Avaliação da vascularização perifolicular na fertilização in vitro

Cento e quatorze mulheres com fator tubário ou infertilidade inexplicável submetidas a programas de fertilização in vitro em nosso departamento serão inscritas em um protocolo selvagem. Sucessivamente, os pacientes inscritos serão divididos em dois subprotocolos diferentes avaliando o papel da vascularização perifolicular em pacientes de bom e mau prognóstico. O diagnóstico será estabelecido por histerossalpingografia e/ou laparoscopia e análise de sêmen do parceiro.

Todos os pacientes serão alocados aleatoriamente em dois grupos independentes (grupos experimental e controle) por meio de um software de computador, e a sequência de alocação aleatória será ocultada em envelope fechado e escuro até que as intervenções sejam designadas.

Somente no grupo experimental, uma avaliação Doppler de potência da vascularização perifolicular será realizada no dia da coleta do oócito (36 h após a injeção de hCG). A vascularização de cada folículo ovulatório será estudada sucessivamente usando um software avançado de análise de imagem e sua extensão será graduada usando um sistema de classificação bem validado. Os folículos periovulatórios serão categorizados em alto grau (graus 3-4) e baixo grau (graus 1-2).

Após sedação da paciente com propofol IV, os ovócitos serão retirados com agulha de aspiração de duplo lúmen 17 G a baixa pressão e cultivados individualmente marcando o tubo de ensaio e, sucessivamente, a placa de cultura com código correspondente ao grau de vascularização perifolicular. Os oócitos recuperados serão lavados e os oócitos maduros, determinados pela presença de um primeiro corpúsculo polar (metáfase II; oócitos MII), serão classificados por um biólogo experiente inicialmente cego para vascularização perifolicular prévia. Em particular, os oócitos MII serão classificados em três grupos de acordo com o número de anomalias: grau I, oócitos sem nenhuma anomalia; grau II, ovócitos com uma anomalia; e grau III, oócitos com pelo menos duas anomalias.

Os três ovócitos com maior grau serão considerados "os melhores" ovócitos para fertilizar no grupo controle, enquanto no grupo experimental serão selecionados integrando critérios morfológicos e ultrassonográficos. Em particular, o embriologista usará os critérios ultrassonográficos para escolher dentro de oócitos com grau morfológico semelhante.

Em ambos os grupos, três oócitos MII serão inseminados 4 h após a recuperação com 10000-20000 espermatozóides móveis e colocados na incubadora de CO2 a uma temperatura de 37°C em 5% de CO2 no ar, e a fertilização será avaliada 18 h depois e confirmado pela presença de dois pró-núcleos e dois corpos polares. Os oócitos fertilizados serão classificados com um sistema de pontuação bem padronizado para zigotos e cultivados por um total de 48 h a partir de oócitos FIV. Antes da transferência, os embriões clivados serão novamente classificados de acordo com a morfologia do embrião e a proporção relativa de fragmentos anucleados presentes na zona pelúcida.

Todos os embriões, com exceção dos parados (não clivados após 24 h da fertilização in vitro), serão substituídos em cada paciente sem orientação ultrassonográfica usando cateter ultrasoft Frydman. A fase lútea será suportada pela administração diária de 100 mg de progesterona natural. Uma avaliação sérica de β-hCG será realizada no 15º dia após a transferência dos embriões.

Para cada ciclo, serão registrados os níveis séricos de estradiol e o número de folículos dominantes no dia da administração de hCG, a duração da estimulação ovariana e as unidades de r-FSH administradas. A concordância entre o escore ultrassonográfico e o grau oocitário também será avaliada em cada caso.

Ciclos cancelados (casos de ausência de resposta folicular após 35 dias de tratamento ou valor sérico de E2 >2500 pg/ml), fertilização (percentagem de oócitos fertilizados/oócitos totais), implantação (percentagem de sacos gestacionais intra-uterinos/total de embriões transferidos ), clínica (porcentagem de aumento de β-hCG com evidência ultrassonográfica de saco gestacional intrauterino e atividade cardíaca fetal às 7 semanas de gestação / ciclos totais não cancelados) e contínua (porcentagem de gestações vitais confirmadas por ultrassonografia às 12 semanas de idade gestacional / total de ciclos não cancelados) as taxas de gravidez serão avaliadas em cada paciente. O número de gestações múltiplas e síndromes de hiperestimulação ovariana (OHSS) também serão registrados em ambos os grupos.