Charakteristika dendritických buněk před a po bandáži žaludku

Obezita je i nadále hlavním zdrojem nemocnosti a úmrtnosti ve Spojených státech. Souvislost mezi obezitou a diabetem typu II je dobře známá. Několik studií naznačuje, že tuk může vyvolat zánětlivou reakci nízkého stupně, která může být zodpovědná za metabolické změny u obézních pacientů. Přesněji řečeno, určitý typ bílých krvinek, který způsobuje zánět nazývaný dendritické buňky, byl nalezen ve vysokých koncentracích v omentálním tuku. Tato buňka nebyla rozsáhle studována u lidských pacientů s morbidní obezitou, i když může hrát ústřední roli ve vývoji inzulinové rezistence. Chirurgická léčba obezity vede kromě hubnutí také ke snížení markerů zánětu. Mnohé z komorbidit morbidní obezity se zlepšují nebo jsou vyléčeny. Laparoskopická nastavitelná bandáž žaludku je bezpečnější než jiné procedury bypassu žaludku a vede k podobnému úbytku hmotnosti po 2 letech po operaci.

Velká část práce týkající se dendritických buněk u lidských subjektů byla věnována pacientům s Crohnovou chorobou. Jak profil cytokinů, tak charakteristiky dendritických buněk byly rozsáhle studovány u pacientů s Crohnovou chorobou, ale ne u obézních jedinců. Kromě toho nebyly tyto buňky po období hubnutí přehodnocovány.

Podrobnější analýza zánětu obezity a jeho následné řešení se snížením hmotnosti přispěje k rostoucímu množství informací na toto téma. Další práce umožní nahlédnout do patogeneze komorbidit obezity a může přispět k odhalení potenciální léčby těchto onemocnění. Dendritické buňky byly rozsáhle studovány na zvířecích modelech. Nyní známe specifické markery buněčného povrchu a signální dráhy pro tyto buňky, jejich reakce na stimulační faktory a jejich schopnost vylučovat protizánětlivé cytokiny, jako je IL-10. Doufáme, že tato zjištění převedeme na lidi.

Nyní se uznává, že chronický zánět nízkého stupně je kritickým prvkem vedoucím k inzulínové rezistenci v cílových buňkách inzulínu. Důkazy pro to jsou podstatné, včetně konzistentních měření zvýšených zánětlivých markerů v plazmě u inzulínové rezistence/diabetiků a hlodavců. Tento koncept byl dále potvrzen nedávným objevem, že obézní tuková tkáň obsahuje velké množství rezidentních makrofágů. Ve skutečnosti se v štíhlém stavu asi 10 % všech typů buněk v tukové tkáni skládá z makrofágů a toto číslo může u obezity dosáhnout až 50 %. Kromě toho třídění makrofágů tukové tkáně pomocí FACS na základě povrchových markerů ukázalo, že jde o subpopulaci makrofágů, která odpovídá za tento pozoruhodný nárůst. Tato subpopulace zahrnuje makrofágy, které jsou pozitivní na F4/80, CD11B a CD11C, a jsou tedy svým fenotypem podobné dendritickým. V literatuře jsou také zprávy, které naznačují, že viscerální tuková tkáň může být zvláště "zanícená" ve srovnání se subkutánní tukovou tkání a že zvýšená infiltrace makrofágy a zánětlivé markery jsou exprimovány ve viscerálním tuku. Novější důkazy, ve kterých je makrofágová zánětlivá dráha specificky deaktivována u knock-out myší, přesvědčivě demonstrují, že makrofág může být iniciačním nebo řídícím buněčným typem odpovědným za zánětlivou odpověď, která nakonec vede k systémové inzulínové rezistenci.

Tyto koncepty budou hodnoceny pomocí vzorků podkožního a viscerálního tuku získaných podle tohoto protokolu. Vzorky tukové tkáně budou štěpeny kolagenázou, aby se uvolnily všechny adipocyty a neadipocytové buněčné typy v tkáni. Pomocí diferenciální centrifugace a filtrace bude stromální vaskulární frakce (SVF) oddělena od adipocytů. SVF obsahuje makrofágy a tyto buňky podstoupí analýzu FACS založenou na expresi F4/80, CD11B a CD11C, aby se určil absolutní počet makrofágů v daném vzorku tukové tkáně a podíl klasických makrofágů oproti dendritickým buňkám makrofágy. Buňky pak budou tříděny a exprese zánětlivých markerů bude měřena v klasických makrofázích (F4/80 pozitivní, CD11B pozitivní, ale CD11C negativní) versus dendritické buňky (F480 pozitivní, CD11B pozitivní a CD11C pozitivní). Tato analýza bude zahrnovat přímé měření exprese cytokinů těmito buňkami (TNF, IL-1 a IL-6), stejně jako měření exprese mRNA složek zánětlivé dráhy na bázi PCR. Tato měření budou prováděna na podkožní a viscerální tukové tkáni získané v době prvotního chirurgického zákroku a také na vzorcích podkožní tukové tkáně při sledování po redukci hmotnosti.