těhotenství / celkový počet nezrušených cyklů) a probíhající (procento vitálních těhotenství potvrzených ultrasonografií ve 12. týdnu gestačního věku / celkový počet nezrušených cyklů) bude u každé pacientky hodnocen počet těhotenství. V obou skupinách bude rovněž zaznamenáván počet vícečetných těhotenství a ovariálních hyperstimulačních syndromů (OHSS).