Valutazione della vascolarizzazione perifollicolare nella fecondazione in vitro

Centoquattordici donne con fattore tubarico o infertilità inspiegabile sottoposte a programmi di fecondazione in vitro nel nostro dipartimento saranno arruolate in un protocollo selvaggio. Successivamente, i pazienti arruolati saranno divisi in due diversi sottoprotocolli valutando il ruolo della vascolarizzazione perifollicolare nei pazienti con prognosi buona e cattiva. La diagnosi sarà stabilita mediante isterosalpingografia e/o colorante laparoscopico e con l'analisi del liquido seminale del partner.

Tutti i pazienti saranno assegnati in modo casuale in due gruppi indipendenti (gruppi sperimentali e di controllo) utilizzando un software per computer e la sequenza di assegnazione casuale sarà nascosta in una busta chiusa e scura fino all'assegnazione degli interventi.

Nel solo gruppo sperimentale, verrà eseguita una valutazione power Doppler della vascolarizzazione perifollicolare il giorno del prelievo degli ovociti (36 ore dopo l'iniezione di hCG). La vascolarizzazione di ciascun follicolo ovulatorio sarà successivamente studiata utilizzando un software avanzato di analisi delle immagini e la sua estensione sarà classificata utilizzando un sistema di classificazione ben validato. I follicoli periovulatori saranno classificati in alto grado (gradi 3-4) e basso grado (gradi 1-2).

Dopo sedazione della paziente con propofol EV, gli ovociti saranno prelevati mediante ago da aspirazione a doppio lume da 17 G a bassa pressione e coltivati ​​individualmente contrassegnando la provetta e, successivamente, la piastra di coltura con un codice corrispondente al grado di vascolarizzazione perifollicolare. Gli ovociti recuperati saranno lavati e gli ovociti maturi, determinati dalla presenza di un primo corpo polare (ovociti in metafase II; MII), saranno classificati da un biologo esperto inizialmente all'oscuro di una precedente vascolarizzazione perifollicolare. In particolare, gli ovociti MII saranno classificati in tre gruppi in base al numero di anomalie: grado I, ovociti senza alcuna anomalia; grado II, ovociti con un'anomalia; e grado III, ovociti con almeno due anomalie.

I tre ovociti con il grado più alto saranno considerati "i migliori" ovociti da fecondare nel gruppo di controllo, mentre nel gruppo sperimentale saranno selezionati integrando criteri morfologici ed ecografici. In particolare, l'embriologo utilizzerà i criteri ecografici di scelta all'interno di ovociti con grado morfologico simile.

In entrambi i gruppi, tre ovociti MII saranno inseminati 4 h dopo il recupero con 10000-20000 spermatozoi mobili e posti nell'incubatore a CO2 a una temperatura di 37°C in 5% CO2 in aria, e la fecondazione sarà valutata 18 h dopo e confermato dalla presenza di due pronuclei e due corpi polari. Gli ovociti fecondati saranno classificati con un sistema di punteggio ben standardizzato per zigoti e coltivati ​​per un totale di 48 ore da ovociti IVF. Prima del trasferimento, gli embrioni di clivaggio saranno nuovamente graduati in base alla morfologia embrionale e alla relativa proporzione di frammenti anucleati presenti nella zona pellucida.

Tutti gli embrioni, ad esclusione di quelli arrestati (non tagliati dopo 24 ore dalla fecondazione in vitro), saranno sostituiti in ogni paziente senza guida ecografica utilizzando un catetere Frydman ultrasoft. La fase luteale sarà supportata da 100 mg di progesterone naturale somministrati giornalmente. Una valutazione della β-hCG sierica verrà eseguita il 15° giorno dopo il trasferimento degli embrioni.

Per ogni ciclo verranno registrati i livelli sierici di estradiolo e il numero di follicoli dominanti nel giorno della somministrazione di hCG, la durata della stimolazione ovarica e le unità di r-FSH somministrate. Verrà valutata caso per caso anche la concordanza tra il grading ecografico e il grado ovocitario.

Cicli annullati (casi di assenza di risposta follicolare dopo 35 giorni di trattamento o valore di E2 sierico >2500 pg/ml), fecondazione (percentuale di ovociti fecondati/totale ovociti), impianto (percentuale di sacchi gestazionali intrauterini/totale embrioni trasferiti ), clinica (percentuale di β-hCG in aumento con evidenza ecografica di sacco gestazionale intrauterino e attività cardiaca fetale a 7 settimane di gravidanza / cicli totali non annullati) e in corso (percentuale di gravidanze vitali confermate da ecografia a 12 settimane di età gestazionale / totale dei cicli non annullati) saranno valutati i tassi di gravidanze in ciascuna paziente. In entrambi i gruppi verrà registrato anche il numero di gravidanze multiple e di sindromi da iperstimolazione ovarica (OHSS).